[生物——生物技术实践]

幽门螺杆菌是栖息在胃粘膜的革兰氏阴性螺旋状杆菌，具有强的脲酶（能降解尿素）活性，其代谢类型属于异养厌氧型（氧气浓度在5％～8％左右适合，完全无氧或空气环境中无法生存），这种细菌是慢性胃炎、甚至胃癌发生的元凶。

（1）为了对胃炎患者的胃粘膜提取物稀释样液中幽门螺杆菌进行分离，应将样品稀释液接种于以________为唯一氮源的固体选择培养基上，接种后的培养皿在________条件下，倒置于37℃的恒温培养箱中培养。

（2）分离培养幽门螺杆菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，培养基常用的灭菌方法有________。

（3）欲检测上述培养基中是否具有幽门螺杆菌这类细菌的存在，向培养基中添加酚红指示剂，培养基中菌落周围显示红色环带，即表明这类细菌的存在，这种检测过程的机理是________。

（4）采用液体培养基培养幽门螺杆菌，为了测定菌液中的菌体数量，一般采用________法将一定量的菌液接种到固体培养基上，统计________的数量来代表菌体数，这种检测方法测得的结果一般偏________（填“大”或“小”），原因是________。

[生物——选修1：生物技术实践]

将没有吃完的西瓜盖上保鲜膜后放入冰箱，是很多人日常储藏西瓜的办法。但事实上，有时候盖上保鲜膜储藏的西瓜中的细菌种类和数目反而比没用保鲜膜的多。某生物研究小组用保鲜膜保存三天的西瓜表面的瓜瓤制备浸出液，研究细菌的种类和数量。请回答下列问题：

（1）该研究小组需配制用于培养微生物的培养基，配制的培养基一般都含有水、碳源、________和________。一般采用________法对培养基进行灭菌。

（2）为了避免培养基污染，在培养过程中，需将平板________（填“正置”或“倒置”）。为了观察浸出液中微生物的种类和数量，采用________法接种。接种时，为了避免环境中微生物的污染，实验操作应在________附近进行。

（3）在培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，说明西瓜的浸出液中有________（填“一种”或“多种”）细菌。细菌总数越多，说明西瓜被细菌污染的程度越________（填“高”或“低”）。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

多不饱和脂肪酸需要从膳食中摄取，人体不能直接合成。科学家通过转基因手段将ω－6脂肪酸脱氢酶基因（FAT1）整合到肉牛基因组，以期提高肉牛体内的多不饱和脂肪酸含量，促进人体健康。请回答下列问题：

（1）将ω－6脂肪酸脱氧酶基因导入肉牛细胞中常用的方法是________，在用PCR技术扩增目的基因时，需要的条件主要有扩增缓冲液、模板DNA、4种原料、________和________。

（2）体外受精获得受精卵时，将优良公牛的精子收集后放在一定浓度的肝素溶液中进行培养，其目的是________。

（3）胚胎移植前可选择发育良好、形态正常的________（填胚胎发育时期）进行________，以实现同卵多胎。

（4）该转基因牛还可以用核移植的方法繁殖，用核移植的方法得到的动物称为________，用于核移植的供体细胞一般选择10代以内的细胞，目的是保持细胞正常的________。

下列有关细菌培养的叙述，正确的是( )

下列操作与杀菌无关的是 ( )

以下关于“分离土壤中的自生固氮菌”的实验操作正确的是

① 对取样的土壤样品要在超净台上进行稀释  ② 分离自生固氮菌的培养基中要加入氮源

③ 对培养基要加热到62℃，保持30min     ④ 本实验的接种方法可以采用点接法

⑤接种以后对菌种的培养时间不能太长的原因是菌落会分泌含氮化合物,引起杂菌生长。

[生物—选修1：生物技术实践]

   牛的食物主要是草茎类，其中含有大量的纤维素。牛胃内的微生物，在帮助消化和利用植物纤维素方面起了决定性的作用。回答下列问题：

（1）纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质，组成纤维素的单体为________。牛胃中某些微生物能够产生纤维素酶，这种酶是一种复合酶，其中的________能使纤维素分解成纤维二糖。

（2）实验室培养牛胃内的微生物，分离得到高纯度纤维素分解菌的关键环节是________。为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在________附近进行；倒平板用的培养皿需要保持干燥，可以采用________法进行灭菌。

（3）为了从牛胃的食糜中分离出纤维素分解菌，配制的选择培养基要以________作为唯一碳源。筛选纤维素分解菌时，常用的刚果红染色法有两种，一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，另一种是________。在涂布平板时滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多，原因是________。

[生物——选修1：生物技术实践]

焚烧秸秆是导致雾霾的原因之一。下图是工业上利用秸秆中的纤维素发酵生产酒精的基本工艺流程：

回答下列问题：

（1）步骤①需要的微生物大多分布在       的环境中。②中获得的酶是一种复合酶，其中       能将纤维二糖分解成发酵所需的葡萄糖。

（2）为了获得酵母菌，可取土样将其稀释，用涂布器涂布到多个琼脂固体培养基的表面，这种方法称为       。下图所示的四种菌落分布情况中，不可能由该方法得到的是       。

用这种方法统计样本菌落数时，需要设置空白对照组，原因是       。

（3）步骤③要注意对接种器材进行       ；步骤④一般需将温度控制在       。

人和哺乳动物的尿中含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染。土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源。现对土壤中的这类细菌进行分离实验，请回答下列问题：

(1)分离培养细菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，常用的灭菌方法有                   、                    (至少答2种)。

(2)用含有酚红指示剂的培养基筛选能分泌脲酶的细菌，从功能上划分该培养基属于     培养基。若培养基中存在有分解尿素的细菌，其菌落周围会出现红色环带，这是由于尿素被分解产生的         使pH升高，使酚红指示剂产生颜色变化，从而证明这一菌株以尿素为氮源。变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力              。

(3)与全营养培养基中的菌落相比，以尿素为氮源的培养基中菌落数           。

A．多        B．少      C．相等      D．几乎为零

(4)将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养。在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在              旁进行操作。接种后的培养皿            于37℃的                中培养。

请回答下列生物技术实践方面的问题：

（1）在果酒的制作中，在有氧条件下酵母菌进行有氧呼吸，进行________；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵，产生________。在果醋的制作中，当________都充足时，醋酸菌将糖分解成醋酸；当缺少________时，醋酸菌将乙醇→乙醛→醋酸。

（2）微生物接种的方法很多，最常用的是________和稀释涂布平板法，其操作方法各不相同，但核心都是要________，保证培养物的纯度。为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在________附近进行。

（3）DNA的粗提取实验中两次使用蒸馏水，但其目的不同。第一次的目的是使鸡血细胞吸水涨破；第二次的目的是________，使DNA逐渐析出。

[生物——选修1：生物技术实践专题]

乳酸菌是人和动物体胃肠道中的有益菌，能助消化，利于肠道健康，但是消化道中胆汁所含的胆盐会对乳酸菌的生理活动有抑制作用，为此，研究人员通过辐射处理野生型乳酸菌，得到耐高浓度胆盐的乳酸菌。

（1）与腐乳制作所用微生物相比，乳酸菌在结构上的主要特点是________。

（2）实验步骤：

①育种与培养：辐射处理后可得到多种类型的乳酸菌，置于经过________法灭菌处理的________（固体、液体）培养基中，37℃振荡培养。

②接种与选择：为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行________处理。之后，将菌液涂布接种于含0.3％胆盐和不含胆盐的固体培养基上，配制时为了使培养基凝固，应向培养基中加入________；置于37℃条件下________（密闭、充气）培养。不含胆盐的培养基培养的目的是________。

②筛选与纯化：从平板中挑取实验效果明显的目的菌株，采用________法接种于新的培养基平板，可对菌株进一步的纯化。