9.
科学家运用基因工程技术将结核杆菌MPT64基因(能控制合成MPT64蛋白)成功导入胡萝卜细胞,最终表达出肺结核疫苗。回答下列问题:
(1)为获取MPT64基因,可从结核杆菌的细胞中提取对应mRNA,在___________的作用下合成双链cDNA片段,该cDNA片段_________(填“含有”或“不含有”)终止子。
(2)通常采用PCR技术扩增MPT64基因,前提是要有一段已知MPT64基因的核苷酸序列,原因是_________________,在操作步骤中需要加热至90~95℃的目的是__________。
(3) 构建基因表达载体时,根据农杆菌的特点,常将MPT64基因插入Ti质粒的 ______,原因是___________________________________________。
(4)基因表达载体导入胡萝卜细胞后,要通过植物组织培养技术培育出幼苗,该技术在进行再分化时,除必要的营养供应和激素调节外,还必须给光照,原因是_____________________。该技术要求无菌操作,其目的是________________________________________。
(5) 要确认MPT64基因是否在胡萝卜植株中表达,应检测胡萝卜植株中是否含有______。
(6)科学家探知,若能把MPT64蛋白第20位和第24位的氨基酸都改变为半胱氨酸,可以更好保证所生产的肺结核疫苗分子的稳定性。该实例的操作_________(填“属于”或“不属于”)蛋白质工程,理由是__________________________________________________________。