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            • 1. 以下是科学家采用不同方法培育种牛的过程,a-h为操作过程,请据图冋答有关问题:

              (1)图中c的操作名称是    ,d、f操作名称是    
              (2)图中用到的激素是    ,其目的是获得更多的卵母细胞,经受精后可得到早期胚胎.其受精后发育可得到早期胚胎;图中早期胚胎属于发育的    期,其中胚胎干细胞来源于    (填数字标号).
              (3)过程h常用的方法是    .采用    技术来检测转基因牛D的DNA上是否插入目的基因.
            • 2. 如图是四种不同质粒的示意图,其中ori为复制必需的序列,amp为氨苄青霉素抗性基因,tet为四环素抗性基因,箭头表示同一种限制酶的酶切位点.下列有关叙述正确的是(  )
              A.基因amp和tet是一对等位基因,常作为基因工程中的标记基因
              B.质粒指细菌细胞中能自我复制的小型环状的DNA和动植物病毒的DNA
              C.限制酶的作用部位是DNA分子中特定的两个核苷酸之间的氢键
              D.用质粒4将目的基因导入大肠杆菌,该菌不能在含四环素的培养基上生长
            • 3. (2016•江苏)近年诞生的具有划时代意义的CRISPR/Cas9基因编辑技术可简单、准确地进行基因定点编辑.其原理是由一条单链向导RNA引导核酸内切酶Cas9到一个特定的基因位点进行切割.通过设计向导RNA中20个碱基的识别序列,可人为选择DNA上的目标位点进行切割(见如图).下列相关叙述错误的是(  )
              A.Cas9蛋白由相应基因指导在核糖体中合成
              B.向导RNA中的双链区遵循碱基配对原则
              C.向导RNA可在逆转录酶催化下合成
              D.若α链剪切位点附近序列为…TCCAGAATC…则相应的识别序列为…UCCAGAAUC…
            • 4. 日本的一个研究小组将Aequorea victoria水母中编码绿色荧光蛋白(GFP)的基因导入长尾猕猴的卵母细胞中,最终获得在紫外线照射下能发绿光的“绿光猴”.请回答下列相关问题:
              (1)从水母中获取GFP基因后,可利用    技术获得大量该基因,该过程所利用的酶必须具有    的特点.
              (2)导入目的基因的卵母细胞需培养至    ,才能与获能的精子受精.精子和卵细胞间的信息交流是通过    方式实现的.
              (3)受精卵培养至    时期可进行胚胎移植,移植的胚胎在受体内存活的生理学基础是    
              (4)GFP基因能在猕猴细胞中表达,是因为不同生物共用    ,若“绿光猴”只是部分细胞合成了绿色荧光蛋白,这是     的结果.
            • 5. 某动物能产生的一种有高利用价值的蛋白质,但产量较低.研究人员利用基因工程等技术,将该蛋白质的基因导入某双子叶植物体内,发现该基因在根部有较高的表达效应.
              请回答下列相关问题:
              (1)研究人员以动物体内该蛋白质的mRNA为模板,经反转录产生的    作为目的基因.在构建基因表达载体时,在目的基因首端一定要有    序列,尾端要有     序列,才能使目的基因正常转录.
              (2)将目的基因导入该植物细胞,可用    法,该方法能使Ti质粒上的    将目的基因插入到植物细胞的染色体上.
              (3)若要检测该目的基因在植物体内的表达最终产物,应该取植物的    细胞,提取蛋白质,利用    技术进行检测,如果出现    ,则表明目的基因成功表达.
            • 6. 油菜的株高由等位基因G和g决定,GG为高杆,Gg为中杆,gg为矮杆.B基因是另一种植物的高杆基因,B基因与G基因在调控油菜的株高上有相同的效果,并且株高与B基因和G基因的数量呈正相关,科学家利用B基因培育转基因油菜.请回答问题:
              (1)操作时,一般先将B基因转入农杆菌,常用质粒作为    ,质粒是一种双链闭合环状的    分子.
              (2)若用两种识别切割序列完全不同的限制酶M和N(如图1所示)分别切割质粒和目的基因,得到的粘性末端在    酶的作用下相互连接,形成的碱基对序列是    (依照图1的形式作答),连接后的序列    (“可以”或“不可以”)用M酶或N酶进行切割.
              (3)在含有B基因的DNA片段上,限制酶M和N的切割位点如图2所示,Ⅱ所示空白部分为B基因位置.若采用直接从供体细胞中分离方法提取B基因,可选用酶    来切割. 
              (4)若将一个B基因转移到矮杆油菜的染色体上并在植株中得到成功表达,且B基因与g基因位于非同源染色体上,这样的转基因油菜植株表现型为    
              (5)若将一个B基因转移到中杆油菜的染色体上并在植株中得到成功表达,培育了甲~丁四种转基因油菜(如图3所示).

              ①与甲的株高相同的是    .四种转基因油菜分别自交,在不考虑交叉互换的前提下,子代有3种表现型的是    
              ②另有一种转基因油菜的B基因插入位置与前四种不同,自交子代也有3种表现型,请在图4中的染色体上标出B基因的插入位置.
            • 7. 请分析回答下列有关基因工程问题
              胰岛素A、B链分别表达法是生产胰岛素的方法之一. 图1是该方法所用的基因表达载体,图2表示利用大肠杆菌作为工  程菌生产人胰岛素的基本流程(融合蛋白  A、B分别表示β-半乳糖苷酶与胰岛素A、B链融合的蛋白).

              (1)图1基因表达载体中没有标注出来的基本结构是    
              (2)图1中启动子是     酶识别和结合的部位,有了它才能启动目的基因的表达;氨苄青霉素抗性基因的作用是    
              (3)构建基因表达载体时必需的工具酶有    
              (4)β-半乳糖苷酶与胰岛素A链或B链融合表达,可将胰岛素肽链上蛋白酶的切割位点隐藏在内部,其意义在于    
              (5)溴化氰能切断肽链中甲硫氨酸羧基端的肽键,用溴化氰处理相应的融合蛋白能获得完整的A链或B链,且β-半乳糖苷酶被切成多个肽段,这是因为    
              (6)根据图2中胰岛素的结构,请推测每个胰岛素分子中所含游离氨基的数量.你的推测结果是    ,理由是    
              (7)如果图1所示的载体可被A、B、C三种限制性内切酶同时切割.单独A切割得一条长链,单独B切也得一条长链,A和C同时切割得2个500bp和1个2666bp片段,B和C同时切割得2个250bp和1个3166bp片段.若以A的切割位点为计算起点,则B的切割位点与A点最短长度为    ,C的两个切割位点与A点的最短距离分别为        
              (8)如限制酶SmaI能识别如图3的「5‘-CCCGGG-3’」6个碱基序列,并在中央(图中箭头位置)切断DNA.则用限制酶SmaI处理如图的线状双链DNA时,请以箭头标出切割位置.
            • 8. 干扰素是治疗癌症的重要药物,它必须从血液中提取,每升人血只能提取0.5 μg,所以价格昂贵.现在美国加利福尼亚州的基因公司用如下图的方式生产干扰素.阅读材料完成问题.

              干扰素基因在基因工程中称为    .用    技术可使获得的基因迅速扩增.此基因与细菌的质粒结合,构建基因表达载体要用同种限制酶处理基因和质粒特定核苷酸之间的磷酸二酯键,使两者露出相同的黏性末端,再用DNA连接酶将二者连接成基因表达载体,然后将其导入酵母菌体内.酵母菌在基因工程中称为    
            • 9. 关于现代生物技术相关知识的叙述,正确的是(  )
              A.蛋白质工程通常是在分子水平上对蛋白质结构进行直接改造
              B.胚胎移植的胚胎只能来自体内受精和体外受精的受精卵发育的桑椹胚或囊胚
              C.检测基因工程中抗虫棉是否培育成功,最方便的方法是检测棉花植株是否有相应性状
              D.在胚胎移植中,对供体母羊要做超数排卵处理,对供、受体要做同期发情处理
            • 10. 利用农杆菌转化法,将抗逆基因转入至拟南芥(2n=10)中,获得不同株系的拟南芥.
              (1)从农杆菌中获得带有潮霉素抗性基因(H基因)的Ti质粒,将抗逆基因插入到Ti质粒的    上,因Ti质粒上的此结构具有    的特点.
              (2)为确定不同拟南芥株系导入的基因在染色体上的相对位置,科研人员筛选并通过自交获得转基因成功的4个纯合株系:1、2、3、4,做了如下杂交实验.
              ①4个纯合株系植株分别与非转基因植株正、反交得F1,F1自交获得F2.F2中抗潮霉素性状与不抗潮霉素性状的植株比例为    ,表明每个株系的H基因均位于一对同源染色体上的同一位点,但不能确定4个株系的H基因是否位于同一对同源染色体上.
              ②将上述4个纯合株系植株间进行配组形成6个杂交组合(1×2、1×3、1×4、2×3、2×4、3×4),每个组合得F1,F1自交获得F2
              a.除2×4组合外,其它杂交组合F2中抗潮霉素性状与不抗潮霉素性状的植株比例均为15:1,表明1、2、3三个株系相比较,它们的H基因位于    (同源染色体/非同源染色体)上.
              b.2×4组合F2植株全表现抗潮霉素性状.假设株系1中H基因在染色体上的位置如图1所示,请推测株系2中H基因的位置和株系4中H基因的两种可能的位置(在图2中标注,竖线代表染色体,横线代表基因的位置).

              c.根据上述实验推测,利用农杆菌转化法导入到拟南芥中的基因的插入位置是    (随机/固定)的.
              (3)潮霉素抗性可作为转基因植株后代具有抗逆基因的初步判断指标.实验中发现上述纯合株系自交后代的抗逆比例未达到100%,可能的原因是    
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