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            • 1. (15分)为了调查某河流的水质状况,某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量,并进行了细菌分离等工作。回答下列问题:

              (1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中细菌含量。在涂布接种前,随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间,这样做的目的是__________________________________________;然后,将1mL水样稀释100倍,在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液;经适当培养后,3个平板上的菌落数分别为39、38和37, 据此可得出每升水样中的活菌数为___________。

              (2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌,操作时,接种环通过___________灭菌,在第二次及以后的划线时,总是从上一次划线的末端开始划线,这样做的目的是_____________________________________________________。

              (3)示意图A和B中,________表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。

               (4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀,一部分进行静置培养,另一部分进行振荡培养,结果发现:振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是:振荡培养能提高培养液中________的含量,同时可使菌体与培养液充分接触,提高________的利用率。

            • 2.

              营养缺陷型菌株就是在人工诱变或自发突变后,微生物细胞代谢调节机制中的某些酶被破坏,使代谢过程中的某些合成反应不能进行的菌株。这种菌株能积累正常菌株不能积累的某些代谢中间产物,为工业生产提供大量的原料产物。以下是实验人员利用影印法初检氨基酸缺陷型菌株的过程。请回答下列问题:

              (1)过程①的接种方法为__________,与基本培养基(只含碳源、无机盐、水)相比,待测培养皿中的特有的成分有__________。

              (2)进行②过程培养时,应先将丝绒布转印至基本培养基上,原因是__________。从__________培养基上获得相应的营养缺陷型菌株。釆用影印法培养的优点是__________。

              (3)为了进一步完成对初检的营养缺陷型菌株的鉴定,实验人员进行了如下操作:

              ①用接种针挑取__________(选填“菌落A”或“菌落B”)接种于盛有完全培养液的离心管中,28℃振荡培养1〜2天后,离心,取沉淀物用__________洗涤3次,并制成菌悬液。

              ②吸取lmL菌悬液加入无菌培养皿中,倾注15mL融化并冷却至___________℃的基本培养基,待其冷凝后用记号笔在皿底划分五个区域,标记为A、B、C、D、E。

              ③在划分的五个区域上放入少量分组的氨基酸粉末(如下表所示),经培养后,观察生长圈出现的区域,从而确定属于何种氨基酸缺陷型。   

              组别

              所含氨基酸

              A

              组氨酸

              苏氨酸

              谷氨酸

              天冬氨酸

              亮氨酸

              B

              精氨酸

              苏氨酸

              赖氨酸

              甲硫氨酸

              苯丙氨酸

              C

              酪氨酸

              谷氨酸

              赖氨酸

              色氨酸

              丙氨酸

              D

              甘氨酸

              天冬氨酸

              甲硫氨酸

              色氨酸

              丝氨酸

              E

              半胱氨酸

              亮氨酸

              苯丙氨酸

              丙氨酸

              丝氨酸

              在上述鉴定实验中,发现在培养基A、D区域出现生长圈,说明该营养缺陷型菌株属于___________。

            • 3.

              下图表示细胞融合技术的一些过程。阅读下列材料,并简要回答下列问题。

              抗生素

              浓度

              (μg/ml)

              抗性

              I菌

              JD菌

              庆大霉素

              3

              利福平

              3

              卡那霉素

              3

              红霉素

              3

              (注“十”代表有抗性,“-”代表无抗性)

              材料一:近年来,细胞工程已进人高速发展阶段,已经成为生物学领域中一颗耀眼的明星。该工程可在细胞水平或细胞器水平上,按照人们的意愿获得新型生物或特种细胞产品。

              材料二:微生物采油的关键技术是获得性能优异的菌种,应用原生质体融合技术将两种微生物进行融合,构建耐中高温采油微生物引起了科学家的广泛关注。宋绍富等人选用细菌I和细菌JD先后进行了各自抗生素抗性以及融合实验的相关研究。研究发现,I菌与JD菌对不同抗生素的抗性是不同的,测量结果见上表。

              (1)上图中,若A细胞和B细胞均为植物细胞,细胞融合完成的标志是____________ ;形成的D细胞还要应用植物组织培养技术将其培养成植株。

              (2)上图中,若A细胞和B细胞均为动物细胞,与植物细胞融合相比,从A细胞和B细胞到C细胞的过程中,______________是诱导动物细胞融合特有的诱导因素,该过程说明了细胞膜具有_______________。

              (3)利用I菌和JD菌进行细胞融合时,首先应使用 _______________法去除菌体的细胞壁,将获取的______________保存在等渗溶液中待用。

              (4)在对I菌和JD菌融合后的融合子进行筛选时,比较理想的是在培养基中添加3μg/ml红霉素(或3μg/ml利福平)与_______________两种抗生素,此种培养基称为_____________。             

            • 4. 根据生物技术实践的有关知识,回答下列问题:
              (1)欲从土壤中分离出能高效降解有机磷农药的细菌,可在培养基中加入____________制成选择培养基进行分离;若想对初步筛选得到的目的菌进行纯化并计数,可采用的接种方法是___________。
              (2)微生物培养过程中,获得纯净培养物的关键是__________,其中对培养皿进行灭菌常用的方法是____________。
              (3)植物芳香油的提取可采用的方法有压榨法、_____和_____。
              (4)芳香油溶解性的特点是不溶于_____,易溶于_____。
            • 5.

              葡萄种植基地为解决葡萄滞销易腐烂问题,引进果酒、果醋生产线进行葡萄的深加工,获得了较好效益,其菌种筛选和生产流程如图所示。其中在纯化菌种A时,共接种了甲、乙、丙、丁、戊五个平板,每个平板接种量均为O.lmL。纯化菌种B釆用的是划线接种。请回答下列问题:


              (1)候选菌种A和B在细胞结构上的最大差别是菌种A有           。图中筛选菌种所用的培养基在灭菌时温度为           

              (2)纯化菌种A时,乙平板的菌落分布如上图所示,则纯化菌种A的接种方法为           ,接种乙平板时的操作失误是           

              (3)纯化菌种A的过程中,除乙平板外,其余的甲、丙、丁、戊平板的菌落数分别是180、 200、420、190,则样品中菌种A的密度为       个/mL,此方法计数的结果常常低于实际值,原因是                

              (4)果醋发酵与果酒发酵相比,提供的不同条件有                      

            • 6.

              土壤中含有大量的难溶性磷酸盐,为了从土壤中筛选出能够将难溶性磷酸盐转化为植物能吸收的可溶性磷的优良解磷菌株,以便将其添加到有机肥中,改善植物磷元素供应。科研人员进行如下实验:

              实验原理:

              固体培养基中难溶性磷酸盐在微生物的作用下溶解,会在菌落周围形成透明圈(如图),透明圈直径(D)与菌落直径(d)的比值(D/d)代表微生物溶解磷的能力大小。

              实验步骤:

              步骤1  取某地区土样5g制得土壤溶液后稀释,取稀释液1mL接种到基础培养基A上,在适宜温度下培养72h。

              步骤2 在基础培养基A上用接种环挑取代表性菌落再次接种,培养3~4d后观察菌落特征和透明圈的大小,初步筛选出三种优良解磷菌株(如表)。

              分析回答:

              (1)从物理形态看,培养基A属于_______培养基。培养基中磷源应该是______________。

              (2)步骤1中接种方法是__________________,步骤2中接种环的灭菌方法是________。

              (3)根据实验结果可以确定溶解磷能力最强的菌株是_____________。

              (4)为进一步测定初步筛选的三种菌株实际溶解磷的能力,研究人员将它们接种到基础培养基B中,并在37℃、200 r·min-1 摇床培养,定期取上清液,测定溶液中可溶性磷含量,得到下图所示曲线。

              ①用摇床进行培养的好处是___________________________________________。

              ②结果表明最优良的解磷菌株是_______________。

            • 7.

              I.现有五种不同的抗生素(甲、乙、丙、丁、戊),要测它们对金黄色葡萄球菌的作用效果。图1表示在均匀接种了金黄色葡萄球菌的固体培养基上,分别于不同位置加入2mg不同的抗生素的实验结果(图中●为添加点)。图2表示这五种抗生素对成人产生毒副作用的剂量。请回答:



                            图1                                                  图2


              (1)由图1可知,_______种抗生素的抗菌效果最好。

              (2)如果给予剂量为2mg,那么________种抗生素最适宜成人使用,理由是_____________。

              (3)已知丁种抗生素作用的原理是抑制金黄色葡萄球菌细胞壁的形成,由此推测该种抗生素对成人的毒副作用较小的可能原因之一是___________________________。

              (4)为保证培养基上能均匀地生长出一层金黄色葡萄球菌,将菌液接种到固体培养基上时宜进行____________(填“涂布平板”或“平板划线”)操作。实验过程中,与用于计数的平板接种不同的是本实验要保证滴加到培养基上的菌液_______________,以缩短培养时间。

              (5)本实验过程中所使用的无菌技术,除用来防止培养物(金黄色葡萄球菌)被其他外来微生物污染外,还能_______________。



              II.人血清白蛋白(HSA)具有重要的医用价值。科研人员通过生物工程技术获得转HSA基因母牛,以便通过乳腺生物反应器生产HSA,其主要技术流程如图1所示。请回答:


                                                          图1


              (1)如图1所示,将牛胎儿成纤维细胞核移入去核卵母细胞中,该技术称为_________技术;供核的牛胎儿成纤维细胞通常选用传代10代以内的细胞,其原因是_________________________。

              (2)胚胎移植时,为使代孕母牛能处于适合的生理状态,需要用激素对其进行_______处理。

              (3)采用SRY-PCR法进行性别鉴定的基本程序是提取牛胎儿成纤维细胞的DNA,经PCR反应体系扩增SRY基因(Y染色体上特有的性别决定基因)片段,然后用SRY特异性探针对扩增产物进行检测。

              ①PCR反应体系中除含缓冲液、模板DNA、dNTP(包含dATP、dCTP、dGTP、dTTP)、引物以外,还应含有____________;其中,dNTP的作用是____________________________________,引物应选用图2中的________(填图中标号,图2中I、II、III、IV是引物,箭头是延伸方向)。




                                            图2


              ②若扩增产物含大量SRY基因片段,则该种牛胎儿成纤维细胞______(填“能”或“不能”)用作图1所示技术流程中转化过程的受体细胞。

            • 8. 苯酚是工业生产排放的有毒污染物质,自然界中存在着能降解苯酚的微生物.某工厂产生的废水中含有苯酚,为了降解废水中的苯酚,研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株,筛选的主要步骤如图所示,①为土壤样品,请回答下列问题:

              (1)②中培养菌株的选择培养基中应加入________作为碳源,②中不同浓度碳源的培养基________(A.影响;B.不影响)细菌的数量,如果要测定②中活细菌数量,常采用______________法.

              (2)④为对照,微生物在④中不生长、在⑤中生长,④与⑤培养基的主要区别在于_______________;使用____________法可以在⑥上获得单菌落.采用固体平板培养细菌时进行倒置培养是为了防止                             .

            • 9.

              为了调查某河流的水质状况,某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量,并进行了细菌的分离等工作。回答下列问题:


              1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前,随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间,这样做的目的是                        ;然后,将1mL水样稀释100倍,在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液;经适当培养后,3个平板上的菌落数分别为393837。据此可得出每升水样中的活菌数为        


              2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。制备培养基前,培养皿最好通过           灭菌,操作时,接种环最好通过       灭菌,在第二次及以后划线时,总是从上一次的末端开始划线。这样做的目的是          


              3)示意图AB中,          表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。


              4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀,一部分进行静置培养,另一部分进行振荡培养。结果发现:振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是:振荡培养能提高培养液的_________的含量,同时可以使菌体与培养液充分接触,提高_________的利用率。


               


            • 10.

              利用紫外线诱变选育高产β━胡萝卜素的三孢布拉霉负菌(单细胞真菌),未突变菌不能在含有浓度为10﹣5M的β━紫罗酮的培养基上生长.菌体随β━胡萝卜素含量增加从黄色加深至橙红色.图甲为选育及提取获得β━胡萝卜素流程. 

              (1)三孢布拉霉负菌与细菌共同具有的细胞器是________.   

              (2)为选出高产突变菌种,还应在培养基中添加________.   

              (3)进行③过程时,应选取________色的菌落接种至液体培养基.为筛选纯化β━胡萝卜素产量高的菌种,采取重复________(填图甲中数字)过程.   

              (4)固体平板培养基经过程②接种培养后的菌落分布如图乙所示.该同学的接种方法是____。 

              (5)过程⑥是________,用纸层析法鉴定提取的胡萝卜素粗品,结果发现颜色较浅,导致该现象的原因可能是萃取时,_______________________________.(写出两点)

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