【生物——选修1：生物技术实践】

   日常生活中人们常将吃剩的食物盖上保鲜膜后放入冰箱储藏以防止污染。但事实上，有时候盖上保鲜膜储藏的食物中的细菌种类和数目反而比没用保鲜膜的多。某生物研究小组用保鲜膜保存三天的食物制成液体，研究其中细菌的种类和数量。

（1）微生物培养过程中，获得纯净培养物的关键是________。常用的对培养基进行灭菌的方法是________。对无菌操作间的灭菌方法一般是________。

（2）为了避免培养基污染，在培养过程中，需将平板________（填“正置”或“倒置”）。为了鉴定食物液体中微生物的种类并测定数量，应采用________法接种。用这种方法统计的菌种数往往比活菌的实际数目低，其原因是________。

（3）在培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，说明食物液体中有________（填“一种”或“多种”）细菌。菌落总数越多，说明食物被细菌污染的程度越________（填“高”或“低”）。

将没有吃完的西瓜盖上保鲜膜后放入冰箱，是很多人日常储藏西瓜的办法。但事实上，有时候盖上保鲜膜储藏的西瓜中的细菌种类和数目反而比没用保鲜膜的多。某生物研究小组用保鲜膜保存三天的西瓜表面的瓜瓤制备浸出液，研究细菌的种类和数量。请回答下列问题：

（1）该研究小组需配制用于培养微生物的培养基，配制的培养基一般都含有水、碳源、________和________。一般采用________法对培养基进行灭菌。

（2）为了避免培养基污染，在培养过程中，需将平板________（填“正置”或“倒置”）。为了观察浸出液中微生物的种类和数量，采用____法接种。接种时，为了避免环境中微生物的污染，实验操作应在________附近进行。

（3）在培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，说明西瓜的浸出液中有________（填“一种”或“多种”）细菌。细菌总数越多，说明西瓜被细菌污染的程度越________（填“高”或“低”）。

请回答下列与大肠杆菌有关的问题：

（1）从生态系统的成分上看，大肠杆菌属于            ；它的同化作用类型是           。

（2）下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方。

根据用途划分该培养基属于         培养基（选择、鉴别）。该培养基中的碳源是             ，氮源是               。

（3）培养大肠杆菌时，常用的接种方法是              和               。为防止杂菌污染需要对培养基和培养皿进行             。

（4）现有一升水样，用无菌吸管吸取1mL转至盛有9mL无菌水的试管中，依次稀释10³稀释度。各取0.1mL已稀释10³倍的水样分别接种到三个培养基上培养，记录的菌落数分别为55、56、57，则每升原水样中大肠杆菌数为           。

（5）实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉，这样做的目的是                                            。

（6）以下微生物发酵生产特定产物时，所利用主要微生物的细胞结构与大肠杆菌相同的是____________。

A．制作果酒        B．制作果醋    C．制作泡菜         D．制作腐乳

【生物——选修1生物技术实践】

由于酵母菌利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的α-淀粉酶基因转入酵母菌中经筛选得到了可高效利用淀粉的工程菌菌种（过程如图甲所示）。

(1)图甲中，过程①需要的酶有_____________。为达到筛选目的，平板内的固体培养基应以____________作为唯一碳源。②.③过程需要重复几次，目的是______________。

(2）某间学尝试过程③的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示。该同学的接种方法是_____________________；推测该同学接种时可能的操作失误是______________。

(3）以淀粉为原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的适宜条件下密闭发酵，接种________菌的发酵罐需要先排气，其原因是__________________________。

（4）用凝胶色谱法分离α一淀粉酶时，在色谱柱中移动速度较慢的蛋白质，相对分子质量较________。

【生物—选修1：生物技术实验】

研究发现柚皮精油和乳酸菌素（小分子蛋白质）均有抑菌作用，两者的提取及应用如图所示。

（1）柚皮易焦糊，宜采用____________法提取柚皮精油，该过程得到的糊状液体可通过___________除去其中的固体杂质。

（2）筛选乳酸菌A时可选用平板划线法或____________接种。对新配制的培养基灭菌时所用的设备是_______________。实验前需对超净工作台进行____________处理。

（3）培养基中的尿素可为乳酸菌A生长提供______________。电泳法纯化乳酸菌素时，若分离带电荷相同的蛋白质，则其分子量越大，电泳速度___________。

（4）抑菌实验时，在长满致病菌的平板上，会出现以抑菌物质为中心的透明圈。可通过测定透明圈的______________来比较柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果。

[生物—选修1：生物技术实践]

临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：

（1）为统计样品中活菌的数目，常将样品用        法接种于培养基表面。运用活菌计数法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是               。

（2）为了检验该致病菌对于抗生素的敏感性，在该病菌菌落均匀生长的平板的不同位置，分别放置含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片，培养一段时间后，在四个滤纸片周围出现透明圈由大到小依次是A＞C＞D＞B，由此推断，该病人目前适合使用的抗生素________。含C的滤纸片周围透明圈比含A的小，说明该病人                       ；若抗生素B的滤纸片周围没有出现透明圈，最可能的原因是            导致的结果；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现一个菌落，这种菌落的出现可能是由于接种过程不严格导致的，也可能是产生了抗生素D的耐药菌，这种变异的特点是_____           （至少列举两个）。

（3）实验中培养基需用        灭菌、接种环用灼烧灭菌、接种过程也在酒精灯火焰旁进行，其达到的目的是                                  。

37．[生物－选修1：生物技术实践]
生物技术与我们的生活息息相关。请根据所学知识，回答下列有关问题：
（1）在泡菜腌制过程中，亚硝酸盐含量会发生变化，测定亚硝酸盐含量的方法是________。亚硝酸盐在特定的条件下会转变为________，进而可能引发人体细胞癌变。
（2）制作葡萄酒的菌种主要来源是________。检验是否产生酒精可在________条件下，用________试剂检测。
（3）若要提高果酒的产量，发酵过程中要控制好哪些条件？________（至少写出两项）。
（4）为获得一种能高效降解有机磷农药的细菌，应使用含有________的选择培养基；使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，目的是________。

乙醇等“绿色能源”的开发备受世界关注。利用玉米秸秆生产燃料酒精的大致流程为：

  玉米秸秆糖液酒精

 (1)玉米秸秆经预处理后，应该选用        酶进行水解，使之转化为发酵所需的葡萄糖。

 (2)（多选）从以下哪些微生物中可以提取上述酶？            。

   A．酿制果醋的醋酸菌   B．生长在腐木上的霉菌   C．制作酸奶的乳酸菌   

   D．生产味精的谷氨酸棒状杆菌                        E．反刍动物瘤胃中生存的某些微生物

 (3)若从土壤中分离产生这种酶的微生物，所需要的培养基为         （按功能分），培养基中的碳源为            。

 (4)从生物体提取出的酶首先要检测           ，以便更好地将酶用于生产实践。在生产糖液的过程中，为了使酶能够被反复利用，可采用固定化酶技术。

(5)发酵阶段需要的菌种是           ，在产生酒精时要控制的必要条件是           。

临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本（如痰液、粪便等），然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：

⑴为了从样本中分离并获取某种致病菌单菌落，可用             法或             法将人体样本接种于固体培养基表面，再经过选择培养、鉴别等步骤实现。

⑵为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，取该单菌落适当稀释，接种于固体培养基表面，在37℃培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板。将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板的不同位置，培养一段时间后，在四个滤纸片周围出现透明圈由大到小依次是A＞C＞D＞B。由此推断，该病人目前适合使用的是抗生素        。含D的滤纸片周围的透明圈比含A、C的小，但透明圈中出现了一个菌落，这种菌落的出现可能是由于杂菌污染导致的，也可能是由于该致病菌发生了突变；若发生了基因突变，这种突变一般是否由抗生素诱发的？         ，若要证明这种致病菌发生了基因突变，可检测和比较这类细菌细胞中        （“DNA 的碱基组成”“mRNA 的含量”“ DNA 的碱基序列”）。

⑶为防止杂菌污染，培养基的灭菌方法是         灭菌，接种环的灭菌方法是         灭菌，接种过程应该在               旁进行。

将没有吃完的西瓜，盖上保鲜膜后放入冰箱，是很多人日常储藏西瓜的办法。但事实上，有时候盖上保鲜膜储藏的西瓜中的细菌种类和数目反而比没用保鲜膜的多。某生物研究小组用保鲜膜保存三天的西瓜表面的瓜瓤制备浸出液，研究细菌的种类和数量。

(1)该研究小组需配制用于培养微生物的培养基，配制的培养基一般都含有水、碳源、          和         。一般采用            法对培养基进行灭菌。

(2)为了避免培养基污染，在培养过程中，需将平板           (填“正置”或“倒置”)。为了观察浸出液中微生物的种类和数量，采用          法接种。接种时，为了避免环境中微生物的污染，实验操作应在         附近进行。

(3)在培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，说明西瓜的浸出液中有                    （填“一种”或“多种”）细菌。细菌总数越多，说明西瓜被细菌污染的程度越         （填“高”或“低”）。