嗜热菌可以生活在98 ℃的高温环境中，研究发现其耐热性与基因H的表达产物有关。下图表示某研究小组利用大肠杆菌对H基因实行的克隆和表达过程，其中NdeⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ、SalⅠ四种限制酶的识别序列和酶切位点分别为CA^↓TATG、G^↓AATTC、A^↓AGCTT、G^↓TCGAC。请分析回答：

(1) 图中的结构A是__________，其主要作用是提供_______________特异性识别结合位点，驱动基因转录。一个完整的基因表达载体的组成，除了质粒1中所示结构以外，还应该含有______________。

(2) 用图中质粒1和H基因构建重组质粒，应选用__________两种限制酶进行切割

(3) 将重组质粒导入大肠杆菌细胞之前，一般需先用______溶液处理大肠杆菌，以便将基因表达载体导入细胞。重组质粒导入大肠杆菌后H基因的表达效率很低，但在含有质粒2(辅助性质粒)的细胞中，H基因可以高效表达。为了筛选出转入了两种质粒的受体菌，应在筛选平板培养基中添加__________，整个实验过程应保持____________操作。

(4) PCR反应中引物的设计非常关键，据图分析，扩增H基因时应选择的一对引物是________。

A. 引物Ⅰ：…GGGAATTC…；引物Ⅱ：…CTCATATG…

B. 引物Ⅰ：…GAATTCCC…；引物Ⅱ：…CATATGAG…

C. 引物Ⅰ：…GGAAGCTT…；引物Ⅱ：…AAGCTTCC…

D. 引物Ⅰ：…CTCATATG…；引物Ⅱ：…AAGCTTAAGCTT…

(1) 若限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—^↓GATC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—G^↓GATCC—，那么在①过程中，应用限制酶             切割质粒，用限制酶            切割抗虫基因。①过程在         (填“体内”或“体外”)进行。

(2) 通过②过程得到的大肠杆菌涂布在含有              的培养基上，若大肠杆菌能够生长说明已导入了普通质粒或重组质粒，反之则说明没有导入。

(3) 为在短时间内大量获得目的基因，可用                技术进行扩增，其原理是                 。

(4) ⑤过程所用技术称为                  ，从遗传学角度来看，根本原因是根细胞具有                     。

【生物一选修3现代生物科技专题】
    请结合所学知识及相关信息回答下列问题：
（1）基因工程常用限制性核酸内切酶切割DNA分子，切割后产生的DNA片段的末端类型有             和平末端。
（2）面对转基因技术的利弊，我们应持有的正确做法                           。
下列关于现代生物工程技术的安全性和伦理问题的分析，不合理的观点是：            。
A．转基因生物合成的某些新的蛋白质有可能成为某些人的过敏原或者引起中毒
B．运用DNA重组技术可以将致病菌或病毒改造成威力巨大的生物武器
C．我国的政策是禁止进行生殖性克隆人
D．转基因生物进入自然界后不会与野生物种杂交而威胁其他生物的生存
（3)设计试管婴儿技术与为解决不孕夫妇的生育问题而出现的试管婴儿技术主要区别是植入前对胚胎进行                   。
（4）PCR技术是一种DNA的扩增技术。该过程除需目的基因和原料（包括 dATP、 dGTP、           、         ）之外还需提供   种引物和热稳定DNA聚合酶。进行PCR时需加热至90～95℃然后冷却至55～60℃，此操作的目的                                 。
（5）DNA在不同浓度NaCl溶液中的溶解度不同。在2mol/LNaCl溶液中，DNA溶解，部分蛋白质盐析生成沉淀；在           mol/LNaCl溶液中时，DNA析出。在沸水浴的条件下，DNA溶液遇             试剂会被变成蓝色的特性，可以鉴定提取的DNA。

MagaininmⅡ是非洲爪蟾皮肤分泌的一种抗菌肽，能对细菌、真菌、肿瘤细胞等产生明显的抑制效果。科学工作者通过基因工程技术获得能表达该种抗菌肽的大肠杆菌。请回答下列问题：

(1) MagaininmⅡ基因能与运载体能结合，是由于它们在结构上具有                                 等共同点；能在大肠杆菌细胞中表达出相同抗菌效果的抗菌肽，其原因是                                   。

(2)用PCR技术对MagaininmⅡ基因进行扩增时,加热至       ℃使MagaininmⅡ基因解链为单链，            与该单链中的相应互补序列结合，然后在Taq酶的作用下进行延伸。

(3)下图为某质粒的示意图,若目的基因插入b位点，则筛选出导入重组质粒的受体菌的方法是                                                                 。

请利用所学知识回答基因工程方面的有关问题：

（1）基因工程所用的生物学原理为_________________，其操作的核心步骤为_________________，在操作的过程中没有涉及碱基互补配对的步骤为_________________，获取目的基因的来源有_________________和_________________。

（2）利用PCR（聚合酶链式反应）技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如下图所示）。图中引物A、B为单链DNA片段，它是目的基因子链合成延伸的基础。

PCR过程除需要适宜的温度、模板DNA、引物，还需要_____________、_____________等条件才能扩增出大量DNA片段。

（3）将目的基因导入植物细胞时，采用最多的方法是_________________。目的基因进入受体细胞后的表达过程中，RNA聚合酶需与_________________识别和结合，从而驱动转录过程。最终目的基因是否成功表达，常用_____________方法进行检测，若出现杂交带，表明目的基因已形成蛋白质产品。

（4）蛋白质工程是在基因工程的基础上发展起来的，其基本流程为_________________、

________________、________________、找到对应的脱氧核苷酸序列。

下列哪一项不属于克隆 ( )

红细胞生成素(EPO)是体内促进红细胞生成的一种糖蛋白，可用于治疗肾衰性贫血等疾病。由于天然EP0来源极为有限，目前临床使用的红细胞生成素主要来自于基因工程技术生产的重组人红细胞生成素(rhEPO），其主要生产流程如图：

（1）图中①所指的是         技术，图中②所指的物质是               ，③所指的物质是               。

（2）构建的人EPO基因表达载体必须包括：人EPO基因、复制原点、           、终止子、               等。

（3）培养重组CHO细胞时，为便于清除代谢产物，防止细胞产物积累对细胞自身造成危害，应定期更换           。

（4）检测rhEPO的活性需用抗rhEPO单克隆抗体。分泌单克隆抗体的              细胞，可由rhEPO免疫过的小鼠B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合而成。

下列有关多聚酶链式反应（PCR）的叙述，错误的是（ ）