[生物——选修1：生物技术实践]

（1）培养基中加入化合物A的目的是筛选________________，这种培养基属于________________培养基。

（2）“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的______________，实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是_____________。

（3）培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量__________________的培养液，接入新的培养液中连续培养。

（4）转为固体培养时，常采用________________________法接种，获得单菌落后继续筛选。

（5）若研究“目的菌”的生长规律，将单个菌落进行液体培养，可采用________________的方法进行计数，以时间为横坐标，以细菌数目的对数为纵坐标，绘制生长曲线。

（6）实验结束后，使用过的培养基应该进行_____________________________处理后，才能倒掉。

1．生物乙醇是以生物为原料生产的可再生能源。我国利用农作物废弃物（秸秆）生产乙醇，其技术流程为：纤维素酶分解→酵母菌发酵→蒸馏→成品。纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取。某同学设计了从土壤中分离纤维索分解菌的实验流程：土壤取样→选择培养→梯度稀释→鉴别培养。请分析回答下列问题：

（1）最好选择       环境采集土样。

（2）配置培养基时，各种成分在熔化后分装前必须进行       ，接种前要进行       。

在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行。在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板       放置，这样做的目的是       。

（3）以下是A、B两种培养基配方：

A培养基配方：

B培养基配方：

如果要分离提纯土壤中的纤维素分解菌，应选择   （填编号）培养基配方，从功能看该培养基属于___   ____培养基。该培养基能增加样品中纤维素分解菌的浓度，其原理是                  。

（4）为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基中加入       ，将筛选获得的菌液稀释后用      法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生     的菌落作为菌种进行扩大培养。

（5）乙醇是酵母菌的发酵产物，发酵时酵母菌直接利用的物质是               。

2.科学家从某些能无限增殖细胞的细胞质中分离出无限增殖调控基因（prG），该基因能激发许多动物细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更为广阔的前景。请回答下列问题：

（1）利用细胞融合技术制备单克隆抗体的过程中，促进动物细胞融合常用的诱导剂是       ，植物体细胞杂交在细胞融合之前要用           处理。

（2）利用细胞融合技术制备单克隆抗体时有两次筛选，第1次筛选的目的是       ，第2次筛选的目的是           。

（3）有人提出，可以直接通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，其思路如图所示。请回答下列问题：

①．酶A是指       ，酶B是指       。

②．对已导入重组质粒的Ⅱ进行“检测”的目的是         ；题目中Ⅱ所指的细胞是       ，Ⅲ所9指的细胞具有的特点是           。

（4）也有人提出用细胞核移植技术构建重组细胞来生产单克隆抗体，试用相关的图示及文字表示该过程：（图中·和▲代表细胞核，○代表细胞质）

（1）酸菜制作过程中，起主要作用的微生物是___________。但是在发酵初期，很多杂菌会大量繁殖，其中导致泡菜水的表面长白膜的微生物是_____________。

（2）实验室可采用__________法进行菌种纯化，在对该菌种进行培养时，与常规培养基相比，还需要额外在培养基中添加_________________。

（3）为了保持所获得的菌种纯净，需要进行菌种的保藏。若采用临时保藏，需将菌种接种在___________上。放入4℃冰箱中可保藏3-6个月；若要长期保存，可将菌液与灭菌的_______ ___混匀，放在-20℃的冰箱中保存一年。

（4）在市场上购买的真空包装酸菜，在没有发生漏气状态下发生了“胀袋”现象，A同学认为是杂菌污染导致的，B同学怀疑是乳酸菌大量繁殖导致的，说出你支持谁的观点并说出理由。支持_______的观点，理由是______________。

（1） 筛选微生物 L时，用            作为培养基中的唯一氮源，加入            凝固剂。接种时应采用           方法

（2） 下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是           灭菌

   A高压蒸汽     B 紫外灯照射      C 70%的酒精侵泡液      D过滤

（3）对微生物L进行扩大培养时宜采用            培养基，接种时采用           方法对接种环进行灭菌

（4）脲酶宜采用共价偶联法进行固定化，可通过检测固定化脲酶的           确定其应用价值。除此法外，酶的固定化方法还包括           及交联法等。

（二）下面是关于获得能产生人干扰素大肠杆菌的问题。请回答：

（5）用限制性核酸内切酶识别人干扰素基因和质粒中一段特定的          并切割，然后用           连接形成重组DNA。该质粒是一种含抗生素抗性基因的          核酸分子

 A.双链环状  B.单链环状  C.双链线状  D.单链线状

（6）将含有人干扰素基因的重组质粒导人到大肠杆菌，经含有           的培养基筛选等过程，最终获得能产生人干扰素的大肠杆菌。

絮凝性细菌分泌的具有絮凝活性的高分子化合物，能与石油污水中的悬浮颗粒和有机物等形成絮状沉淀，起到净化污水的作用。为进一步提高对石油污水的净化效果，将絮凝性细菌和石油降解菌融合，构建目的菌株。其流程图如下,据图回答：

（1）溶菌酶的作用是_________________________。

（2）PEG的作用是_________________________。

（3）经处理后，在再生培养基上，未融合的A、B难以生长。图中AB融合菌能生长和繁殖的原因是_______________________________。

（4）目的菌株的筛选：筛选既能分泌具有絮凝活性的化合物，又能在含有_________的培养基上生长的AB融合菌，选择效果最好的最为目的菌株。

（5）为探究目的菌株不同发酵时间发酵液的絮凝效果，将目的菌株进行发酵培养，定时取发酵液，加入石油污水中：同时设置________________为对照组。经搅拌、静置各3分钟后，分别测定上层水样的石油浓度COD值（COD值越高表示有机物污染程度越高）,计算石油去除率和COD去除率，结果如下图。

（6）目的菌的种群增长曲线是_____________型。在40～44小时，发酵液对石油污水的净化效果最好，其原因是_________________。

 (1)制作酸奶是利用乳酸菌在            （填“有氧”或“无氧”）条件下，将牛奶中的葡萄糖、乳糖分解成乳酸，同时将奶酪蛋白水解为短肽和     ___     ，不仅容易被人体吸收，也适用于乳糖不耐症人群。若牛奶中含有抗生素，会影响酸奶的制作效果，原因是         _____   ______________          。

(2)纯化乳酸菌时还需要设置未接种乳酸菌的培养基作为对照，若对照组培养基表面没有菌落生长，说明         ______       。

 (3)为探究不同种乳酸菌的抑菌效果，将稀释倍数相同的等量乳酸菌培养液滴加在长满致病菌的平板上，一段时间后，会出现以滴点为中心的抑菌圈，实验结果如下表。    

 ①该实验的自变量是       ___________________________________            。    

 ②由实验结果可知，乳酸菌对     ________________     （填致病菌）的抑菌效果比较突出；在生产应用中，不宜采用  _____  号菌株进行防腐。

（1）微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、___________________四类，该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源，其原因是________________________________________________________________。

（2）纯化菌株时，通常使用的划线工具是____________。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有___________________________________________________________。

（3）为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做图乙所示实验。该实验的假设是_____              

利用选择培养技术从土壤中分离能降解对羟基苯甲酸的微生物

（1）本实验所需培养基的碳源为___________。

（2）①→③重复培养的目的是：_____________________________。⑥和⑦属于对照组的是_____组。

（3）纯化菌株时，通常使用的划线工具是____________。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有______________________________________。

（4）某小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中__________的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高____________的利用率。

（5）科研人员用放射线处理该细菌获得两个突变株A和B，然后对突变株A和B进行实验，结果如下表所示：

 突变株A不能在一般培养基上生长的原因是____________________。突变株A和B混合在一起接种于一般培养基中能生长的最可能原因是_________________________。

苹果酒、苹果醋、苹果汁等是人们餐桌上的常见食品。请结合相关知识回答以下问题： 

（1）如图所示是在苹果酒的基础上制作苹果醋的流程图。

过程②常用的发酵菌是               ，可以在食醋中获得，分离和纯化该微生物的方法如下：第一步：配制培养基。根据物理性质，培养微生物常用的培养基为                     。 

第二步：采用                  法对培养基进行灭菌处理。

第三步：                              。

第四步：培养温度控制在                。

第五步：挑选符合要求的菌落。

（2）某同学计划统计食醋中该发酵菌的总数，他选用10^－4、10^－5、10^－6稀释液进行涂布，每种稀释液都设置了3个培养皿。从设计实验的角度看，还应设置的一组对照实验是              ，此对照实验的目的是证明              过程中是否被杂菌污染。

（3）苹果泥与果胶酶混合能提高苹果的出汁率并使浑浊的果汁变澄清，其原因是                                   。

(2)某同学尝试过程③的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示。该同学的接种方法是       ，推测该同学接种时可能的操作失误是       。

 (3)为了将分离到的菌株进一步纯化，挑取了菌落在3块相同平板上划线，结果其中一块平板的各划线区均未见菌落生长，最可能的原因是       。

(4)科研人员配制了a、b、c三种菌液进行实验，得到如图所示曲线，分析可知       菌液最适合在实际工程中应用，原因是        。