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            • 1． 据统计，维生素A缺乏每年导致67万名五岁以下儿童死亡．因此科学家研发了一种通过基因工程使得稻米的食用部分胚乳含有维生素A的前体--胡萝卜素的大米，胡萝卜素在人体内会转化成维生素A，可以缓解人体维生素A缺乏．这种大米的制作过程应用了根癌农杆菌介导法进行转基因操作，将能够合成胡萝卜素的酶的基因重组后导入大米的基因组中，具体原理如图1所示．

              （1）图1原理中X表示    ；Y过程表示    ．
              （2）图1中Z过程需要用到的植物激素是    （多选）
              A．生长激素 B．细胞分裂素 C．赤霉素 D．脱落酸 E．乙烯 F．吲哚乙酸
              根癌农杆菌介导法转基因需要利用根癌农杆菌的Ti质粒完成，图2是Ti质粒的具体组成．（T-DNA区大小约17kb）
              （3）若将图2质粒用限制酶I与限制酶II进行完全酶切（各个片段大小不一致），并用凝胶电泳分离酶切后的片段，电泳时分子量越小扩散越快，则电泳结果应为图3（箭头为电泳方向）中的    ．
              （4）为了筛选符合条件的农杆菌，可以在培养基中加入卡那霉素进行筛选．则可以在此培养基中生存的农杆菌类型为    ．
              （5）根癌农杆菌介导法转基因原理如图4所示．当植物受伤时会产生一种信号分子，该信号会作用于农杆菌细胞表面的    ．试分析接受信号分子后农杆菌将T-DNA导入植物细胞的过程：    ．
              难度：中等
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            • 2． 利用基因工程可以使哺乳动物变成“批量生产药物的工厂”，这种转基因动物可用来生产药用蛋白如生长激素、血清白蛋白等．回答下列问题：
              （1）基因工程运用的原理是    ．
              （2）科学家利用    （基因工程常用的工具酶）将生长激素基因与牛的乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，通过    法导入牛的受精卵中．
              （3）上述所得到的受精卵需经体外培养至    阶段方可移植到母牛子宫内．培养动物胚胎的培养液中除一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及    等物质．
              （4）转基因牛进入泌乳期后，生长激素基因在乳腺细胞中通过    和    表达出生长激素．
              难度：中等
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            • 3． （2016•天津模拟）某线性DNA分子含有5000个碱基对（bp），先用限制酶a切割，再把得到的产物用限制酶b切割，得到的DNA片段大小如表．限制酶a、b的识别序列和切割位点如图所示．下列有关说法正确的是（　　）
              酶a切割产物（bp）酶b再次切割产物（bp）
              2100；1400；1000；5001900；200；800；600；1000；500
              A．该DNA分子中酶a与酶b的识别序列分别是3个和5
              B．酶a与酶b的识别序列不同，所以切出的黏性末端不能相互连接
              C．由图可知酶a与酶b切断的化学键不相同
              D．若酶a切割与该DNA序列相同的质粒，得到的切割产物为3种
              难度：中等
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            • 4． （2016•桂林模拟）科学工作者欲培育能产生含铁量较高的转基因花生新品种，具体步骤如图所示：
              （1）培养基1中经过    得
              到愈伤组织，培养基2中筛选的方法是在培养基中加入一定量的    ．在单克隆抗体制备的过程中也进行了筛选，其中第一次筛选的目的是    ．
              （2）若铁结合蛋白基因来自菜豆，利用菜豆细胞内的    为模板，通过反转录形成cDNA，与    连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群体就叫做菜豆的    ．
              （3）图中将目的基因导人受体细胞的方法为    ．要想检测导人的铁结合蛋白基因是否表达，在分子水平上可用    杂交法进行检测．
              （4）图中用到的植物细胞工程技术是    ，其原理是植物细胞具有    ．
              难度：中等
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            • 5． 内皮素（ET）是一种含21个氨基酸的多肽，与高血压、糖尿病、癌症等有着密切联系．研究发现内皮素功能异常与内皮素主要受体ETA有关，科研人员通过构建表达载体，实现了ETA基因在细胞中高效表达．其过程如下（图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的识别序列为CCC↓GGG，限制酶XhoⅠ的识别序列为C↓TCGAG）．据图回答下列问题：

              （1）图中ETA基因能够在大肠杆菌细胞内表达的原因是    ．
              （2）过程①中需要用    酶处理，过程③中，限制酶XhoⅠ切割DNA形成的黏性末端是    ．用两种限制酶切割，获得不同的黏性末端，其主要目的是    ．
              （3）图中的基因表达载体至少还缺少    ，鉴定ETA基因是否导入受体细胞需要用放射性同位素或荧光分子标记的    作探针．
              （4）已知荧光显微镜可以通过检测荧光的强度来判断SNAP基因是否表达及表达量．因此，利用SNAP基因与ETA基因结合构成融合基因，目的是    ．
              （5）人皮肤黑色素细胞上有内皮素的特异受体，内皮素与黑色素细胞膜上的受体结合后，会刺激黑色素细胞的增殖、分化并激活酪氨酸酶的活性，从而使黑色素增加．美容时可以利用注射ETA达到美白祛斑效果，原因是    ，从而抑制了黑色素细胞的增殖和黑色素的形成．
              难度：中等
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            • 6． 下面是利用奶山羊乳腺生物反应器制备药用白蛋白的流程图，请回答下列问题：

              （1）若要大量获得目的基因，可使用    扩增白蛋白基因，通过③构建的重组表达载体包括目的基因、启动子、终止子和    、复制原点等部分．该重组表达载体导入的受精卵性染色体组成应为    ．
              （2）如果需要通过①采集到更多的卵子，常用的激素是    ；通过②采集的精子需    后才能进行受精作用．
              （3）在体外培养受精卵时，除了给予一定量的O2以维持细胞呼吸外，还需要提供    （气体）以维持    ．
              （4）为使⑤能成功进行，简要对奶山羊C进行    处理，使之与供体的生理状况保持相同．
              难度：中等
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            • 7． 血管内皮生长因子（VEGF）是目前发现的诱导肿瘤血管生成的最强烈的血锌生成因子，针对VEGF生产的抗肿瘤药物，是治疗癌症的一个方向；芝加哥大学的Katherine Knight博士成功地在转基因兔中获得骨髄瘤样肿瘤，经技术改进，能高产量地生产兔单克隆抗体：我国江苏省某公司首次在全球成功开发出人源化兔单抗药物“注射用人源化抗VEGF单克隆抗体”（SIM63），有效打破了跨国公司的技术垄断．人源化抗体可以大大减少异源抗体对人类机体造成的免疫副反应．请回答下列相关问题：
              （1）动物细胞在体外培养的技术属于    工程，由于人们对动物细胞所需的营养物质没有完全搞淸楚，在使用合成培养基时，通常需要加入    等一些天然成分：在培养时除提供细胞所需的O2外，还需要CO2，其作用是    ．
              （2）在基因工程中，将目的基因导入动物细胞现今极常用、极有效的方法是    ，要在短时间内扩增大量的目的基因采用    技术，这个技术中的关键酶是    ．
              （3）当VEGF作为抗原进入动物体内时，动物体内的某些B细胞分化为浆细胞，这种浆细胞只分泌针对VEGF的一种抗体，但B细胞在体外培养不会无限增殖，解决这一问题的方法是通过动物细胞融合技术得到杂交瘤细胞，常用的化学诱导融合试剂为    ，要分离出杂交瘤细胞，应该用    培养基进行筛选，单克隆抗体最主要的优点是它的    ，并可大量制备．
              难度：中等
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            • 8． 科学家利用生物工程培育出转基因绿色荧光鼠，回答以下相关问题：
              （1）绿色荧光基因可从cDNA文库中获取，应用之前需要在基因首端加入    ，它是    酶的结合位点．
              （2）构建基因表达载体时，常用的运载体有    ．一般将重组DNA导入小鼠的    细胞．
              （3）生物体对于外来器官或细胞具有    反应，原因是对于机体，外来移植物是    ，此过程中有识别作用但无特异性识别功能的免疫细胞是    ．但在胚胎移植过程中，受体小鼠对移入子宫的早期胚胎基本上不发生此种情况，原因是对受体小鼠已采取    处理．
              难度：中等
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            • 9． 埃博拉病毒（EBO）中EBOV是一种烈性的、泛嗜性的病毒，它首先破坏吞噬细胞，其次是肝、脾等细胞，进而导致血管通透性增加，出现严重的出血热现象．目前尚无针对该病毒的特效药或疫苗．
              （1）EBOV感染者的血清中很难形成高浓度的抗体，这是因为    ．
              （2）较难制作EBO疫苗的原因与其遗传物质的种类以及表达方式有关．EBO病毒容易变异，这是因为    ．
              （3）如图示利用“细胞技术”研制抗击EBO的药物与疫苗：过程①获得的甲细胞是    细胞；图中所用瘤细胞的作用是    ．要获得纯净的单一品种抗体，上述操作的要点是    ．

              （4）还可以利用转基因技术生产EBO蛋白疫苗．EBO结构和基因组如图所示．EBO衣壳外的包膜上有5种蛋白棘突（包括GP蛋白和VP系列蛋白），其中GP蛋白最为关键，能被宿主细胞强烈识别．该技术的目的基因是    ．

              （5）腺病毒（基因E与复制、转录有关；基因L是腺病毒衣壳基因）具有弱致病性，但病毒在人体细胞内增殖会导致正常细胞裂解、死亡．因此，需要对腺病毒进行改造．如图示腺病毒基因组、转基因技术生产EBO蛋白疫苗与重组病毒粒子疫苗的基本过程．

              以EBO病毒包膜蛋白作为疫苗比较安全的原因是    ．生产含目的基因重组病毒粒子作为目的基因的运载体，优点是    ；为保障安全，基因重组病毒粒子需要除去自身原本的一些基因，改用辅助质粒携带这些基因．则除去的基因主要是    两类基因．
              （6）辅助质粒携带EBO病毒上的这些基因，与EBO携带一样，均能在真核细胞中表达，说明    ．
              难度：中等
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            • 10． 科学家对鼠源杂交瘤抗体进行改造，生产出效果更好的鼠-人嵌合抗体，用于癌症治疗．请回答相关问题：
              （1）利用蛋白质工程技术对鼠源杂交瘤抗体进行改造时，首先必须根据预期    ，设计    ，最终通过基因拼接，将鼠源抗体基因改造成鼠--人嵌合抗体基因，然后导入到鼠淋巴细胞中表达，其中构建基因表达载体时需要的工具酶是    ，检测该基因在淋巴细胞中的表达可用    技术．
              （2）制备单克隆抗体的原理是：克隆    细胞形成的细胞群，并产生大量、单一的抗体．在诱导细胞融合后有两次筛选，其中用特定的选择性培养基筛选的是    ．与一般的血清抗体相比，单克隆抗体的优点是    ．
              （3）生产单克隆抗体一般不直接培养浆细胞，主要原因是    ．
              难度：中等
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