（一）回答与果酒、果醋制作有关的问题。

（1）在酿酒过程中，酵母菌只有在无氧条件下才能进行__________。发酵开始时，发酵瓶内看不到气泡冒出的原因可能是酵母菌的________使发酵瓶内出现负压。

（2）下列各项中，与果酒中的酒精浓度有关的是 ____________________（多选）。

A.发酵时间                                     B.发酵温度

C.培养液中糖的含量                  D.酵母菌对酒精浓度的耐受程度

（3）不同地域所酿制的葡萄酒风味会有一定的差异，出现风味差异的原因除了与当地相应的土壤、气候等地理环境因素和葡萄品种有关外，还可能与不同地域酿酒时所用的_____________________等生物因素有关。

（4）在利用果酒制作果醋过程中，如果已获得醋化醋杆菌菌种，可先在液体培养基中进行·              培养，然后接种到发酵瓶中。发酵瓶下口直角玻璃管内塞有松紧合适的脱脂棉球，其作用是_______________。开始收集果醋前，应检测发酵瓶流出液的_____________________。

（二）毛角蛋白Ⅱ型中间丝（KIF-Ⅱ）基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转 KIF-Ⅱ 基因的高绒质绒山羊的简单流程如图：

（1）转基因过程用到的工具酶有___________和_______________________。

（2）在过程②中，用_________________处理将皮肤租住分散成单个成纤维细胞。由于人们对动 物细胞所需营养物质还没有完全搞清楚，因此在培养细胞时需在培养基中加入一定量的 __________________________ ，在培养过程中，应将培养瓶置于_____________________中培养。

（3）要获得多只相同的转基因山羊， 可对图中早期胚胎进行___________后进行胚胎移植。

（4）下列有关基因工程的叙述，正确的是______________________  。

A.切割目的基因和载体DNA 时为获得相同的粘性末端，必须用相同的核酸内切酶

B.基因工程的原理是基因重组，其核心是上图中的过程④

C.图示过程获得的转基因绒山羊并不是克隆动物

D.重组表达载体上含有 RNA 聚合酶的识别位点

“生物导弹”是免疫导向药物的形象称呼，由单克隆抗体与药物配合而成。单克隆抗体能自动导向，在生物体内与特定目标细胞或组织结合，并由其携带的药物产生治疗作用。单克隆抗体的制备过程如下图所示，分析回答下列问题：

(1)图中A过程是从小鼠的脾脏中取得____细胞，提取该细胞之前，给小鼠注射的特定物质相当于______；B过程得到的杂交瘤细胞的特点是__________________。

(2)体外培养杂交瘤细胞的培养基与用于植物组织培养的培养基在物理性质上的主要区别是前者要用____，从培养基的成分来看，前者培养基中除了添加必要的营养物质外还需要加入含天然成分的____________。

(3)特异性抗体也可以通过常规方法来制备：向动物反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物的血清中分离所需抗体。与这种常规方法相比，单克隆抗体具有____________________________等优点（答出三点即可）。制备单克隆抗体的过程中至少需要____次对细胞的筛选。

1997年英国学者韦尔穆特，用成年绵羊的乳腺细胞的细胞核移植到去核卵母细胞中，最终得到了克隆羊多利。请回答下列有关问题：

(1)动物细胞在体外培养时，需要给细胞提供必要的营养条件，由于人们对动物细胞所需营养物质还没有完全搞清楚，所以在使用合成培养基时要加入________等天然成分，出于动物细胞在体外培养时，具有________现象，为了让细胞继续增殖，一定时间后需用________酶处理，然后进行传代培养。

(2)目前人类还不能直接利用体细胞来培育出新的动物，所谓的克隆动物，实际是通过________来实现的，要使供体细胞核与卵母细胞融合要通过________，并利用电脉冲、乙醇和蛋白酶合成抑制剂等来________受体细胞，使其完成细胞分裂和发育进程。

(3)在体外培育的胚胎细胞要移植到受体母羊子宫内，外来胚胎能在受体内存活的生理基础是受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生________反应，并且外来胚胎与受体子宫可建立正常的________联系，在孕育过程中其遗传特性不受任何影响。

请回答下列有关现代生物科技专题的问题

(1) 动物细胞培养时，需要利用____________________酶处理组织块，使其分散成单个细胞；培养过程中细胞表现出_______________和_________________等特点；通常还要在细胞培养液中添加一定量的__________________，以防培养过程中的污染，另外通常需加入__________________等一些天然成分。

(2) 杂交瘤细胞的特点是_________________________，单克隆抗体与普通血清抗体相比较，具有_________________________________________________并可能大量制备的特点。

(3) 植物体细胞杂交之前，需要用________________________去除细胞壁，获得具有活力的__________________，一般用__________________作为诱导剂来诱导其融合。

(4) 试管牛的生产过程中，在试管中完成的步骤为______________________和____________________，将胚胎培养发育至_________________阶段再移植到代孕母体体内。

(5) 对污染的矿山进行生态修复，一般选用耐重金属污染的本地植物进行种植，体现了生态工程的_________________________________原理。

I.[生物一选修1:生物技术实践]

酵母菌是生物科学研穷中一种重要的生物材料，请回答：

（1）酵母菌的新陈代谢类型是__________，其细胞内将葡萄糖分解为酒精的酶存在于__________。

（2）某同学尝试用新鲜葡萄制作葡萄酒、为验证发酵液中含有酒精，取2mL发酵液加入试管中，滴加O.5mL浓硫酸酸化的重铬酸钾溶液并轻轻震荡，观察到溶液变__________色，则证明发酵液中含酒精。

（3）研究者利用基因工程技术改造酵母菌，得到如下四种变异菌株：①菌株Ⅰ——不能合成纤维素酶，菌株Ⅱ——合成的纤维素酶不能分泌到细胞外，菌株Ⅲ——合成的纤维素酶能分泌到细胞外，菌株Ⅳ——合成的纤维素酶分泌并固定于细胞壁。

在以纤维素为唯一碳源的培莽基上能生长繁殖形成菌落的是菌株_______，若在培养基中加入_______，则菌落周围会出现透明圈。在利用纤维素生产酒精时，与菌株Ⅲ相比，菌株Ⅳ的纤维素酶的利用率高，因为______________________________________________________________。

（4）为研究发酵罐中酿酒酵母菌的生长情况，常要取样统计分析，并测定pH值。若某研究人员将样品的次序搞乱了，那么判断取样顺序的主要依据基__________（填“酵母菌的数量”或“发酵液的pH”）。

II.[生物一选修3:现代生物科技专题]

内皮抑素是一种效果良好的新型抗癌药物，由胶原XⅤⅢ（广泛存在于肝脏等组织中）降解产生。我国科学家研制成含转入内皮抑素基因双歧杆菌的口服液，口服后，双歧杆菌在肠道定植、繁殖，双歧杆菌死亡裂解后，其产生的内皮抑素活性片段被吞噬、转运到肿瘤组织发挥作用。回答下列问题：

（1）要利用逆转录的方法合成人内皮抑素基因，应从__________组织细胞中提取mRNA，与细胞中内皮抑素基因相比，这种方法合成的cDNA没有__________、启动子、终止子等。

（2）根据内皮抑素基因的脱氧核苷酸序列设计并合成引物，利用__________技术得到大量内皮抑素基因。

（3）临床上也有通过静脉注射内皮抑素基因重组腺病毒，使肿瘤生长受到抑制。在进入临床使用前需要进行目的基因的检测与鉴定：用胰蛋白酶将血管内皮组织___________，制成细胞悬液→转入

含_____________________等天然成分的培养液中培养得到大量血管内皮细胞→用重组腺病毒感染血管内皮细胞，若抗原—抗体杂交检测呈阳性并观察到细胞凋亡，则说明_________________。

（4）口服含转入内皮抑素基因双歧杆菌口服液、静脉注射内皮抑素基因重组腺病毒，两种方法都能使肿瘤生长受到抑制，其中属于体内基因治疗的是__________（填“第一种”或“第二种”）。

我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪在东北农业大学的种猪场自然分娩产出，这标志着我国在转基因克隆猪技术领域已达到世界领先水平。下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答：

（1）过程①必需用到的酶是                                       

（2）重组质粒除了带有绿色荧光蛋白基因以外，还必须含有启动子、终止子和______________       才能构成一个完整的基因表达载体

（3）为了获得更多的猪卵母细胞，可通过对母猪注射促性腺激素的方法，做_________处理，并将所采集到的卵母细胞在体外培养到                        期即可通过显微操作将其细胞核去除。

（4）我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程运用了哪些现代生物技术_        _________________________________________________________

（1）制备单克隆抗体的步骤：             

①将抗原注入小鼠体内，从小鼠脾脏中获得淋巴细胞，其中至少1个淋巴细胞带有抗该抗原的抗体。

②由图中可看出，单克隆抗体制备过程运用了           和          的动物细胞工程技术手段，前者常用的诱导剂与植物原生质体融合不同的是                。

③将诱导后产生的多种细胞，放在含________培养基的多孔培养板上培养，筛选。

④这样获得的杂交瘤细胞既具有B淋巴细胞                                  的能力，又具有______________________________的本领。

⑤检测和分离带有抗X抗体的阳性细胞，培养板中每孔放一个细胞进行培养。

⑥将阳性细胞进行增殖，从而制备出大量抗该抗原的单克隆抗体。

（2）单克隆抗体是由同样的抗体分子组成，与一般的血清抗体相比，单克隆抗体的优点是 _______________________________________。

（3）用本法制备出的单克隆抗体仍具有局限性，因为它是用小鼠的_____________细胞制备的，其化学本质是___________，对人类有异物性和免疫原性。

（4）动物细胞培养液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等，与植物细胞培养基有所不同的是，还含有                            。

（5）图中有两次筛选过程，其中步骤④的目的是筛选出                                     ，步骤⑤的目的是筛选出                                                     。

下图为细胞融合的简略过程示意图，请据图完成问题：

（1）若A、B是植物细胞，在细胞融合之前已用酶处理去掉了细胞壁，所用的酶可能是_________，由此生成的Ａ和Ｂ称为_________；A、B到细胞C的过程中，常用的物理方法有离心、振动、电激。融合完成的标志是________。

（２）若A、B是动物细胞，一般取自幼龄动物的器官、组织，然后用________使其分散开来；A、B到C的过程中，常用的不用于植物细胞工程的方法是用______________诱导细胞融合。对融合得到的D进行大规模培养时需要提供的气体环境为______________，其中CO2的作用是                                                            _。此外，培养液还应进行无菌处理，通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防​                           。

（３）若Ａ为骨髓瘤细胞，Ｂ为经免疫的Ｂ淋巴细胞，那么Ｄ称为_________，这种细胞既能大量繁殖，又能产生_________。

（４）从A、B到细胞C的过程中，可形成__________种类型的细胞（仅考虑两个细胞间的融合）。若该过程用于单克隆抗体的制备，应筛选出符合要求的Ｄ，方法是用特定的__________培养基培养，为了大规模的生产单克隆抗体，还需对D进行第二次筛选，第二次筛选的目的是____________________。

科学家通过转基因技术获得了含有人生长激素基因的奶牛，如果要加速转基因奶牛的繁育，可以对此转基因奶牛进行克隆(如下图所示)。请结合图示回答下列问题：

(1)在进行细胞培养时，要对取自转基因奶牛的组织细胞进行分离，形成单个细胞，这个过程中需要利用________酶处理。

(2)形成重组细胞时应选用________期的卵母细胞，并去掉其细胞核的原因是__________________________________________________________________。

(3)如果重组细胞为贴附性细胞，则在进行原代培养时，还会表现出________等特点。

(4)图中犊牛并非是对体细胞核供体母牛100%的复制，其原因主要有______________、_____________________。

(5)上图中所示的生物技术整体被称为________，其包括的具体生物技术有________、________等。转基因奶牛的克隆成功，说明了动物____________________具有全能性。

图甲是抗寨卡病毒（一种RNA病毒）单克隆抗体制备的过程图，图乙是克隆羊培育过程示意图，请据图回答下列问题：

（1）图甲和图乙所示的过程中，应该都会用到的动物细胞工程技术是____________。

（2）图甲中②过程常需要借助动物细胞融合技术，其过程中动物细胞融合所特有的方法是使用____________诱导细胞融合。

（3）利用基因工程生产寨卡病毒的疫苗时，需要将重组DNA导入细菌细胞中，这一步骤常用的方法是____________。

（4）核移植时受体应选用_____________期的卵母细胞。

（5）在制备单克隆抗体的过程中，进行了两次筛选，第一次筛选是利用HAT______（填“选择”或“鉴别”）培养基，由于骨髓瘤细胞无法在HAT培养基上生存，故只有____________细胞能长期存活；第二次筛选获得____________。

（6）通过上述方法得到的抗体与常规的血清抗体相比最大的优点是______________。