3.
T-DNA可能随机插入植物基因组内,导致被插入基因发生突变。用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下:种植野生型拟南芥,待植物形成花蕾时,将地上部分浸入农杆菌(其中的T-DNA上带有抗除草剂基因)悬浮液中以实现转化。在适宜条件下培养,收获种子(称为T1代)。
(1)为促进植株侧枝发育以形成更多的花蕾,需要去除_______________,因为后者产生的
_________会抑制侧芽的生长。
(2) 为筛选出已转化的个体,需将T1代播种在含____________的培养基上生长,成熟后自交,收获种子(称为T2 代)。
(3) 为筛选出具有抗盐性状的突变体,需将T2代播种在含___________的培养基上,获得所需个体。
(4)若上述T-DNA的插入造成了基因功能丧失,从该突变体的表现型可以推测野生型基因的存在导致植物的抗盐性______。
(5)根据T-DNA的已知序列,利用PCR技术可以扩增出被插入的基因片段。其过程是:提取_________植株的DNA,用限制酶处理后,再用__________将获得的DNA片段连接成环(如图)以此为模板,从图中A、B、C、D四种单链DNA片断中选取____________作为引物进行扩增,得到的片断将用于获取该基因的全序列信息。