（1）从牛的组织获得单个细胞，通常需要用______________酶处理。

（2）将人血清蛋白基因导入牛的受精卵常用的方法是___________________。

（3）未受精的卵应培养到______期，将细胞核和去核卵细胞组装的技术称为___________，在该过程中要用____________使两细胞融合，构建重组胚胎。

（4）在胚胎发育过程中，____________将发育成转基因牛的各种组织，如果要求转基因牛大批量生产人血清蛋白，则要求获取组织的牛性别是_______。

人组织纤溶酶原激活物(htPA)是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下：

（1）htPA基因与载体构建重组表达载体需要用到的工具酶有__________。基因表达载体中除了要有目的基因以外，还要有启动子，它是_________识别和结合点部位；除上述外还需有_____________________。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用____________技术。

（2）为获取更多的卵(母)细胞，要对供体母羊注射促性腺激素使其超数排卵，采集的卵子必须发育到________(时期)；采集的精子需要经过________处理，才具备受精能力。

（3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是__________。生产上常用________期的胚胎进行移植；为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行___________。利用______________技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的全能性。

（4）若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到__________，说明目的基因成功表达。

​（5）如果利用上述方法培育出的蕃茄不具抗软化性状，经分子杂交技术检测，发现细胞内有抗PG存在，但检测不到mRNA2分子，可能原因是目的基因（抗PG）上游缺少___________。

转基因抗病香蕉的培育过程如下图所示。图中PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等为限制酶，质粒和抗病基因上的箭头表示限制酶的切割位点。下表示四种限制酶的识别序列及酶切位点，据图回答下列问题。

（1）若要获得抗病基因，可用_____________限制酶切，不能用限制酶SmaⅠ对图中对应的位点进行切割，因为若在SmaⅠ位点进行切割会_________________。切割质粒与获取目的基因用的是___________（相同、不同）的限制酶。切割好的质粒与目的基因需要在_______________酶的作用下形成含抗病基因的重组DNA分子。

（2）卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长。欲利用含卡那霉素的培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，重组质粒中应同时含有__________________基因作为标记基因。

（3）图中将重组DNA分子导入香蕉受体细胞用到的方法是_____________法。

（4）为了进一步确定目的基因是否翻译成蛋白质，可用的检测方法是________。

（5）图中导入抗病基因的香蕉组织块一般需要通过________________________的方法，可培育成能表现新性状的植株。图中①到②表示______过程，②到③表示______过程。

转基因草莓中有能表达乙肝病毒表面抗原的基因，由此可获得用来预防乙肝的一种新型疫苗，其培育过程如图所示(①至④代表过程，A至C代表结构或细胞)：

(1)②过程常用________处理农杆菌，使之成为________细胞，利于完成转化过程。

(2)图中③过程叫做________，④过程叫做________，将叶盘培养成草莓幼苗的技术是________，此技术是植物细胞工程的另一项技术：                 的基础。

(3)在分子水平上，可采用______的方法来检测转基因草莓果实提取液中有无相应的抗原，之前的导入检测方法是：_______________技术。如果目的基因是植物的抗盐碱性基因，则需将植株种植在盐碱地中观察生长状况，这属于 ____________水平的检测。

(4)从题中可以看出这种新型疫苗的化学本质是___________，在免疫学中属于________。

人血清白蛋白(HSA)具有重要的医用价值，只能从人血浆中制备。下图是以基因工程技术获取重组HSA(rHSA)的两条途径。

(1)为获取HSA基因，首先需采集人的血液，提取mRNA合成_________，然后以此为模板，采用___________________扩增HSA基因。

(2)启动子通常具有物种及组织特异性，构建在水稻胚乳细胞内特异表达rHSA的载体，需要选择的启动子是______________________。

(3)利用农杆菌转化水稻受体细胞的过程中，需添加酚类物质，其目的是________________________________________________________________________。

(4)人体合成的初始HSA多肽，需要经过膜系统加工形成正确的空间结构才能有活性。与途径Ⅱ相比，选择途径Ⅰ获取rHSA的优势是___________________________________。

(5)为证明rHSA具有医用价值，须确认rHSA与________的生物学功能一致。

图1图2

(1) 柯斯质粒可以作为基因工程载体的理由是具备____、________和启动子、终止子等。 

(2) 如图1所示柯斯克隆方案,宜采用________酶对真核基因进行酶切,采用_______酶对柯斯质粒进行酶切,经连接后图中____(选填“a”或“b”)将会被重新包装进入λ噬菌体;柯斯质粒作为载体可携带的真核基因长度范围为_。 

(3) 检测是否成功实现转化的实验思路是:将新包装的类似噬菌体去感染大肠杆菌,后者能够在含______的培养基上生长即为转化成功。 

(4) 从图中信息可知上述柯斯克隆方案存在的缺点是________________________________。 

PCR是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，它能以极少量的DNA为模板，在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝。如图是PCR过程示意图，请回答下列问题。

(1) PCR的中文全称是                    。在PCR过程中先用95℃高温处理的目的是                    ，而这一目的在细胞内是通过                    实现的。

(2)引物是PCR过程中必须加入的物质，从化学本质上说，引物是一小段                    。若将1个DNA分子拷贝10次，则至少需要在缓冲液中加入                    个引物。

(3)图中引物延伸需                    作为原料。DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸，这是由于                    。

(4)试列举PCR技术在现实生活中的应用。