[生物——选修1生物技术实践]

   研究人员成功地从土壤中筛选到能产生纤维素酶的微生物。

（1）纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C₁酶、Cx酶和________酶。

（2）如果要对土壤中的纤维素分解菌进行计数，常采用________法进行接种培养，接种工具采用________灭菌的方法。

（3）常用的刚果红染色法有两种：第一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应；第二种是在________时就加入刚果红。________（选答“第一种”或“第二种”）方法会使菌落之间发生混杂。

（4）如果观察到产生________的菌落，说明可能获得了纤维素分解菌。为了确定是纤维素分解菌，还需要进行________的实验。纤维素酶的测定方法一般是采用对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的________进行定量的测定。

（1）巴氏消毒的方法是             。为检测消毒前后牛奶中细菌含量变化情况，做如图操作。用无菌吸管从三角烧瓶中吸取1 mL生牛奶稀释液至盛有9 mL无菌水的试管中，如此重复3次，将10mL生牛奶稀释到10^-4浓度后，取0.1mL滴在培养基上。

（2）将牛奶稀释液滴加在培养基上进行涂布，应选择的涂布工具是          。该涂布工具最合适的灭菌方法是____________。
  

 A．火焰灼烧    B．高温高压灭菌C．酒精擦拭    D．紫外线照射

（3）下图所示方法为稀释培养法，按此方法培养得到的3个培养皿中菌落数分别为25个、23个、24个，则生牛奶中每毫升含细菌数为________个。

（4）消毒后牛奶中绝大部分细菌被杀死，若用稀释培养法检测消毒后牛奶是否含有细菌，则在操作步骤上应作什么改动？__________________。 

（5）检测食品中大肠杆菌数量，可评价食品是否受到污染。下表培养基配方中，大肠杆菌能够生长的是______，理由是__________________。

（6）从生牛奶取样培养得到的菌落中，混有各种杂菌，从中检测出大肠杆菌的方法是在培养基中加入             ，具有              特征可以鉴别大肠杆菌。

为研究“某品牌酸奶中乳酸菌数量及其对抗生素耐药性情况”，

某同学进行了如下实验：

请分析回答下列问题：

(1)配制的细菌培养基除了含有水、碳源、氮源和无机盐等主要营养成分外，还应加如适量的________和琼脂。在培养基各成分溶化与灭菌之间，要进行的操作是________。

(2)接种微生物的方法有很多，图1中过程③所示的方法为________。用该方法统计样本菌落数时，同时需要做A、B、C三个培养皿，原因是________。用该方法统计样本菌落数后，

所得数据需要乘以10ⁿ后，才可表示乳酸菌的数量(单位：个／ml)，这里的n＝________。

(3)请完善“检测乳酸菌对青霉素、四环素耐药性”的实验操作步骤：

步骤1：分别取________加入三组无菌培养皿中，再加入灭菌并冷却到________℃左右的培养基，立即混匀，静置凝固成平板。

步骤2：向三组培养基中分别接种待检测的乳酸菌菌种。

步骤3：将接种后的三组培养基和一个________都置于适宜温度等条件下培养一定时间，观察比较培养基中菌落生长情况。

(1)检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，记录菌落数量，这种方法称为              。下面四种菌落分布图中，不可能由用该方法得到的是              。

(2)用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组？________。为什么？                                  。

(3)如分别取0.1 mL已稀释10³倍的水样分别涂布到三个琼脂固体培养基的表面进行培养，培养基记录到大肠杆菌的菌落数分别为55、56、57，则每升原水样中大肠杆菌数为________。

(4)大肠杆菌是自来水中常见的一种有害微生物，可以通过在稀释涂布平板中加入              指示剂，如果菌落呈       色，并带金属光泽，则说明自来水中含有大肠杆菌。

图1
(1)分解尿素的细菌能分泌_______酶，能将尿素分解成________。

(2)培养基中为“目的菌”生长提供氮源和碳源的物质分别来自________和________。

(3)图中将细菌转到固体培养基上时，应采用___     _____法接种以获得单个菌落。初步筛选出来的菌种还需要用生化的方法作进一步的鉴定，鉴定方法是检测初步筛选目的菌种培养基的pH，若pH________(降低/不变/升高)，说明该菌种能够分解尿素。

(4)微生物的计数：运用活菌计数法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是__________________________。

(5)微生物的鉴定：要从土壤样液中筛选出能降解除草剂(一种难以降解的含氮有机物)的细菌。已知：该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明。设计培养基配方时，从用途来看，除加入必需的营养成分外，还应____________；从物理性质来看，还应加入____________。接种培养后，依据培养基中是否产生____________来筛选能降解该除草剂的细菌。

 尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用．生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，为探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌）．培养基成分如下表所示，实验步骤如图所示．

（1）培养基中加入尿素的目的是 ______ ，从物理形态看，培养基属于 ______ 培养基．“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的 ______ 和 ______ ，为了满足图示锥形瓶中目的菌对氧气的需求，应采用的操作方法是 _______________________________．
（2）图中将细菌（非硝化细菌）转到培养基上时，应采用 ______ 法接种，获得单个菌落．接种环的灭菌方法是 ______ ．初步筛选出来的菌种，还需要用生化的方法作进一步的鉴定：在此培养基中接种并培养初步筛选的菌种，若PH ______ （降低/不变/升高），说明该菌种能够分解尿素．
（3）A同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落．若造成A同学实验结果的原因是培养基被杂菌污染．为了确定该原因，操作思路是 _________ ．

(1)从此培养基的配方来看，最适合培养下列哪种微生物？
A．酵母菌                                      B．硝化细菌

C．纤维素分解菌                             D．大肠杆菌

(2)微生物培养的培养基按照用途可以分为        和________，两种培养基的配方中一般都含有水、无机盐、________和________，培养基还需要满足微生物生长对特殊营养物质（如生长因子等）、________以及氧气的要求。

(3)稀释涂布平板法是微生物接种常用的方法之一，该法是将菌液进行________，然后将不同稀释度的菌液分别涂布在琼脂固体培养基的表面，进行培养。稀释条件足够时，可形成由单个细胞形成单个      ，因此可用于微生物的                                          。

(4)如果要进行土壤中分解尿素的细菌的分离，培养基中必须含有的成分是________，验证分解尿素的细菌是否存在，常用的方法是                                 。

(5)微生物接种的方法很多，在用平板划线法操作结束时，为什么仍需要灼烧接种环？
_________________________________。

 （1）此培养基能否用于植物组织培养？_________________________________________________，理由是___________________________________________________________.
（2）培养基中加入尿素的目的是　　　　　　　　，这种培养基属于　　　　　　　　培养基。
（3） “目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的　　　　和　　　　　　　　，实验需要振荡培养，原因是___________________________。

（4）转为固体培养时，常采用　　　　　　　　（方法）接种，获得单菌落后继续筛选。

（5）在进行分离分解尿素的细菌实验时，A同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的实验结果产生的原因可能有　　　　　　　　（填序号）。

①由于土样不同　②由于培养基污染　③由于操作失误

④没有设置对照

（6）在以尿素为唯一氮源的培养基中加入　　　　，细菌合成的　　　　将尿素分解为氨，pH增高，使指示剂变红色。

（7）某同学在稀释倍数为10⁶的培养基上测得平板上菌落数的平均值为234，那么每克样品中的菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL）__________________________。

（1）纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、Cx酶和　　　　酶。

（2）如果要对土壤中的纤维素分解茵进行计数，常采用　　　　　　法进行接种培养，接种工具采用　　　　　　灭菌的方法。

（3）常用的刚果红染色法有两种：第一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应；第二种是在　　　　　　时就加人刚果红。　　　　　　（选答“第一种”或“第二种”）方法会使菌落之间发生混杂。

（4）如果观察到产生　　　　　　的菌落，说明可能获得了纤维素分解茵．为了确定是纤维紊分解菌，还需要进行　　　　　　的实验。纤维素酶的测定方法一般是采用对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的　　　　　　进行定量的测定。