屠呦呦因发现青蒿素治疗疟疾的新疗法而获得诺贝尔奖。寄生于人体细胞内的疟原虫是疟疾的病原体。科学家通过紫外线处理大量青蒿幼苗后，偶然发现一株高产高效植株，进行基因测序发现该植株控制青蒿素合成相关的一种关键酶的基因发生了突变。

（1）如果用高产青蒿关键酶基因的mRNA反转录产生的cDNA片段与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群叫做青蒿的________；获得的cDNA与青蒿细胞中该基因碱基序列________(填“相同”或“不同”）。在提取RNA时需要向提取液中添加RNA酶抑制剂，其目的是_________。

（2）将获得的突变基因导人普通青蒿之前，先构建基因表达载体，图1、2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答：

用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒时不能使用Sma Ⅰ切割，原因是_________。构建重组质粒时在其目的基因前需要添加特定的启动子，启动子的作用是_______________。

（3）基因表达载体导入组织细胞后，要通过植物组织培养技术培育出青蒿幼苗，该技术的关键步骤是____________。鉴定该基因工程是否成功还要进行___________实验，但是不能直接在培养基上培养疟原虫观察，其原因是_________。

为探究SHH基因与角化囊肿发生的相关性，科研人员利用SHH基因的非模板链转录合成的RNA作为探针，进行分子杂交实验，以检测SHH基因在角化囊肿中的表达情况。其基本流程如下图（Amp表示氨苄青霉素抗性基因；LacZ基因被SHH基因插入后不表达）。

请回答：

（1）获得大量目的基因常用________技术，其原理是_________。

（2）步骤②中，用Ca^2＋处理大肠杆菌，使之成为________细胞，然后导入重组载体。实验中，用添加氨苄青霉素的培养基培养大肠杆菌，未导入质粒的细菌将会死亡，原因是这些细菌不含有________基因。

（3）能表达LacZ基因的大肠杆菌在含有IPTG和X-gal的培养基上会形成蓝色菌落，易于识别。根据上述原理可以初步判断_______（填“蓝色”或“白色”）菌落中的大肠杆菌为重组菌。

（4）将制备的探针加入角化囊肿切片中，探针将与________形成杂交带，进而判断SHH基因的转录情况。

（5）除了基因工程外，细胞工程和胚胎工程也在人类生活中发挥了巨大作用。例如“试管婴儿”自诞生就引起了世界科学界的轰动，甚至被称为人类生殖技术的一大创举。也为治疗不孕不育症开辟了新途径。“试管婴儿”的诞生实际上结合了________、早期胚胎培养、胚胎移植等多种技术手段。再如，通过动物细胞杂交技术制备的单克隆抗体具有__________和灵敏度高等特性，因而广泛应用于疾病的检测、肿瘤的定位等方面。

(1) 图中三种质粒中不能作为目的基因载体的是_______,理由是____________、____________。 

(2) 在基因工程的操作过程中,需要检查目的基因是否重组到质粒中,应使用____酶切重组质粒,完全酶切后,进行电泳检测。若电泳图谱中出现长度为1.1 kb和5.6 kb,或者____kb和____kb的片段,则可判断该重组质粒已与目的基因重组成功。 

注:引物Ⅱ、Ⅲ上的x、y片段分别与N基因两端互补配对。

②将大量N基因片段与扩增得到的D₁片段、D₃片段置于PCR反应体系中进行扩增,得到的绝大多数扩增产物是____(选填“D₁—N”“D₁—D₃—N”“D₃—N”或“D₁—N—D₃”)。 

科学家从某细菌中提取抗盐基因，转入烟草并培育成转基因抗盐烟草。下图是转基因抗盐烟草的培育过程，含目的基因的DNA和质粒上的箭头表示相关的酶切位点。请分析回答下列问题：

（1）在该过程中，研究人员首先获取了抗盐基因（目的基因），并采用____________技术对目的基因进行扩增，在该反应体系中需加入________、模板序列、原料及两种________。然后构建基因表达载体，基因表达载体中除了具有目的基因、启动子和终止子之外，还需具有__________________。

（2）用图中的质粒和目的基因构建重组质粒，不能使用SmaⅠ酶切割，原因是____________。图中①②过程为防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，应选用________________酶对外源DNA、质粒进行切割。

（3）为确定转基因抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的__________________作探针进行分子杂交检测，又要在个体水平上鉴定，后者具体过程是____________________。

（1）在基因工程中，A→B为_____________技术，利用的原理是_______________。其中①为________过程，冷却至55℃将a________结合到互补链上，②过程由热稳定DNA聚合酶催化从a起始合成子链。

（2）⑤过程是基因表达载体的构建，一个基因表达载体的组成，除了目的基因外，还必须有____________________以及标记基因等。

（3）抗虫基因导入普通棉株细胞内并成功实现表达的过程，在基因工程中称______。目的基因导入植物细胞的方法除上图所示以外，还包括_________和_________。检测目的基因能否在棉株体内稳定存在方法是_________________。如要检查棉株是否最终获得抗虫性状，则需要在________水平上进行检测。

如图是科学工作者利用苏云金杆菌体内的抗虫基因培育转基因抗虫水稻的培育过程。请据图回答下列问题：

（1）实验中如果用EcoR Ⅰ切割多个外源DNA片段和质粒，则酶切产物用DNA连接酶进行连接后，两两连接所形成的产物有    种，实验中最好选择               切割外源DNA片段和质粒。

（2）图示中属于脱分化阶段的是            （填序号），该过程需要在培养基中添加营养物质和                等成分。

（3）转基因抗虫水稻的目的基因是否完成表达，从分子水平上的检测方法是          ，从个体水平上的检测方法是                             。      

（4）科学家发现该抗虫毒蛋白的杀虫效果不佳，然后通过            或基因合成，对现有抗虫毒蛋白进行改造，这项技术属于               工程。

[生物—选修3：现代生物科技专题]

   基因工程技术已成为生物科学的核心技术，限制酶被誉为基因工程中的“分子手术刀”。下图中的SmaⅠ、EcoRⅠ、BamHⅠ、HindⅢ都是限制酶，图中的箭头表示几种限制酶的酶切位点。回答下列问题：

（1）基因工程的核心是构建________。用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒时，不能使用SmaⅠ切割，原因是________。重组质粒中抗生素抗性基因可作为标记基因，原因是________。

（2）将目的基因导入植物细胞时，采用最多的方法是________。目的基因进入受体细胞后的表达过程中，启动子需与________识别和结合，从而驱动转录过程。最终目的基因是否成功翻译成蛋白质，常用________的方法进行检测，若出现杂交带，表明目的基因已形成蛋白质产品。

凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中并使之表达下图是基因工程中获得的基因和构建重组质粒过程，请回答有关问题：

(1)分析上图可知，构建重组质粒(如图所示)最好选用________限制酶，理由是________________________________________________。

(2)工业生产过程中，最初多采用重组大肠杆菌或芽孢杆菌生产凝乳酶，将目的基因导入大肠杆菌或芽孢杆菌前所做的具体处理方法是________________________。现在生产凝乳酶多采用酵母菌，酵母菌作为受体细胞的优势是______________________。

(3)研究发现，如果将该凝乳酶20位和24位氨基酸改变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍。科学家可以生产上述高效凝乳酶的现代生物工程技术是________________，该生物工程技术的原理是________________________，实质是________________。

（4）基因工程的最后一步中，目的基因能否在生物体内稳定遗传的关键是_______________________________________________，方法是          。检测目的基因是否转录出了mRNA 所用的探针是用什么制作的_____________________（A DNA    B RNA   C 蛋白质）

(1)“剪切”所使用的酶是______________，“剪切”结果使DNA分子片段产生了________。携带“β胡萝卜素合成基因”进行转化的载体具有一个至多个___________，以供外源基因插入。

(2)在“黄金水稻”的培育中，能确定“β胡萝卜素合成基因”已成功在水稻体内表达的简 便方法是____________。

I:回答与微生物有关的问题：

（1）泡菜在发酵过程中，起作用的微生物主要是_____和乳酸菌，其发酵产物中含有有机酸和_____等．

（2）腌制的食物中往往含有少量的亚硝酸盐，对亚硝酸盐的定量测定可以用_____法，因为亚硝酸盐与对氨基苯磺酸的反应产物能与_______偶联成_____色化合物．在实验过程中，测定的是_____值，以反映溶液中亚硝酸的含量．

（5）若存在杂菌污染，欲消除污染的杂菌，最简单的方法是________

（6）在培养大肠杆菌过程中，有关操作正确的是_____．

A．玻璃刮刀和接种环一样，只需灼烧灭菌

B．培养基分装到培养皿后进行灭菌

C．倒平板和取菌液都必须在酒精灯火焰旁进行

D．获得的菌种如果需要保存，可置于37℃恒温保存．

II：回答与基因工程有关的问题：如图表示运用基因工程技术生产胰岛素的三条途径．据图结合所学知识回答下列问题：

（1）①过程称为________，该过程中常用的酶有_________________，为了便于将含有目的基因的细胞筛选出来，所选择的质粒上应该具________．

（2）培育转基因羊的过程中，科研人员通过_______技术将重组质粒M转移到受体细胞A中，受体细胞A应该是_______（填“体细胞”“卵细胞”或“受精卵）．

（3）莴苣为双子叶植物，过程②常用的方法是___________，导人该细胞后，需对该细胞进行培养，经_________过程形成愈伤组织，再分化成幼苗长成转基因莴苣植株，此过程涉及的细胞工程技术是__________，该技术的原理是 ________________。

（4）过程⑥常用的方法是用________来处理大肠杆菌，使其易于吸纳重组质粒M．