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            • 1． 以下说法正确的是（　　）
              A．所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列
              B．质粒是基因工程中唯一的运载体
              C．运载体必须具备的条件之一是：具有一个或多个限制酶切点，以便与外源基因连接
              D．质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器
              难度：中等
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            • 2． 我国科学家通过基因工程成功培育出转基因抗虫棉．请回答下列问题．
              （1）基因工程常用质粒作为载体，是由于质粒具有    、    等特点．
              （2）利用农杆菌转化法将抗虫基因导入植物细胞，构建重组Ti质粒时，需将含抗虫基因的DNA片段插入到Ti质粒DNA的    区域上．
              （3）利用PCR技术扩增抗虫基因过程中，将温度加热至90-95℃，然后冷却至55-60℃，再加热至70-75℃的目的是    
              （4）农杆菌侵染植物细胞后，可以使抗虫基因插入到植物细胞中染色体的DNA上，则是否一定能表现出抗虫性状？    ，理由是    
              （5）可利用    技术将含有抗虫基因的植物细胞培育成抗虫植株，该技术证明了分化的植物细胞，仍然具有    ．
              难度：中等
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            • 3． Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞．下图为科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗的技术流程图，据图回答有关问题：

              （1）步骤①中，在核移植之前应该采集卵母细胞，采用的主要方法是用    处理，使其排出更多的卵子，然后从    中冲取．
              （2）步骤②中，重组细胞培养到囊胚期，可从其    中分离出ES细胞，该细胞在形态上表现为体积小、细胞核大、核仁明显；在功能上具有发育的    ．
              （3）步骤③中，将含有Rag2基因的表达载体导入ES细胞，常采用    法．为检测Rag2基因是否表达出相应的蛋白质，通常采用    的方法．
              （4）转基因和细胞核移植（克隆）等生物技术存在安全性和伦理问题，如科学家赋予转基因生物某些特殊性状，它们有可能成为“入侵的外来物种”，威胁生态系统中其他生物的生存，这属于转基因生物的    （“食品安全”、“生物安全”或“环境安全”）问题；我国政府对待克隆人的态度是    ，不反对治疗性克隆．
              难度：中等
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            • 4． 干扰素是动物或人体细胞受病毒感染后产生的一类糖蛋白，具有抗病毒、抑制肿瘤及免疫调节等多种生物活性．请分析回答：
              （1）干扰素的产生受细胞内基因的控制，通常处于抑制状态．在病毒刺激下，干扰素基因经    、翻译形成干扰素前体，进一步加工后形成成熟的干扰素，通过    方式分泌到细胞外．
              （2）某些干扰素可作用于宿主细胞膜上的相应受体，激活该细胞核中基因表达产生多种抗病毒蛋白，其中有些蛋白可通过激活RNA酶使病毒的RNA    ，有些则可与    （细胞器）结合，通过抑制病毒多肽链的合成发挥抗病毒作用．
              （3）某些干扰素可抑制肿瘤细胞DNA的合成，通过减慢细胞    分裂过程抑制肿瘤．还有些干扰素可提高吞噬细胞将抗原呈递给    细胞的能力，从而在免疫调节中发挥作用．
              （4）获取干扰素的传统方法是从人的白细胞中提取，但产量很低．科学家利用    酶将干扰素基因与牛乳腺蛋白基因的启动子（即RNA聚合酶    的部位）等调控组件连接在一起，采用    的方法将重组DNA导入牛的    细胞中，经胚胎早期培养一段时间后移植入母体内发育成熟，即可获得能产生干扰素的转基因牛．大大提高了干扰素的产量．
              难度：中等
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            • 5． 人类疾病的转基因动物模型常用于致病机理的探讨及治疗药物的筛选．利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如下图1所示，请据图作答：

              I．（1）卵母细胞除从活体输卵管中采集外，还可从已处死雌鼠的    中获取．
              （2）图中的高血压相关基因作为    ，质粒作为    ，二者需用     切割后连接成重组载体，该过程与质粒上含有    有关．
              （3）子代大鼠如果    和    ，即可分别在分子水平和个体水平上说明高血压相关基因已成功表达，然后可用其建立高血压转基因动物模型．
              II．图2是某科学家利用小鼠纤维母细胞等获得单克隆抗体的实验研究过程．请据图回答：
              （1）①过程类似于植物组织培养技术中的    过程．②过程的实质是    ．
              （2）③过程中需用到的生物诱导方法是    ．
              （3）④处需要筛选，其目的是    ．
              难度：中等
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            • 6． 研究者根据果蝇X染色体上红眼基因B设计出sgRNA，导入果蝇早期胚胎细胞，“敲除”部分胚胎细胞中的红眼基因B，得到镶嵌体果蝇（即复眼中部分小眼呈红色，部分小眼呈白色），如下表．
              sgRNA 浓度（ng/mL）不注射01252505001000
              胚胎存活率（%）16118673
              镶嵌体果蝇比例（%）0010175086
              （1）从实验结果分析，sgRNA的导入    了果蝇胚胎的存活率，若要从相同数量的早期胚胎中获得数量最多的镶嵌体果蝇，应选用的sgRNA浓度为    ng/mL．
              （2）如图所示，敲除基因时，sgRNA与红眼基因B的部分序列互补配对，细胞内的Cas9酶在配对区域定点剪切，引起红眼基因B发生碱基对    ，导致基因突变．该过程中，sgRNA和Cas9酶共同剪切DNA的作用类似于    酶的作用，敲除后需要    酶对DNA上的切口进行修复．

              （3）若研究者要通过测交实验验证镶嵌体雄果蝇的基因组成，应将镶嵌体雄果蝇与表现型为    的果蝇进行杂交，预期杂交后代的表现型是    ．
              （4）这种定点敲除基因的方法为艾滋病的治疗提供了一个思路．HIV通过识别膜蛋白C侵入宿主细胞，研究者可以根据    的核苷酸序列设计sgRNA，导人骨髓    细胞中，有效阻止HIV侵染新分化生成的T淋巴细胞．
              难度：中等
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            • 7． 如图是体外受精技术培育试管动物的大致流程，请回答下列问题：

              （1）精子的顶体内含有    能协助精子穿过卵母细胞的    ．
              （2）体外培养受精卵时，除给予一定量的O2以维持细胞呼吸外，还提供    气体以维持    相对稳定．
              （3）动物的早期胚胎需移植到同种且    与供体相同的动物体内，被移植的胚胎之所以能存活是因为受体对    ．
              （4）如果将某种目的基因导入动物细胞，以期获得新性状，最常用的方法是用显微注射技术将    导入受精卵中，目的基因能够导入到受体细胞内，并且在受体细胞中稳定表达的过程称为    ．
              难度：中等
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            • 8． 羊绒是生长在山羊外表皮层的绒毛，属于稀有的特种动物纤维．绒山羊的毛角蛋白Ⅱ型中间丝（KIFⅡ）基因与其所产的羊绒质量密切相关．用生物工程技术能获得转KIFII基因的高绒质绒山羊，其简单流程如图所示．请回答有关问题：

              （1）在基因表达载体构建过程中，其组成除KIFⅡ基因外，还必须有标记基因．标记基因的作用是    ．过程②中常用    的方法将目的基因导人受精卵．
              （2）过程⑥中，除了给予一定量的O2维持细胞呼吸外，还需要提供CO2气体以维持培养液的    ．
              （3）过程⑦中胚胎在受体内存活的生理基础是受体对移人子宫的外来胚胎不发生    反应．为使代孕母羊与供体母羊生殖器官的生理状态相同，需用相关激素对代孕母羊作    处理，进行过程⑦的最佳时期是    ．
              （4）若要同时获得多只与此转基因母羊相同的羊，可对早期胚胎进行    ，操作若选用囊胚期的胚胎，操作过程中要特别注意    ．
              难度：中等
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            • 9． 产肠毒素大肠杆菌可分泌EtpA蛋白介导菌体与宿主细胞的粘附，引起腹泻．酿酒酵母是肠道中的有益菌，将控制EtpA蛋白的基因导入酿酒酵母中，使酿酒酵母具有与产肠毒素大肠杆菌竞争粘附位点的能力．有关说法正确的是（　　）
              A．EtpA蛋白介导的粘附过程和受体无关
              B．EtpA蛋白在肠道内引起机体免疫反应
              C．可通过PCR技术扩增EtpA基因
              D．可通过显微注射法导入EtpA基因
              难度：中等
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            • 10． 疫苗和抗体在人类预防与诊疗传染性疾病的过程中经常使用．已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，疫苗生产和抗体制备的部分流程如图：

              （1）过程①进行的是    过程．
              （2）过程④要检测A基因是否进入受体细胞，常用的方法是DNA分子杂交技术，此过程用到的分子探针是    ；要检测A基因在受体细胞内是否翻译出蛋白质，需用    法．
              （3）与血清抗体相比，单克隆抗体突出的优点是    ，并能大量制备．
              （4）单克隆抗体的制备过程中，运用了动物细胞工程中的    和    两大技术．
              （5）单克隆抗体的制备过程中，经过两次筛选，第一次筛选时所用的培养基是特定的    培养基；第二次筛选的目的是    ．
              难度：中等
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