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            • 1.

              嗜热菌可以生活在98℃的高温环境中,研究发现其耐热性与基因H的表达产物有关。下图表示某研究小组利用大肠杆菌对H基因实行的克隆和表达过程,其中 NdeⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ、SalⅠ四种限制酶的识别序列和酶切位点分别为CA↓TATG、G↓AATTC、A↓AGCTT、G↓TCGAC。请分析回答:



              (1)图中的结构A是__________,其主要作用是__________。一个完整的基因表达载体组成,除了质粒1中所示结构以外,还应该含有___________。

              (2)用图中质粒1和H基因构建重组质粒,应选用__________两种限制酶进行切割,影响限制酶处理效果的因素可能有__________(多选)。
              ①反应温度   ②缓冲液pH   ③限制酶的浓度   ④DNA样品的纯度
              (3)实验中发现,重组质粒导入大肠杆菌后H基因的表达效率很低,但在含有质粒2(辅助性质粒)的细胞中,H基因可以高效表达。为了筛选出转入了两种质粒的受体菌,应在筛选平板培养基中添加______,整个实验过程应保持__________操作。
              (4)PCR反应中引物的设计非常关键,据图分析,扩增H基因时应选择的一对引物是_____________。

              A:引物Ⅰ: ...GGGAATTC...;引物Ⅱ: ...CTCATATG...

              B:引物Ⅰ: ...GAATTCCC...;引物Ⅱ: ...CATATGAG...

              C:引物Ⅰ: ...GGAAGCTT...;引物Ⅱ: ...AAGCTTCC...

              D:引物Ⅰ: ...CTCATATG...;引物Ⅱ: ...AAGCTTAAGCTT...

            • 2.

              根据下列所给材料回答问题:

              材料Ⅰ:鱼的抗冻蛋白基因烟草细胞→抗冻烟草

              材料Ⅱ:蜘蛛的丝腺蛋白基因羊的受精卵→转基因羊→产生丝腺蛋白

              材料Ⅲ:人的胰岛素基因大肠杆菌→生产人的胰岛素

              (1)上述生物新品种的产生所共同运用技术的核心步骤是                 

              (2)材料Ⅰ中,需要将鱼的抗冻蛋白基因与载体结合,作为载体必须具备条件之一是含有标记基因,该基因的作用是                。下图为含鱼的抗冻蛋白基因的DNA片段:

              用该DNA片段经EcoRⅠ限制酶切割后共形成      个黏性末端,若图示DNA片段中EcoRⅠ限制酶识别序列的一个碱基突然改变,则可能发生的情况是                                           ;若需在短时间内获得较多的该外源基因,通常采用PCR技术,。该技术的反应体系的主要成分应包含:_______________(写四种)。其反应过程中引物与模板DNA链结合依靠                          原则完成。

              (3)材料Ⅱ中,目的基因在羊乳腺细胞中表达,表达成功的标志是            ,为了避免目的基因和质粒在酶切后产生的末端发生任意连接,需用两种限制酶XbaI和SacI(两种酶切出的粘性末端不同)同时切割含目的基因的DNA片段和质粒。若用Ti质粒作为目的基因的载体,应选用下图中何种Ti质粒?                           



              (4)材料Ⅲ中,将目的基因导入大肠杆菌,首先用       处理大肠杆菌,使之成为                           细胞。

            • 3. 如图为形成cDNA过程和PCR扩增过程示意图.据图分析,下列说法正确的是(  )
              A.催化①过程的酶是RNA聚合酶
              B.④过程发生的变化是引物与单链RNA结合
              C.催化②⑤过程的酶都是DNA聚合酶,都能耐高温
              D.如果RNA单链中A与U之和占该链碱基含量的40%,则一个双链DNA中,A与T之和也占该DNA碱基含量的40%
            • 4. 下列关于PCR的描述中,正确的是(  )
              ①PCR是一种酶促反应         ②引物决定了扩增的特异性 
              ③扩增DNA利用了热变性的原理  ④扩增的对象是氨基酸序列.
              A.①②④
              B.②③④
              C.①③④
              D.①②③
            • 5.
              下列事实能体现细胞全能性的是(  )
              A.诱导小鼠干细胞分化多种组织细胞
              B.棉花根尖细胞经诱导形成幼苗
              C.动物杂交瘤细胞产生单克隆抗体
              D.单细胞的DNA在体外大量扩增
            • 6.
              有关生物技术的叙述不正确的是(  )
              A.植物组织培养过程发生基因选择性表达
              B.显微注射目的基因表达载体利用了细胞膜流动性原理
              C.PCR技术可以扩增目的基因
              D.体内、体外培养杂交瘤细胞均可获得单克隆抗体
            • 7.
              利用PCR技术将某小段DNA分子扩增n代,下列有关叙述错误的是
              A.测定DNA分子两端的核糖核苷酸序列,以便设计引物对
              B.(2n-1)对引物参与子代DNA分子的合成      
              C.向反应体系中加入解旋酶、DNA聚合酶等
              D.保持反应体系温度恒定,确保扩增的正常进行
            • 8.
              在遗传病及刑侦破案中常需要对样品DNA进行分析,PCR技术能快速扩增DNA片段,在几个小时内复制出上百万份的DNA拷贝,有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的问题.据图回答相关问题:

              (1)在相应的横线上写出引物Ⅱ,并在复制这一步骤中将引物Ⅱ置于合适的位置.
              (2)在相应的横线上写出循环一次后生成的DNA分子.
              (3)若将作为原料的四种脱氧核苷酸用32P标记,请分析循环一次后生成的DNA分子的特点: ______ ,循环n次后生成的DNA分子中不含放射性的单链占总单链的比例为 ______ .
              (4)PCR反应过程的前提条件是 ______ ,PCR技术利用DNA的 ______ 原理解决了这个问题.
              (5)在对样品DNA进行分析的过程中发现,DNA掺杂着一些组蛋白,要去除这些组蛋白可加入的物质是 ______ .
            • 9.
              关于PCR技术的叙述,正确的是(  )
              A.设计扩增目的基因的引物时不必考虑表达载体的序列
              B.用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列
              C.PCR体系中一定要添加从受体细胞中提取的DNA聚合酶
              D.PCR反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合酶催化不同的反应
            • 10.
              变异链球菌在牙面的粘附、集聚是龋齿发生的先决条件,转基因可食防龋疫苗是通过基因工程技术,将变异链球菌中与龋齿发生密切相关的抗原基因(PAcA基因)转入植物的表达载体中,利用植物生物反应器生产的可食用基因工程疫苗.
              (1)转基因植物的制备:
              单一使用PAcA基因,机体免疫应答不理想,霍乱毒素中有增强机体免疫应答的氨基酸序列(CTB),将CTB基因与PAcA基因连接成嵌合(PAcA-CTB)基因,作为 ______ 与Ti质粒的T-DNA拼接,并用 ______ 法导入离体的黄瓜叶肉细胞中,经植物组织培养获得转基因植株.
              (2)转基因植株目的基因的PCR鉴定:已知PAcA-CTB基因部分序列如下
              5′---CCGTGT…ATGCCT---3′
              3′---GGCACA…TACGGA---5′
              根据上述序列选择引物 ______ (填字母)进行PCR.
              A.引物:5′-GGCACA-3′
              B.引物:5′-AGGCAT-3′
              C.引物:5′-CCGUGU-3′
              D.引物:5′-CCGTGT-3′
              反应结束后,电泳检测PCR产物,结果如图(1来自未转化植株,2是含PAcA-CTB基因的质粒,3-10来自转基因植物),从结果可以看出, ______ 号植物含有PAcA-CTB基因.

              (3)对上述含PAcA-CTB基因的植株进一步研究,发现其中一些植株体细胞中含两个PAcA-CTB基因(用字母A表示,基因间无累加效应).为了确定这两个基因与染色体的位置关系,研究人员单独种植每株黄瓜,将同一植株上雄花花粉授到雌花柱头上,通过子一代表现型及其分离比进行分析:
              ①若F1中疫苗植株:非疫苗植株= ______ ,则PAcA-CTB基因位于非同源染色体上,基因与染色体的位置关系如图甲所示.

              ②若F1中疫苗植株:非疫苗植株=3:1,则两个基因位于 ______ ,请在图乙中标出基因.
              ③若F1全为疫苗植株,则两个基因位于 ______ ,请在图丙中标出基因.
              (4)上述三种基因与染色体的位置关系适于进行推广种植的是两个基因位于 ______ 的植株.多年后,若出现了非疫苗植株,请写出一种可能的变异类型及产生的原因 ______ .
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