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            • 1． 埃博拉病毒（EBO）圼纤维状，EBO衣壳外有包膜，包膜上有5种蛋内棘突（VP系列蛋白和GP蛋白），其中GP蛋白最为关键，能被宿主细胞强烈识別．
              （1）基因疫苗指的是DNA疫苗，耍获得编码GP蛋白抗原的基因疫苗，首先要提取出病原体的RNA，并将RNA    ，要大量获得表达特异抗原的基因，可采用    技术．
              （2）科研人员利用经EBO免疫后小鼠的    细胞与鼠的瘤细胞进行杂交，筛选后进一歩培养的是    细胞，此细胞的特点是    ．可以用其产生的抗体与药物制成“生物导弹”，抗击埃博拉病毒（册（EBO）．
              （3）为了从分泌乳汁中生产GP蛋白，在基因导入牛受体细胞前，基因的首段必须含有使其仅能在牛的乳腺细胞中特异性农达的    ．当其与    识别和结合，才能驱动转录过程，最终翮译成功．
              （4）为了提商胚胎利叫率，可采用胚胎分割技术．进行胚胎分割时，应选择发育良好、形态正常的    进行操作．从分子水平检测转基因牛足否培育成功可以通过    技术．
              难度：中等
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            • 2． 科学家利用土壤农杆菌把编码霍乱毒素的无毒性β链的基因转移到苜蓿细胞，再将其培养成幼苗，食用这种苜蓿后，霍乱毒素β链很快被喉、肠胃等部位的分泌性粘液细胞吸收，刺激特异性抗体的大量产生，使机体获得对霍乱的免疫．其具体过程如下：

              （1）构建重组DNA分子常用的工具酶是    ，基因工程中构建基因表达载体的目的是    ．
              （2）图中过程②采用的方法是    ，Ti质粒上有一个tms片段能促进生长素的大量合成，在对Ti质粒改造时要将该片段去除，其原因是    ．
              （3）该实验中将农杆菌转入苜蓿细胞的原生质体后，需再生细胞壁，实验室检测原生质体是否再生出细胞壁的方法是    ．
              （4）霍乱毒素β链能诱导机体产生特异性抗体，机体内能产生特异性抗体的细胞是    ，该细胞在免疫调节中可能由    增殖分化形成．
              难度：中等
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            • 3． 下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注．请回答下列问题：
              限制酶BamHⅠBclⅠSau3AⅠHindⅢ
              识别序列及切割位点

              （1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用    两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过    酶作用后获得重组质粒．为了扩增重组质粒，需将其转入处于    态的大肠杆菌．
              （2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加    平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中    ．
              （3）若BamH  I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为    ，对于该部位，这两种酶    （填“都能”、“都不能”或“只有一种能”）切开．
              （4）若用Sau3A I切图1质粒最多可能获得    种大小不同的DNA片段．
              难度：中等
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            • 4． 癌胚抗原（CEA）是一种位于肿痛细胞膜表面的蛋白，白细胞介素（IL-2）是一种淋巴因子．研究人员利用质粒plRES、CEA基因、IL-2基因，分别构建了重组质粒plRES-CEA、plRES-IL-2和plRES-CEA-IL-2．将实验小鼠分成6组，每隔5天进行一次肌肉注射，共3次．最后一次注射完成7天后，检测小鼠体内CEA含量、NK细胞活性等指标，结果如下表．
              第1组第2组第3组第4组第5组第6组
              注射物plRES-CEA-IL-2plRES-CEAplRES-IL-2plRES-IL-2与plRES-CEA混合空载体plRES空白
              CEA含量0.8890.6890.4550.8630.4130.088
              NK细
              胞活性              		0.3950.3890.3970.3970.387 0.091
              淋巴细
              脃数量              		3.041.771.152.181.070.97
              请回答问题：
              （1）构建重组质粒需要用到的工具酶有    ．要保证重组质粒能够在    中大量扩增，重组质粒必须具有    ．
              （2）注射plRES-CEA-IL-2后，小鼠体内产生的大量CEA是重组质粒中的目的基因经过    和
                  形成的．
              （3）NK细胞的活性不依赖于抗原刺激，能自发地溶解多种肿痛细胞和被病毒感染细胞，属于人体免疫的第    道防线．
              （4）从实验结果看，第    组具有最好的特异性免疫效果．对比第3组和第    组结果可以说明
              IL-2有促进    的作用．
              （5）第1，2，4组小鼠均可产生CEA抗体，各组之间无显著性差异，但与第3组、空载体及空白对照组相比有显著性差异，说明    ．
              难度：中等
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            • 5． 下列有关基因工程中限制酶的描述，错误的是（　　）
              A．一种限制酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列
              B．限制酶的活性受温度的影响
              C．限制酶能从任意点切割DNA
              D．限制酶具有专一性
              难度：中等
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            • 6． 多不饱和脂肪酸需要从膳食中摄取，而不能被人体直接合成．科学家通过转基因手段将ω-6脂肪酸脱氢酶基因（FAT1）整合到肉牛基因组．以期提高肉牛体内的多不饱和脂肪酸含量，促进人类健康．请回答下列问题．
              （1）将ω-6脂肪酸脱氢酶基因导入肉牛细胞中常用的方法是    ，在用PCR技术扩增目的基因时，需要的条件主要有扩增缓冲液、模板DNA、4种原料、特定引物和    ．
              （2）体外受精获得受精卵时，将优良公牛的精子收集后放在一定浓度的肝素溶液中进行培养，其目的是    ．
              （3）下列有关胚胎移植的叙述错误的是    
              A．应选择健康和具有正常繁殖能力的个体作为受体
              B．只有供、受体生现状态相同，移入受体的胚胎才能被接受
              C．胚胎收集中冲卵指的进从母体输卵管中冲取卵子
              D．受体牛对植入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应
              （4）胚胎移植前可选择发育良好、形态正常的    （填胚胎发育时期）进行    ，以实现同卵多胎．
              （5）该转基因牛还可以用核移植的方法繁殖，用核移植的方法得到的动物称为    ．
              用于核移植的供体细胞一般都选择10代以内的细胞，目的是保持细胞正常的    ．
              难度：中等
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            • 7． 凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶．研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中并使之表达．下图是基因工程中获得的基因和构建重组质粒过程，请回答有关问题：

              （1）分析上图可知，构建重组质粒（如图所示）最好选用    限制酶，理由是    ．
              （2）工业生产过程中，最初多采用重组大肠杆菌或芽孢杆菌生产凝乳酶，将目的基因导入大肠杆菌或芽孢杆菌前所做的处理方法是    ．现在生产凝乳酶多采用重组毛霉或重组酵母菌，毛霉或酵母菌作为受体细胞的优势是    ．
              （3）研究发现，如果将该凝乳酶20位和24位氨基酸改变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍．科学家可以生产上述高效凝乳酶的现代生物工程技术是    ，该生物工程技术的实质是    ．
              （4）转基因技术和细胞工程在动植物中都有广泛应用，但是胚胎工程只是指对动物的    所进行的多种亚显微操作和处理技术．
              难度：中等
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            • 8． 图为利用生物技术获得转基因猪和转基因烟草的过程（图中数字表示过程或技术，字母表示物质或结构），据图回答：

              （1）为分离提纯苏云金芽孢杆菌，先用    培养基进行扩大培养，再用    方法进行分离，获得一个个单独的    ．
              （2）在研究过程中，采用    技术对目的基因进行扩增，然后将目的基因与质粒等载体结合形成了重组质粒．在重组质粒的构建过程中需要的工具酶有    ．
              （3）图中②代表     技术．若培养C中的ES细胞，一般在培养皿底部制备一层 胚胎成纤维细胞，目的是    ．
              （4）若在0.5-0.6mol/L的    溶液环境下用特定的酶处理D，可获得原生质体．若将含有D的培养物放在摇床上，通过     培养可以分散成单细胞，这些单细胞具有     细胞的特征．
              （5）使用自然生长的烟草茎进行组织培养，需要依次在70%酒精和    溶液中浸泡消毒．各种器皿和培养基等通常用    法灭菌．
              （6）从经特定免疫处理的猪中提取B淋巴细胞，与     融合，形成杂交细胞，经筛选，克隆培养后，获得的单一细胞的特征是    ．
              难度：中等
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            • 9． 研究发现，人体内的N基因是正常基因，无N基因的人会患严重肾病而早年夭折，科学家为治愈此病进行了相关探索．下图是对标记基因（绿色荧光蛋白基因，用GFP表示）  和N基因的酶切过程．请据图分析回答下列问题：

              （1）切割基因时选用不同限制酶的目的是    ．切割完成后，需用DNA连接酶将两基因连接成GFP-N融合基因（以下称融合基因），该融合基因的上游基因为    ．
              （2）若用质粒做运载体，需用图中的    酶切割质粒．在构建的融合基因表达载体中，调控融合基因转录的结构为    ．
              （3）将融合基因表达载体包埋在由磷脂双分子层构成的脂质体内并转染ES细胞，融合基因表达载体进入ES细胞的方式为    ．用激光激发ES细胞并用荧光显微镜观察，可确定细胞内有    现象的ES细胞转染了融合基因．
              （4）ES细胞在功能上具有    ，当培养在    上时，细胞只分裂不分化．将整合了融合基因的ES细胞，在培养液中培养并加入相应的分化诱导因子后，ES细胞进行    ，最终形成正常的肾小球足突细胞，可用于该肾病的治疗．
              难度：中等
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            • 10． 灭活的肿瘤细胞可作为疫苗用以提高机体对该类型肿瘤的免疫力．研究者利用热休克蛋白（HSP70）基因转入白血病细胞株（HL-60）制备疫苗并研究该疫苗的作用，过程及结果如下．

              （1）构建HSP70基因表达载体时需使用的工具酶有    ．在目的基因前需添加信号肽所对应的编码序列，信号肽可引导刚翻译出的HSP70进入    （细胞器），并最终使HSP70定位于HL-60细胞的表面．用    检测后发现，只有③组的HL-60细胞表面具有HSP70．设置②组作为对照，目的是    ．
              （2）据A项检测结果可知，膜表面具有HSP70的HL-60细胞能    ．
              （3）乳酸脱氢酶存在于每个细胞中，正常情况下很难透过细胞膜．在B项检测中，48h后加入的HL-60细胞成为细胞裂解的对象，因而培养液中的乳酸脱氢酶含量可直接反映    的能力．
              （4）综上所述，HSP70能增强白血病肿瘤疫苗引起机体产生（特异性）免疫的能力，为白血病    的带来希望．
              难度：中等
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