螺杆菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验基本步骤如下：

→→→→

请回答：

(1)在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为Hp含有脲酶，它能以尿素作为氮源；若有Hp，则菌落周围会出现________色环带。

(2)步骤X表示________。在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液涂布到培养基平面上。菌液稀释的目的是为了获得________菌落。

(3)在培养时，需将培养皿倒置并放在__________________中。若不倒置培养，将导致无法形成单菌落。

(4)临床上用¹⁴C呼气试验检测人体是否感染Hp，其基本原理是Hp能将¹⁴C标记的____________分解为NH₃和¹⁴CO₂。

回答下列(一)、(二)小题。

(一)请回答下列有关微生物培养、发酵过程中的相关问题。

(1)在“分离以尿素为氮源的微生物”的实验中，配制好的尿素固体培养基加上封口膜后用高压蒸汽灭菌方法灭菌，冷却后加入用_________漏斗过滤的尿素溶液。漏斗用后需用适宜浓度的___浸泡，再用蒸馏水冲洗，干燥后保存。 

(2)在“果汁中的果胶和果胶酶”实验中，可以用___(A.50%乙醇　B.70%乙醇　C.90%乙醇　D.95%乙醇)鉴别果胶。果胶酶可以从黑曲霉或______中提取，配制这些微生物的培养基时需要将pH调至____。

(3)果酒制作果醋过程中，通入空气需要经过_____过滤。果醋发酵结束的标志是pH_____。 

(二)下图表示动物细胞克隆和制备单克隆抗体的相关过程，请回答相关问题：

(1)过程①常应用____方法导入重组诱导基因后得到干细胞；部分干细胞经过诱导可分化成全身的不同组织或器官，说明这些细胞具有____性。在动物细胞培养过程中培养液中必须通入O₂和CO₂，通入CO₂的目的是__________。

(2)该过程中甲和乙细胞可经过生物诱导剂______的作用形成丙细胞。取一个丙细胞，放在含大量失去____的小鼠成纤维细胞的特定培养体系中培养，最后产生大量的细胞群，这种方法为____法。 

(3)下列关于经③和④过程得到单克隆抗体的叙述，错误的是_____。

A.该过程应用了细胞膜具有流动性的原理    B.该过程应用了动物细胞融合和动物细胞培养技术

C.丙细胞要具有分泌多种抗体的能力   D.丙细胞的形成先通过筛选得到杂交瘤细胞，再进行抗体检验

某生物兴趣小组通过测定土壤中的微生物的种类、含量等来了解其土质情况，并做了相关微生物的分离工作。回答相关问题。

⑴获得纯净培养物的关键是___________________________，这是研究和应用微生物的前提。

⑵从土壤中分离纤维素分解菌时，常从公园里、街道旁、花盆中的土壤或是农田、菜园土选取土壤时，原因是___________________________。

⑶该小组对某种菌进行扩大培养时等分为两组，A组静置培养，B组振荡培养。结果发现B组比A组的细菌要多得多，原因是_______________________________（答两点）。

⑷小组进一步发现，该土壤中只有一种真菌，欲使其从土壤中与其它细菌分离开，可在牛肉膏-蛋白胨培养液中加入___________。分离纯化后提取DNA测序发现含有产脲酶的基

因序列，请设计实验证明该种真菌可合成脲酶（简要说明实验步骤，结果，结论。相关试剂、仪器、菌种等都可提供）____________________

下表是筛选异养型细菌的培养基配方。回答下列问题：

(1)苯胺是致癌物质，土壤中有分解苯胺的异养型细菌，若要筛选此异养型细菌，则此培养基中的成分X除了为目的菌提供能源外，还能提供_________，该培养基从物理性质看属于________培养基。中学实验室中对培养基进行灭菌的常用方法是____________。接种前，用灭菌后未接种的培养基培养一段时间，观察是否形成菌落，目的是________________________________________________________________________。

(2)如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，获得图A效果的接种方法是____________________。运用获得图B效果的方法接种时，操作上应注意每次划线前要灼烧________。

(3)在以尿素为唯一氮源的培养基中加______________可初步鉴定该种细菌能否分解尿素；在筛选能够分解纤维素的微生物过程中，常用到________染色法。

（1）依物理性质，该培养基属于___________培养基，依用途划分，则属于____________培养基。

（2）根据培养基原料，所培养微生物的同化作用类型是_____________

(3)该培养基中的碳源是______________  。

(4)若用该培养基选择能分解尿素的细菌，应除去的物质有______________，应加入的物质是_________

（5）使用高压蒸汽灭菌锅灭菌加盖时，拧紧固定盖子的螺栓，注意要__________________，使螺栓松紧一致不漏气。加热灭菌锅时，要先________（关闭、打开）排气阀，使水沸腾，排除锅内的冷空气。通常是在温度为121 ℃、气压为100 kPa的条件下灭菌20分钟左右．灭菌完毕后，待压力表中指针指向0点、温度降至60℃以下后，取出灭菌物品。

如图为分离微生物的流程示意图，请据图回答问题：

（1）微生物培养时，选取_________________时的记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目．

（2）若要对分离的细菌做进一步的鉴定，还需借助物理化学的方法：若要鉴定是否有分解尿素的细菌，可以在以尿素为唯一氮源的培养基中加入_________指示剂，若指示剂变红，说明培养基的PH____________，这样可以鉴定这种细菌可以分解尿素；若要鉴定是否有分解纤维素的细菌，在长出菌落的培养基上，覆盖_________染液，10～15min后，倒去该染液，再加入1mol/L的NaCl溶液，15min后，也倒去该溶液，若菌落的周围出现__________，说明此细菌能分解纤维素．

（3）在 10⁵ 稀释度下求出 3 个平板上菌落数的平均值为63，那么，每克样品中的菌落数为_______________．

已有研究证实,在体外培养条件下耐药基因能够在不同种属的乳酸菌菌株中发生转移。鉴于此,科研小组对市售酸奶中的乳酸菌进行分离和鉴定,通过药物敏感性实验确定菌株的耐药谱,同时调查环丙沙星、庆大霉素、四环素等耐药基因在这些菌株中的分布情况,为乳酸菌的安全评价提供参考依据。请分析回答下列有关乳酸菌培养过程中的相关问题:

(1) 本研究使用的细菌培养基中特别加入了一定量的碳酸钙,乳酸菌产生的乳酸能与不溶性的碳酸钙生成可溶性的乳酸钙,从而在菌落周围形成溶钙圈。从功能角度分析,本研究使用的培养基属于______。 

(2) 在利用高压蒸汽灭菌锅对培养基灭菌时,锅内水加热煮沸后,必须____,以保证锅内气压上升、温度升至121 ℃,灭菌后的培养基应适当冷却后,在____附近倒平板。 

(3) 在酸奶制作过程中要严格控制发酵条件是保证发酵正常进行的关键,通常所指的发酵条件包括_____________(至少写出两项)。一般情况下含抗生素牛奶不宜制作酸奶,原因是_______________。 

(4) “检测乳酸菌对环丙沙星、庆大霉素、四环素耐药性”实验中,____(选填“需要”或“不需要”)设置对照实验,培养基配制好后再分别接种____。 

(5) 在统计菌落时,发现0.1 mL稀释倍数为10⁵的稀释液在平板上的平均菌落数为40个,则每毫升样液中的乳酸菌数大约为____个。用此法测定的乳酸菌数量比实际活菌数量____,原因是______________。 

人和哺乳动物的尿中含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染。土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源。现对土壤中的这类细菌进行分离实验，请回答下列问题：

(1)分离培养细菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，常用的灭菌方法有：高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌和________________。

(2)将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养。在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在______________进行操作。接种后的培养皿____________于37℃的________________中培养。

(3)用含有酚红指示剂的培养基筛选能分泌脲酶的细菌，从功能上划分该培养基属于____________培养基。若培养基中存在有分解尿素的细菌，其菌落周围会出现红色环带，这是由于尿素被分解产生的____________使pH升高，酚红指示剂产生的颜色变化，从而证明这一菌株可以尿素为氮源。变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力______________。

(4)与全营养培养基中的菌落相比，以尿素为氮源的培养基中菌落数( )

A．多     B．少    C．相等      D．几乎为零

某生物兴趣小组试图探究牛和山羊的瘤胃中的微生物对尿素和纤维素是否有分解作用，设计了实验，并成功筛选到能降解尿素的细菌和能分解纤维素的细菌．

（1）分离分解尿素的细菌培养基的主要特点是                          。

在进行该实验时，甲同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。甲同学的实验结果产生的原因可能有____________(填序号)
 ①由于供体动物不同 ②由于培养基被污染 ③由于操作失误 ④没有设置对照

（2）为了对分离出的分解尿素的菌种作进一步的鉴定，在原配置的选择培养基中加入      ，使其变红色，原因是细菌体内合成的___________将尿素分解为氨和CO₂，pH增高。

（3）在筛选纤维素分解菌的过程中,经过梯度稀释后，要将样品均匀涂布在用于鉴别纤维素分解菌的培养基上，在该培养基中需要加入的特殊染料是        ，当形成菌落以后，可以根据菌落周围是否产生           来筛选纤维素分解菌。

（4）甲同学用稀释涂布平板法分离纯化细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最有可能的原因是          。

乙同学在实验时得到了如下图所示的结果,则纤维素分解菌位于         位置。

A.③     B.①②      C.②③            D.①②③