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            • 1． 某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌和酵母菌混合在一起．请你完成分离得到纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌的实验步骤，并回答有关问题：
              （1）主要步骤：
              ①制备两种培养基：一种是    培养基，另一种    的培养基．分别分成两份，依次标上A、A′和B、B′，备用．
              ②分别向A、B培养基中接种    ．
              ③接种后，放在恒温箱中培养3～4天．
              ④分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌种，接种到A′、B′培养基中．
              ⑤接种后，把A′、B′培养基放入恒温箱中培养3～4天．
              （2）回答问题：
              第④⑤两个步骤的目的是    ．
              在步骤①中，为保证无杂菌污染，实验中应采用的主要措施有    、    、    ．
              难度：中等
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            • 2． 在农业生产中发现一种广泛使用的除草剂（含氮有机化合物）在土壤中不易降解，长期使用可污染土壤．为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明）．

              （1）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理．现有1L土壤浸出液，用无菌吸管吸取1mL样液至盛有9mL无菌水的试管中，依次稀释103稀释度．各取0.1mL已稀释103倍的水样分别接种到三个培养基上培养，记录的菌落数分别为55、56、57，则每升原土壤浸出液样中菌体数为    ．
              （2）要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，从用途方面来看，上述培养皿中培养基的成分特点是    ．
              （3）接种技术的核心是    ，是研究和应用微生物的前提．在划线接种时，连续划线的目的是将聚集的菌种逐步    ，培养时，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是    或有氧条件抑制了这些细菌的生长．
              （4）在培养基上形成的菌落中，无透明带菌落利用的氮源主要是    ，有透明带菌落利用的氮源主要是    ，据此可筛选出目的菌．实验结果如图2显示的A～E五种菌株中，    是最理想菌株．
              （5）科研人员用放射线处理该细菌获得两个突变株A和B，然后对突变株A和B进行实验，结果如表所示：
              接种的菌种一般培养基实验处理及结果
              A不生长添加营养物质甲，能生长
              B不生长添加营养物质乙，能生长
              A+B能生长不添加营养物质甲、乙就能生长
              突变株A不能在一般培养基上生长的原因是    ．突变株A和B混合在一起接种于一般培养基中能生长的最可能原因是    ．
              难度：中等
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            • 3． （2016春•盐城校级期中）为了调查赣江的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌的分离等工作．回答下列问题：
              （1）制备实验所需的培养基时，在各成分都溶化后和分装前，要进行的是    和灭菌，对培养基进行灭菌的常用方法是    ．倒平板时要待平板冷凝后，将平板倒置，其主要原因是    ．
              （2）该小组可采用如图②所示的    （方法）检测水样中的细菌含量．在接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是    ；然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37．据此可得出每升水样中的活菌数．
              （3）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌．操作时，接种环通过灼烧灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线．这样做的目的是    ．
              （4）在纯化过程中，在固体培养基上划线分离过程中，正确的操作是    ．
              A．每次划线时，接种环都需要蘸菌液一次
              B．划线分离时，需要把接种环深入到培养基中进行接种
              C．划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连
              D．在超净平台中进行接种时，不能关闭过滤风．
              难度：中等
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            • 4． （2016春•枣阳市校级期中）醋酸菌是食品工业中常用的微生物，不仅可用于生产醋酸，某些类型还可用于生产细菌纤维素．回答下列问题：
              （1）醋酸菌在缺少糖源的情况下，可将乙醇氧化为    ，进而生成醋酸．进行醋酸发酵时，为了维持醋酸发酵培养液pH的相对稳定，可向培养液中加入    ．
              （2）筛选接种时，为了避免环境中微生物的污染，实验操作应在    附近进行；某同学采用平板划线法进行接种，在适宜条件下培养一段时间后．发现一个培养皿中某部位的菌落分布呈沟槽状，与其他部位的菌落分布有明显差异，其原因最可能是划线时该部位    ．
              （3）鉴定菌种的依据通常包括菌落的形状、大小    等菌落特征．将鉴定的菌种进行临时保存时，可在低温下使用试管斜面保存，但该方法除保存时间短外，菌种还易    ；若需较长时间保存菌种，可用的方法是    ．
              （4）利用筛选出的优质菌种进行生产时．研究人员测得培养过程中的细菌纤维素产量、培养液中的残糖量和残氮量如图所示．图中代表培养液中残氮量的是    曲线．与B曲线相比，A曲绂下降更快的主要原因是    ．
              难度：中等
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            • 5． 有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境．研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解． 分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如图甲、乙所示．

              （1）微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、    、    四类，该实验所用的培养基以    为碳源．从功能上看，该培养基属于    培养基．
              （2）制备培养基的过程中，平板冷凝后，需将培养皿倒置，其原因是    ．
              （3）纯化菌种时可采用平板划线法进行接种，接种环一般通过    灭菌，在第二次及其后的划线操作中，要注意    、    ．
              （4）为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液作图乙所示实验．该实验的假设是    ．该实验设计是否合理？    ，为什么？    ．
              难度：中等
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            • 6． （2016春•江阴市期中）为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作．回答下列问题：
              （1）该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量．在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是    ；然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37．据此可得出每升水样中的活菌数为    ．
              （2）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌．操作时，接种环通过    方法灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次划线的末端开始划线．这样做的目的是    ．
              （3）示意图A和B中，    表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果．
              （4）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养．结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快．分析其原因是：振荡培养能提高培养液中    的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高    的利用率．
              难度：中等
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            • 7． 如图是我国利用基因工程方法生产人生长激素的示意图．图中的质粒是基因工程中常选用的载体--pBR322质粒，ampR表示青霉素抗性基因，tetR表示四环素抗性基因，限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同．据图回答下列问题：

              （1）为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，③过程采用的酶是    ，④过程采用的酶是    ．
              （2）为了提高⑤过程的成功率，常用    溶液处理大肠杆菌．作为受体的大肠杆菌细胞内，应不含    基因，以利于筛选出含重组质粒的受体菌．
              （3）如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ同时对质粒进行切割，假设同时只有任意两个位点被切断且每次机会相等，则形成的DNA片段有    _种，其中含有完整四环素抗性基因的DNA片段占_    _．
              （4）按照图示的操作，将三角瓶中的大肠杆菌先接种到甲培养基上，然后分别接种到乙和丙两个培养基的相同位置，一段时间后，菌落的生长状况如图所示．接种到甲培养基上的目的是筛选    的大肠杆菌．
              （5）能否利用人的皮肤细胞来完成①过程    ，原因是    ．
              难度：中等
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            • 8． 某校兴趣小组的同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验．实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察与计数．请回答与此实验相关的问题．
              （1）培养基中含有的蛋白胨、淀粉，分别为细菌培养提供    、    ．
              （2）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是    ，并在    条件下接种．
              （3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于      中培养，培养的温度设定在37℃．要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种    ，作为对照进行实验．
              （4）培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有多种细菌．一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越    ．
              （5）细菌培养产生的单个菌落在生态学中称为    ．
              难度：中等
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            • 9． 尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用．生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们试图探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并初步筛选到能降解尿素的细菌（目的菌）．培养基成分如表所示．请分析回答问题：
              KH2PO41.4g
              Na2HPO42.1g
              MgSO4•7H2O0.2g
              葡萄糖10g
              尿素1g
              琼脂15g
              将上述物质溶解后，用自来水定容到1000mL
              （1）此培养基能否用于植物组织培养？    ，理由是    ．
              （2）培养基中加入尿素的目的是    ，这种培养基属于    培养基．
              （3）在培养“目的菌”的实验过程中需要振荡培养，原因是    ．
              （4）分离培养细菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，常用的灭菌方法有    、    和    ．
              （5）将土壤样品经过梯度稀释后，涂布在培养基平板上，若培养基中存在有分解尿素的细菌，细菌合成的脲酶将尿素分解为    使pH增高，使其菌落周围会出现红色环带．细菌因没有    系统，其分泌酶与真核细胞蛋白质的分泌方式不同．
              难度：中等
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            • 10． （2016春•唐山校级期中）为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌的分离等工作．回答下列问题：
              （1）细菌生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、     四类．该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量．在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是    ；然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37．据此可得出每升水样中的活菌数为    ．
              （2）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌．操作时，接种环通过    灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线．这样做的目的是    ．
              （3）示意图A和B中，    表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果．
              （4）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养．结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快．分析其原因是：振荡培养能提高培养液的    的含量，同时可以使菌体与培养液充分接触，提高    的利用率．
              难度：中等
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