图1图2

(1) 柯斯质粒可以作为基因工程载体的理由是具备____、________和启动子、终止子等。 

(2) 如图1所示柯斯克隆方案,宜采用________酶对真核基因进行酶切,采用_______酶对柯斯质粒进行酶切,经连接后图中____(选填“a”或“b”)将会被重新包装进入λ噬菌体;柯斯质粒作为载体可携带的真核基因长度范围为_。 

(3) 检测是否成功实现转化的实验思路是:将新包装的类似噬菌体去感染大肠杆菌,后者能够在含______的培养基上生长即为转化成功。 

(4) 从图中信息可知上述柯斯克隆方案存在的缺点是________________________________。 

下图是利用现代生物工程技术治疗遗传性糖尿病（基因缺陷导致胰岛B 细胞不能正常合成胰岛素）的过程设计图解，请据图回答：

（1）图中①、③所示的结构分别是______________ 、 内细胞团（或胚胎干细胞） 。

（2）图中②所示的生物工程技术分别是_____________。

（3）过程④的完成需要用到的基因操作工具有 __________________________。

（4）图示方法与一般的异体移植相比最大的优点是_______________________。

科学家将鼠体内的能够产生胰岛素的基因与大肠杆菌的DNA分子重组，并且在大肠杆菌中发现了胰岛素。如下图所示，请据图回答下列问题。

（1）图中②⑤③⑦表示通过_____________________________________________的途径，获得__________________的过程。

（2）图中③代表__________________，在它的作用下将_____________和___________切成______________________________末端。

（3）经⑨__________________的作用将⑦和⑥“缝合”形成⑧_________DNA分子。⑧往往含有_________基因，以便将来检测。

（4）⑪表示⑧随大肠杆菌的繁殖而进行_________。

（5）如在大肠杆菌细胞内发现了胰岛素，说明___________________________________。

(1) 图中三种质粒中不能作为目的基因载体的是_______,理由是____________、____________。 

(2) 在基因工程的操作过程中,需要检查目的基因是否重组到质粒中,应使用____酶切重组质粒,完全酶切后,进行电泳检测。若电泳图谱中出现长度为1.1 kb和5.6 kb,或者____kb和____kb的片段,则可判断该重组质粒已与目的基因重组成功。 

注:引物Ⅱ、Ⅲ上的x、y片段分别与N基因两端互补配对。

②将大量N基因片段与扩增得到的D₁片段、D₃片段置于PCR反应体系中进行扩增,得到的绝大多数扩增产物是____(选填“D₁—N”“D₁—D₃—N”“D₃—N”或“D₁—N—D₃”)。 

绞股蓝细胞中含有抗烟草花叶病毒(TMV)基因，可以合成一种抗TMV蛋白，叶片对TMV具有抗感染性。烟草是重要的经济作物，由于TMV的感染会导致大幅度减产。研究人员利用转基因技术培育出了抗TMV的烟草，主要流程如图所示，请据图回答下列问题。

(1)科学家首先从绞股蓝细胞中提取抗TMV基因转录的RNA，然后合成目的基因。图中过程①表示________，获得的DNA必须在两侧添加________和终止子，还要添加________酶能识别切割的碱基序列。

(2)由图分析，在过程③构建的重组Ti质粒上应该含有的标记基因是________基因，重组Ti质粒导入烟草体细胞的方法是________。

(3)在过程⑤培养基中需要添加卡那霉素、植物必需的各种营养成分和植物激素，以保证受体细胞能培养成再生植株。其中过程⑤添加卡那霉素的作用是________。

(4)在个体水平的鉴定过程中，可通过________的方法来确定植株是否具有抗性。

(1) 基因工程中运用的基因载体必需的元件有启动子、终止子、____、____等。 

(2) 过程②利用了“假病毒颗粒”具有____和能将DNA整合到受体细胞染色体DNA上特点。与正常病毒相比较,这种“假病毒颗粒”的主要特点是________

(3) 科学家利用ES细胞培育出转基因动物依据的主要原理是_________________,在利用合成培养基培养ES细胞时,还要加入______等天然成分。 

(4) 经鉴定,某嵌合小鼠产生的配子中有1/2带有外源基因,请写出利用该嵌合小鼠培育纯合转基因小鼠的思路:_________。 

(1) 苏云金芽孢杆菌产生的毒蛋白,能有效杀死害虫。已知该基因的全部序列,科研人员可通过____法和PCR技术获得大量毒蛋白基因片段。据图分析,将毒蛋白基因和质粒连接获得重组质粒1的过程需要用到的工具酶是____________。 

​ABCD

(3) 将重组质粒2与感受态的白僵菌菌液混合进行转化,重组质粒2在白僵菌细胞内被修复。一段时间后用含有____的平板培养基进行筛选,获得含有Bar基因的重组白僵菌。 

(4) 提取上述重组白僵菌全部mRNA,加入____酶,获得cDNA,再加入毒蛋白基因引物进行PCR反应,根据是否有相应产物生成判断毒蛋白基因在白僵菌体内是否完成____。 

(5) 科研人员将重组白僵菌喷涂于植物叶片上,以此饲喂饥饿处理的害虫,记录单位时间内的______,以判断重组白僵菌的杀虫效果。 

  (1)在培育转入甲型H1N1病毒抗体基因牛的过程中，①过程需要的工具酶是_____________，②过程常用的方法是_____________。

  (2)转入甲型H1N1病毒抗体基因的牛可通过分泌乳汁来生产甲型H1N1病毒抗体，在基因表达中，甲型H1N1病毒抗体基因的首端必须含有________，它是________识别和结合的位点。③过程培养到桑椹胚或囊胚阶段，可以采用________技术，培养出多头相同的转基因牛。

  (3)prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因可制备单克隆抗体，Ⅰ最可能是________细胞，Ⅱ代表的细胞具有________________________________________的特点。

  (4)制备单克隆抗体也可以用动物细胞融合技术。与动物细胞融合过程不同，植物体细胞杂交在细胞融合之前要用________________对细胞进行处理。

[生物—选修3：现代生物科技专题]

   基因工程技术已成为生物科学的核心技术，限制酶被誉为基因工程中的“分子手术刀”。下图中的SmaⅠ、EcoRⅠ、BamHⅠ、HindⅢ都是限制酶，图中的箭头表示几种限制酶的酶切位点。回答下列问题：

（1）基因工程的核心是构建________。用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒时，不能使用SmaⅠ切割，原因是________。重组质粒中抗生素抗性基因可作为标记基因，原因是________。

（2）将目的基因导入植物细胞时，采用最多的方法是________。目的基因进入受体细胞后的表达过程中，启动子需与________识别和结合，从而驱动转录过程。最终目的基因是否成功翻译成蛋白质，常用________的方法进行检测，若出现杂交带，表明目的基因已形成蛋白质产品。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

在进行DNA亲子鉴定时，需大量的DNA，PCR技术（图示）可以使样品DNA扩增，在很短的时间内将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使实验室所需的遗传物质不再受限于活的生物体。基因工程也常用该技术扩增目的基因。

（1）进行DNA亲子鉴定时，首先需要用________将待测的样品DNA切成片段，然后用电泳的方法将这些片段分开，最后形成DNA指纹帮助确认身份。

（2）PCR技术的原理是________，甲过程所需要的条件是________，完成乙、丙过程需要反应体系提供________、________、________等物质。

（3）利用PCR技术扩增目的基因，要有一段________，以便合成a、b。若下图为第一轮循环产生的产物。请在下图e、f链上绘出以c链和d链为模板经PCR扩增的产物。

若继续循环，该DNA片段共经过________次循环后刚好能形成所需目的基因。该基因用于基因工程不能直接导入受体细胞，而是需要构建________，目的是________。