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            • 1. 烧伤病人容易感染绿脓杆菌,引起化脓性感染,比阿培南、美罗培南、头孢菌素和碳青霉烯类抗生素都是非常经典的抗绿脓杆菌的药物。临床使用抗生素前,有时需要做细菌耐药实验。实验时,从病人身上获取少量样本,按照一定的实验步骤操作,以确定该病人体内的绿脓杆菌对不同抗生素的敏感性。

              (1)获取绿脓杆菌单菌落:

                  配制适于绿脓杆菌生长的培养基,培养基中的营养成分一般含有______、氮源、生长因子、水和无机盐,调节pH至7,灭菌处理,待培养基冷却至50℃时,在_________附近倒平板。经过选择培养、鉴别等步骤获得单菌落。

              (2)检测绿脓杆菌对不同抗生素的敏感性:

                  取该单菌落适当稀释,用___________法接种于固体培养基表面,使其均匀生长,布满平板。将分别含等剂量的比阿培南、美罗培南、头孢菌素和碳青霉烯类抗生素的相同大小的小滤纸圆片均匀置于该平板上的不同位置,适宜条件培养一段时间,结果是含不同抗生素的滤纸片周围均出现透明圈(如上图),这说明绿脓杆菌对上述抗生素________(填“敏感”或“不敏感”);含头孢菌素的滤纸片周围的透明圈比含美罗培南的小,这说明绿脓杆菌对头孢菌素的敏感性比美罗培南________(填“强”或“弱”);含比阿培南、碳青霉烯类的滤纸片周围的透明圈也比含美罗培南的小,且比阿培南透明圈中出现了一个菌落,请推测此菌落产生的可能原因:一是________________,二是_________________。

              (3)根据上述实验结果,为达到抗绿脓杆菌的目的,对于该患者来说最好应选用抗生素_____________。

            • 2.

              已有研究证实,在体外培养条件下耐药基因能够在不同种属的乳酸菌菌株中发生转移。鉴于此,科研小组对市售酸奶中的乳酸菌进行分离和鉴定,通过药物敏感性实验确定菌株的耐药谱,同时调查环丙沙星、庆大霉素、四环素等耐药基因在这些菌株中的分布情况,为乳酸菌的安全评价提供参考依据。请分析回答下列有关乳酸菌培养过程中的相关问题:

              (1) 本研究使用的细菌培养基中特别加入了一定量的碳酸钙,乳酸菌产生的乳酸能与不溶性的碳酸钙生成可溶性的乳酸钙,从而在菌落周围形成溶钙圈。从功能角度分析,本研究使用的培养基属于______。 

              (2) 在利用高压蒸汽灭菌锅对培养基灭菌时,锅内水加热煮沸后,必须____,以保证锅内气压上升、温度升至121 ℃,灭菌后的培养基应适当冷却后,在____附近倒平板。 

              (3) 在酸奶制作过程中要严格控制发酵条件是保证发酵正常进行的关键,通常所指的发酵条件包括_____________(至少写出两项)。一般情况下含抗生素牛奶不宜制作酸奶,原因是_______________。 

              (4) “检测乳酸菌对环丙沙星、庆大霉素、四环素耐药性”实验中,____(选填“需要”或“不需要”)设置对照实验,培养基配制好后再分别接种____。 

              (5) 在统计菌落时,发现0.1 mL稀释倍数为105的稀释液在平板上的平均菌落数为40个,则每毫升样液中的乳酸菌数大约为____个。用此法测定的乳酸菌数量比实际活菌数量____,原因是______________。 

            • 3. 锈去津是一种含氮的有机化合物,它是广泛使用的除草剂之一。锈去津在土壤中不易降解,为修复被其污染的土壤,按下面程序选育能降解锈去津的细菌(目的菌)。已知含过量锈去津的固体培养基不透明。

              (1)由于锈去津的      作用,在长期使用锈去津的土壤中可能含有目的菌。

              (2)下图是A~C瓶中三类细菌的最大密度柱形图,由图推断,从A瓶到C瓶液体培养
              的目的是                             ;__。甲类细菌密度迅速降低的主要原因是_________________

              (2)在固体培养基中,无透明带菌落利用的氮源是       ;有透明带菌落利
              用的氮源是        ,据此可筛选出目的菌。
            • 4.

              为了分离和纯化高效分解石油的细菌,科研人员利用被石油污染过的土壤进行如图A所示的实验。据此回答下列问题:

              (1)配制好的培养基通常使用________________法灭菌。步骤③与步骤②中培养基成分相比,最大的区别是步骤③培养基中____________________。

              (2)同学甲进行步骤④的操作,其中一个平板经培养后的菌落分布如图B所示。该同学的接种方法是________,出现图B结果可能的失误操作是____________。

              (3)同学乙也按照同学甲的接种方法进行了步骤④的操作:将1 mL样品稀释100倍,在3个平板上分别接入0.1 mL稀释液;经适当培养后,3个平板上的菌落数分别为56、58和57。据此可得出每升样品中的活菌数为__________个。

              (4)步骤⑤需要振荡培养,原因是_________________________________________________________________________________________。

              (5)步骤⑤后取样测定石油含量的目的是__________________________________________________________________________。

            • 5. [生物——选修l:生物技术实践](15分)

              将没有吃完的西瓜,盖上保鲜膜后放入冰箱,是很多人日常储藏西瓜的办法。但事实上,有时候盖上保鲜膜储藏的西瓜中的细菌种类和数目反而比没用保鲜膜的多。某生物研究小组用保鲜膜保存三天的西瓜表面的瓜瓤制备浸出液,研究细菌的种类和数量。

              (1)该研究小组需配制用于培养微生物的培养基,配制的培养基一般都含有水、碳源、                   。一般采用            法对培养基进行灭菌。

              (2)为了避免培养基污染,在培养过程中,需将平板           (填“正置”或“倒置”)。为了观察浸出液中微生物的种类和数量,采用          法接种。接种时,为了避免环境中微生物的污染,实验操作应在         附近进行。

              (3)在培养20小时后,观察到平板上有形态和颜色不同的菌落,说明西瓜的浸出液中有                    (填“一种”或“多种”)细菌。细菌总数越多,说明西瓜被细菌污染的程度越         (填“高”或“低”)。

            • 6.

              小球藻是一种单细胞绿藻,能进行高效的光合作用,可以有效除去污水中的N、P等。其繁殖能力(生长量)在一定程度上可以反映藻细胞消耗N、P等的能力。科研人员对此进行了相关研究,结果如下图。请回答下列问题:

              (1)图1说明固定化小球藻生长周期比游离小球藻________,使用固定化小球藻处理污水的好处是________。

              (2)固定化小球藻的常用方法是________。根据图2判断,固定化小球藻最适的海藻酸钠溶液浓度为________,固定形成的凝胶珠颜色是________。若海藻酸钠浓度过高,细胞生长量反而降低,原因是形成的凝胶珠网格过于致密,导致________。

              (3)据图3可知,制备的凝胶球直径为________较适宜,凝胶珠直径过大,不利于小球藻获得充足的________。

            • 7.

              工业生产中会产生一些含碳有机废水,某细菌X在生物处理废水中能发挥很大作用,现要对其进行筛选。

              (1)应选用上表中的 (填图中字母)培养液,解释不选用其他培养液的原因:a   ,b

              (2)接种前培养基必须进行 灭菌,为确定培养基灭菌是否彻底,可设置的 空白培养基为对照组;若要制作平板,常在培养液中加入   作为凝固剂,培养时,需将平板 放置。

              (3)为获得单个菌落,某同学将细菌X接种到正确的培养基中,经培养后,其中一个平板的菌落分布如图所示,该同学的接种方法是    ,所用的接种工具是         ,该同学可能的操作失误是         

              (4)对细菌X计数时,可吸取菌液1ml稀释1000倍,然后吸取稀释后的菌液0.2ml,接种于平板上培养,一段时间后观察到三个平板上的菌落数为61、62、63,则该菌液中的细菌X数量约为        个/ml。

            • 8. 临床使用抗生素前,有时需要做细菌耐药实验。试验时,首先要从病人身上获取少量样本,然后按照一定的实验步骤操作,以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题:
              (1)为了从样本中获取致病菌单菌落,可用  法或  法将样本接种于固体培养基表面,经过选择培养、鉴别等步骤获得。
              (2)取该单菌落适当稀释,用  法接种于固体培养基表面,而在37℃培养箱中培养24h,使其均匀生长,布满平板。
              (3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性,将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置,培养一段时间后,含A的滤纸片周围出现透明圈,说明该致病菌对抗生素A  ;含B的滤纸片周围没有出现透明圈,说明该病菌对抗生素B  ;含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小,说明  ;含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小,且透明圈中出现了一个菌落,在排除杂菌污染的情况下,此菌落很可能是抗生素D的  
              (4)根据上述实验结果,为达到抗菌目的,最好应选用抗生素  
            • 9. 生物技术的广泛应用,给社会带来了较大的经济效益,受到社会广泛重视。请回答下列有关问题:
              (1)制作泡菜需要测定亚硝酸盐含量,其方法是____________。其原理是:在盐酸酸化的条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后,与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成________________,将显色反应后的样品与已知浓度的标准液进行目测比较,可以大致估算出泡菜中亚硝酸盐的含量。
              (2)1995年,美国科学家Mulis因发明了PCR技术而获得了诺贝尔化学奖。PCR和生物体内DNA的复制都必需的条件包括DNA聚合酶、模板DNA、能量、游离脱氧核苷酸和______________;在生物体内DNA复制所必需的,而在PCR技术中不需要的成分是____________。
              (3)在香料工业提取的“液体黄金”玫瑰油中,要求不含有任何添加剂或化学原料,其提取方法主要是______;玫瑰精油的提取需大量原料,通常采用__________________技术实现玫瑰的快速繁殖。
              (4)为获得一种能高效降解农药的细菌(目的菌),向培养基中加入某种化合物,将初步筛选得到的目的菌转到固体培养基中,常采用的接种方法是_______________;实验结束后,使用过的培养基应该进行处理后才能倒掉,这样做是为了________________________。
            • 10.

              (选修一)部分科学家预言未来最理想的燃料是绿色植物,如秸秆等。回答下列相关问题:

              (1)秸秆的主要成分是纤维素,可构成植物细胞的______________,其单体为______________。

              (2)纤维素的分解需要纤维素酶,纤维素酶是一种复合酶,一般认为它至少包括三种组分,即C1酶、C2酶和葡萄糖苷酶,前两种酶使纤维素分解成________。

              (3)从土壤中分离分解纤维素的微生物的实验流程如下:

              (一)土壤取样→(二)选择培养→(三)梯度稀释→(四)将样品涂布到鉴别培养基上→(五)挑选菌落。

              该培养基从物理性质来看属于____________培养基;该过程中步骤(二)选择培养基的营养物质的特点是____________,步骤(三)中稀释的目的是_________。

              (4)我国每年都有大量的玉米秸秆被燃烧,科学家建议通过秸轩沼气池来利用秸秆,其中发挥作用的主要微生物有甲烷菌,甲烷菌的代谢类型最可能为____________。通过沼气池利用秸秆的优点是____________。

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