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            • 1． 目前，精子载体法逐渐成为最具诱惑力的制备转基因动物方法之一，该方法以精子作为外源基因的载体，使精子携带外源基因进入卵细胞受精．下图表示利用该方法制备转基因鼠的基本流程．请据图回答：

              （1）获取外源基因常用到的工具酶是    ．为了提高实验成功率，通常利用    技术获得大量标记的外源基因．
              （2）过程②采用的是    技术，该过程中应对已经    进行获能处理．
              （3）过程③需要在    （至少写出两点）等条件下培养．
              （4）为了获得更多的早期胚胎，常用    激素对供体进行处理，促使其    ．从而获得更多的卵母细胞．
              难度：中等
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            • 2． 油菜的株高由等位基因G和g决定，GG为高杆，Gg为中杆，gg为矮杆．B基因是另一种植物的高杆基因，B基因与G基因在调控油菜的株高上有相同的效果，并且株高与B基因和G基因的数量呈正相关，科学家利用B基因培育转基因油菜．请回答问题：
              （1）操作时，一般先将B基因转入农杆菌，常用质粒作为    ，质粒是一种双链闭合环状的    分子．
              （2）若用两种识别切割序列完全不同的限制酶M和N（如图1所示）分别切割质粒和目的基因，得到的粘性末端在    酶的作用下相互连接，形成的碱基对序列是    （依照图1的形式作答），连接后的序列    （“可以”或“不可以”）用M酶或N酶进行切割．
              （3）在含有B基因的DNA片段上，限制酶M和N的切割位点如图2所示，Ⅱ所示空白部分为B基因位置．若采用直接从供体细胞中分离方法提取B基因，可选用酶    来切割． 
              （4）若将一个B基因转移到矮杆油菜的染色体上并在植株中得到成功表达，且B基因与g基因位于非同源染色体上，这样的转基因油菜植株表现型为    ．
              （5）若将一个B基因转移到中杆油菜的染色体上并在植株中得到成功表达，培育了甲～丁四种转基因油菜（如图3所示）．

              ①与甲的株高相同的是    ．四种转基因油菜分别自交，在不考虑交叉互换的前提下，子代有3种表现型的是    ．
              ②另有一种转基因油菜的B基因插入位置与前四种不同，自交子代也有3种表现型，请在图4中的染色体上标出B基因的插入位置．
              难度：中等
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            • 3． 科学家从某细菌中提取抗盐基因，转入烟草并培育成转基因抗盐烟草．下图是转基因抗盐烟草的培育过程，含目的基因的DNA和质粒上的箭头表示相关的酶切位点．请分析回答下列问题：

              （1）在该过程中，研究人员首先获取了抗盐基因（目的基因），并采用    技术对目的基因进行扩增，该技术需要的条件是    、酶、原料、模板，该技术必须用    酶；然后构建基因表达载体，基因表达载体中除了具有目的基因、启动子和终止子之外，还需具有    ．
              （2）用图中的质粒和目的基因构建重组质粒，不能使用SmaⅠ酶切割，原因是    ．图中①②过程为防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，应选用    酶对外源DNA、质粒进行切割．
              （3）为确定转基因抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的    作探针进行分子杂交检测，又要在个体水平上鉴定，后者具体过程是    ．
              难度：中等
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            • 4． 研究人员将抗虫基因（SCK基因）导入水稻培育抗虫转基因水稻，在该工程中所用的基因“剪刀”能识别的序列是-GGATCC-，切点在GG之间．同时卡那霉素抗性基因（kan）常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长．下面为培育转基因水稻过程示意图，请回答：

              （1）请画出质粒的切割点被切割后形成的黏性末端的示意图    
              （2）培养基2除含有必要营养物质、激素外，还必须加入    ．       
              （3）某些抗虫植株体细胞含两个SCK基因，假设这两个基因在染色体上随机整合，出现如图2所示三种情况
              甲图个体自交，F1中抗虫植株和非抗虫植株之间的比例为    ，乙图个体自交，子代中抗虫植株和非抗虫植株之间的比例为    ，丙图个体自交，F1中抗虫植株和非抗虫植株之间的比例为    ．
              难度：中等
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            • 5． 转基因生物可用于生产人类所需要的药用蛋白，如激素、抗体、疫苗、酶等．图甲是通过生物工程培育能产生人胰岛素的烟草的过程．请据图回答下列问题：

              （1）基因工程的核心步骤是    （填字母）．此过程所需的工具酶是    ．
              （2）图乙是载体和反转录得到的胰岛素基因的片段，已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是-G↓GATCC-，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是-↓GATC-．GeneⅠ和GeneⅡ为质粒上的标记基因，根据图示分析，应用限制酶    切割质粒，用限制酶    切割目的基因．构建的重组质粒中，除含有外源基因、标记基因外，还必须含有    ．
              （3）B过程中，常用    处理使细菌成为感受态细胞，从而利于重组质粒的导入．
              （4）如果从分子水平检测人胰岛素基因是否表达成功，可以采用    方法．
              难度：中等
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            • 6． 请分析回答下列有关基因工程问题
              胰岛素A、B链分别表达法是生产胰岛素的方法之一． 图1是该方法所用的基因表达载体，图2表示利用大肠杆菌作为工  程菌生产人胰岛素的基本流程（融合蛋白  A、B分别表示β-半乳糖苷酶与胰岛素A、B链融合的蛋白）．

              （1）图1基因表达载体中没有标注出来的基本结构是    ．
              （2）图1中启动子是     酶识别和结合的部位，有了它才能启动目的基因的表达；氨苄青霉素抗性基因的作用是    ．
              （3）构建基因表达载体时必需的工具酶有    ．
              （4）β-半乳糖苷酶与胰岛素A链或B链融合表达，可将胰岛素肽链上蛋白酶的切割位点隐藏在内部，其意义在于    ．
              （5）溴化氰能切断肽链中甲硫氨酸羧基端的肽键，用溴化氰处理相应的融合蛋白能获得完整的A链或B链，且β-半乳糖苷酶被切成多个肽段，这是因为    ．
              （6）根据图2中胰岛素的结构，请推测每个胰岛素分子中所含游离氨基的数量．你的推测结果是    ，理由是    ．
              （7）如果图1所示的载体可被A、B、C三种限制性内切酶同时切割．单独A切割得一条长链，单独B切也得一条长链，A和C同时切割得2个500bp和1个2666bp片段，B和C同时切割得2个250bp和1个3166bp片段．若以A的切割位点为计算起点，则B的切割位点与A点最短长度为    ，C的两个切割位点与A点的最短距离分别为    、    ．
              （8）如限制酶SmaI能识别如图3的「5‘-CCCGGG-3’」6个碱基序列，并在中央（图中箭头位置）切断DNA．则用限制酶SmaI处理如图的线状双链DNA时，请以箭头标出切割位置．
              难度：中等
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            • 7． 图一是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图，请据图作答．

              （1）能否利用人的皮肤细胞来完成①过程？    并说明理由：    ．
              （2）若A中共有a个碱基对，其中鸟嘌呤有b个，则③④⑤过程连续进行4次，至少需要提供胸腺嘧啶    个．
              （3）如图二是运载体和胰岛素基因的某个片段，已知限制酶I的识别序列和切点是-G↓GATCC-，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是-↓GATC-．Gene I和 Gene II为标记基因，根据图示，判断下列操作正确的是    ．

              A．质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割
              B．质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割
              C．目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割
              D．目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割
              （4）为使过程⑧更易进行，可用    （药剂）处理D．通过图一方法生产的胰岛素可能不具备生物活性，为什么？
              （5）人的基因能和异种生物的基因拼接在一起，是因为    ．
              （6）利用转基因牛、羊乳汁提取药物工艺简单，甚至可能直接饮用治病．如果将药物蛋白基因移到动物如牛、羊的膀胱上皮细胞中，利用转基因牛羊尿液生产提取药物比乳汁提取药物的更大优越性在于    ．
              难度：中等
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            • 8． 干扰素是治疗癌症的重要药物，它必须从血液中提取，每升人血只能提取0.5 μg，所以价格昂贵．现在美国加利福尼亚州的基因公司用如下图的方式生产干扰素．阅读材料完成问题．

              干扰素基因在基因工程中称为    ．用    技术可使获得的基因迅速扩增．此基因与细菌的质粒结合，构建基因表达载体要用同种限制酶处理基因和质粒特定核苷酸之间的磷酸二酯键，使两者露出相同的黏性末端，再用DNA连接酶将二者连接成基因表达载体，然后将其导入酵母菌体内．酵母菌在基因工程中称为    ．
              难度：中等
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            • 9． 利用农杆菌转化法，将抗逆基因转入至拟南芥（2n=10）中，获得不同株系的拟南芥．
              （1）从农杆菌中获得带有潮霉素抗性基因（H基因）的Ti质粒，将抗逆基因插入到Ti质粒的    上，因Ti质粒上的此结构具有    的特点．
              （2）为确定不同拟南芥株系导入的基因在染色体上的相对位置，科研人员筛选并通过自交获得转基因成功的4个纯合株系：1、2、3、4，做了如下杂交实验．
              ①4个纯合株系植株分别与非转基因植株正、反交得F1，F1自交获得F2．F2中抗潮霉素性状与不抗潮霉素性状的植株比例为    ，表明每个株系的H基因均位于一对同源染色体上的同一位点，但不能确定4个株系的H基因是否位于同一对同源染色体上．
              ②将上述4个纯合株系植株间进行配组形成6个杂交组合（1×2、1×3、1×4、2×3、2×4、3×4），每个组合得F1，F1自交获得F2．
              a．除2×4组合外，其它杂交组合F2中抗潮霉素性状与不抗潮霉素性状的植株比例均为15：1，表明1、2、3三个株系相比较，它们的H基因位于    （同源染色体/非同源染色体）上．
              b．2×4组合F2植株全表现抗潮霉素性状．假设株系1中H基因在染色体上的位置如图1所示，请推测株系2中H基因的位置和株系4中H基因的两种可能的位置（在图2中标注，竖线代表染色体，横线代表基因的位置）．

              c．根据上述实验推测，利用农杆菌转化法导入到拟南芥中的基因的插入位置是    （随机/固定）的．
              （3）潮霉素抗性可作为转基因植株后代具有抗逆基因的初步判断指标．实验中发现上述纯合株系自交后代的抗逆比例未达到100%，可能的原因是    ．
              难度：中等
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            • 10． 埃博拉病毒（EBO）圼纤维状，EBO衣壳外有包膜，包膜上有5种蛋内棘突（VP系列蛋白和GP蛋白），其中GP蛋白最为关键，能被宿主细胞强烈识別．
              （1）基因疫苗指的是DNA疫苗，耍获得编码GP蛋白抗原的基因疫苗，首先要提取出病原体的RNA，并将RNA    ，要大量获得表达特异抗原的基因，可采用    技术．
              （2）科研人员利用经EBO免疫后小鼠的    细胞与鼠的瘤细胞进行杂交，筛选后进一歩培养的是    细胞，此细胞的特点是    ．可以用其产生的抗体与药物制成“生物导弹”，抗击埃博拉病毒（册（EBO）．
              （3）为了从分泌乳汁中生产GP蛋白，在基因导入牛受体细胞前，基因的首段必须含有使其仅能在牛的乳腺细胞中特异性农达的    ．当其与    识别和结合，才能驱动转录过程，最终翮译成功．
              （4）为了提商胚胎利叫率，可采用胚胎分割技术．进行胚胎分割时，应选择发育良好、形态正常的    进行操作．从分子水平检测转基因牛足否培育成功可以通过    技术．
              难度：中等
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