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            • 1． 微载体是由天然葡聚糖或者各种合成的聚合物组成的颗粒，其直径很小，将对细胞无害的微载体加入到培养容器的培养液中，作为载体，可使细胞在微载体表面附着生 长．微载体大规模细胞培养技术已广泛应用于科研生产，其流程图如图．请回答：

              （1）图中过程a是利用 ______ 处理动物组织，分散细胞．微载体加入培养罐中后，通过搅动使其保持悬浮状态，便于细胞的 ______ ，所以选用的微载体颗粒直径应尽可能小．
              （2）图中利用培养罐进行动物细胞的体外培养所需的条件是 ______ 的环境、营养、温度和pH、 ______ ．
              （3）图中制备单克隆抗体的过程中，应先用 ______ 进行筛选出 ______ 特点）的杂交瘤细胞，然后培养．
              （4）利用基因工程可以产生干扰素，可以通过 ______ 技术，将重组DNA分子导入哺乳动物的 ______ 中，并送入母体，使其发育成转基因动物．
              难度：较易
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            • 2． 生物工程在医疗卫生方面得到了广泛应用，请回答下列问题．
              （1）利用 ______ 技术制备的杂交瘤细胞，可用于制备单克隆抗体．与体内抗体相比，单克隆抗体具有理化性质单一、 ______ 、可大量制备等优点．
              （2）干扰素、胰岛素等物质可以通过工程菌来大量生产．该技术中目的基因和运载体要用同种 ______ 切割，以产生相同的 ______ ．
              （3）在完成体外受精的过程中，对已取得的精子要进行 ______ 处理，为了获取更多的卵细胞，一般要对雌性个体注射 ______ ，使其超数排卵．
              （4）利用细胞培养技术可以获取自身健康的皮肤，用于皮肤移植．在此过程中通入CO2的目的是 ______ ，在培养液中加入 ______ 酶，可防止细胞出现接触抑制现象．
              难度：中等
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            • 3． 科学家通过转人四种基因，可使体细胞形成诱导性多能干细胞（iPS细胞），iPS细胞具有胚胎干细胞的类似功能，但并不能发育成胚胎．我国科学家利用iPS细胞在世界上第一次获得完全由iPS细胞制备的活体小鼠--“小小”（流程见图）．

              （1）过程①从亲代鼠体内获得皮肤细胞后，对其进行的初次培养称为 ______ ，科学家向经培养的细胞导入四种基因（过程②），使其形成诱导性多能干细胞（iPS细胞）．但基因导人受体细胞没有采用显微注射的方法，你认为最可能采用的方法是用 ______ 引入．
              （2）iPS细胞在体外已成功地被分化为神经元细胞、神经胶质细胞、心血管细胞和原始生殖细胞等，这说明iPS细胞在功能上具有 ______ ．科学家设想在不久的将来人们可通过向人体移植iPS细胞使功能出现异常、损伤或退化的器官得以修复，它的优点是可避免器官移植后的 ______ 问题．
              （3）我国科学家通过将iPS细胞注人四倍体囊胚再经④过程 ______ 技术移入代孕母鼠的子宫内继续发育，最终获得克隆鼠及其后代．诱导二倍体细胞融合形成四倍体细胞的方法有 ______ 等．移入的胚胎能够在受体子宫内存活发育是因为供体胚胎可与受体子宫建立 ______ 联系．
              难度：较易
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            • 4． 基因工程靶向细胞疗法是细胞治疗和基因工程相结合的前沿生物疗法．治疗过程中先提取患者的免疫细胞，将特定靶向基因导入后，再对其进行扩增并诱导成效应细胞，最后回输至患者体内，以实现对被病毒感染细胞的特异性和主动性杀灭．回答下列问题：
              （1）靶向基因需利用质粒、噬菌体衍生物或 ______ 作为载体才能导入免疫细胞，迄今为止，最为有效的导入方法是 ______ ．
              （2）成功导入靶向基因后可利用 ______ 技术对免疫细胞进行扩增，该过程中首先要对培养液和用具进行
              ______ 处理．扩增细胞通常应在10代以内，以保持细胞正常的 ______ ．
              （3）用该方法治疗病毒引起的疾病时，靶向基因表达产物的作用是 ______ ．
              （4）回输的免疫细胞通过 ______ （填“体液免疫”或“细胞免疫”）清除感染的细胞．因回输的免疫细胞来自患者自身，可避免发生 ______ ．
              难度：较易
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            • 5． 克隆羊的成功轰动世界，它不仅奠定了克隆性治疗疾病的基础，而且解决了器官移植中供体不足的问题，但同时也给人类带来了一些过去尚未遇到的问题．如图为人类对克隆羊技术的拓展和应用，请据图回答问题．

              （1）图中所涉及的现代生物技术有 ______ 和 ______ 等．
              （2）下列有关胚胎移植的叙述正确的有 ______ ．
              A．冲卵指的是从子宫中冲出胚胎，而非冲出成熟卵细胞
              B．只有供、受体的生理环境高度一致，移入受体的胚胎才能被接受
              C．供体和受体要进行免疫检查，防止发生免疫排斥反应
              D．不同动物胚胎移植的时间不同，人的胚胎移植最好在原肠胚时期进行
              （3）图中两个克隆动物长大后，各方面特征与原型动物相似，这说明 ______ 具有全能性，早期胚胎发育在 ______ 阶段以前的细胞是全能细胞．
              （4）使用培养基进行胚胎干细胞培养时，通常要加入 ______ 等天然成分，除了保证被培养细胞处于无菌、无毒及氧气充足的环境中，还需要保证细胞生活所需的 ______ ．
              （5）图中从“内细胞团到胚胎干细胞”的培养过程中，一般用 ______ 处理内细胞团，使之分散成单个细胞．
              难度：较易
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            • 6． 近年来，我国死于狂犬病的人数有上升趋势．狂犬病病毒的核酸是RNA，机体感染病毒后产生的特异性IgG抗体，能消灭狂犬病病毒，这是接触狂犬病病毒后及时注射疫苗和特异抗体的重要依据．我国利用地鼠的肾细胞培养狂犬病疫苗，已取得良好效果．
              请根据上述材料，回答下列问题：
              （1）巴斯德利用固定毒株制成减毒活疫苗，预防狂犬病，制成减毒活疫苗需要用 ______ 培养．
              （2）特异性抗体获取可用单克隆抗体制备．在制备单克隆抗体的过程中，应用的动物细胞工程技术是 ______ ．
              （3）如图所示是单克隆抗体制备过程示意图，请据图回答：

              ①图中A过程从小鼠的脾脏中取得的“小鼠细胞”是 ______ 细胞，该细胞能够产生 ______ ．从小鼠体内提取分离该细胞之前，给小鼠注射的特定的物质是 ______ ．
              ②图中B过程是细胞融合，该过程需要用灭活的 ______ 、聚乙二醇或电激等诱导．
              （4）动物细胞体外培养需要满足的环境条件有 ______ ．
              难度：较易
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            • 7． 如图所示为动物细胞培养过程中，动物细胞增殖情况的变化曲线（图中B、D两点表示经筛选后继续培养），请据图回答下面的问题：
              （1）OA段的培养称为 ______ 培养，AB段可能发生了 ______ 现象，需要用 ______ 酶处理，以使组织细胞分散开来．
              （2）动物细胞培养过程中，为维持培养液的pH，通常在培养液中通入一定浓度的 ______ ．
              （3）培育克隆羊时用到的卵母细胞可以从屠宰场收集，并在体外培养到 ______ 期．
              （4）目前使用的或冷冻保存的细胞通常为 ______ 代以内，以保持细胞正常的二倍体核型．
              难度：较易
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            • 8． 人们日益关注食品安全．一种保鲜剂--青鲜素．能抑制植物细胞生长与分裂，从而抑制发芽，被用于蔬菜和水果的保鲜，但其残留物会损害人体健康．据材料回答问题：
              （1）青鲜素的作用与 ______ （一种植物激素）的作用最为相似．
              （2）青鲜素残留物可能会使人体细胞中的 ______ 发主突变，导致正常细胞生长和分裂失控而变成癌细胞．
              （3）科研人员以小鼠为实验材料，用“动物细胞培养技术”对青鲜素毒性进行了检测．
              ①请完善检测青鲜素毒性的实验：主要实验步骤：
              第一步：取大小相同的六只培养瓶编号为l～6，分别加入等量的相同培养液和小鼠细胞．
              第二步：向1号培养瓶中加入适量的生理盐水，向2～6号培养瓶中分别加入 ______ ．
              第三步：培养一段时间后，取样制成临时装片，用显微镜观察、计数，计算出 ______ ，记录结果如表：
              培养瓶编号 1 2 3 4 5 6
              青鲜素浓度（mg/L） 0 10 30 90 270 810
              变异细胞比例 0 0
              实验结论： ______ ．
              ②培养前，所取小鼠组织需用 ______ 处理，制成细胞悬液；培养时，需向培养液中通
              入5%的C02，其目的是 ______ ；为提供全面的营养，培养液中常常还需要加入 ______ ．
              难度：较易
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            • 9． 目前临床上癌症治疗的方法，一般是手术切除肿瘤，为防止体内残留癌细胞，在手术后进行化疗．某生物兴趣小组的同学从资料上获知：二氯二乙胺能够阻止参与DNA复制的酶与DNA相互作用．他们推测：二氯二乙胺能抑制癌细胞的增殖，能作为一种癌症的化疗药物，并就此问题设计实验进行了探究．
              实验材料：肝部长有肿瘤的小鼠，二氯二乙胺溶液，蒸馏水，生理盐水，含有全部营养物质的细胞培养液，显微镜，血球计数板，试管，吸管，培养皿等．
              （1）其中某位同学实验操作如下：（请将实验内容补充完整）
              a．取洁净的培养皿一个，加入适量的培养液，从小鼠肝部切取肿瘤组织，剪碎，并用 ______ 处理，使其分散开来，配制成细胞悬液，将其均匀分成5份，置于5个培养皿中培养，分别编号．
              b．取洁净的试管5支，加入等量的培养液，编号1、2、3、4、5，并在1-4号试管中加入等量的不同浓度的二氯二乙胺溶液，5号试管中加入 ______ ，作为 ______ 组．
              c．将步骤b中的配制的溶液分别置于5个培养皿中，摇匀后，在冰箱中培养一段时间．
              d．在5个培养皿加入适量的胰蛋白酶处理，配制相应的细胞悬液，振荡摇匀，分别吸取适量的悬液置于 ______ 内，在显微镜下计数，记录数据．
              （2）请你纠正上面这位同学操作上的错误 ______ ．
              （3）另一位同学按照正确的方法进行实验，得到的结果如表：
              实验组别 1 2 3 4 5
              二氯二乙胺浓度（mg/ml） 0.1 0.2 0.3 0.4 0
              细胞数目（个/mL） 320 275 186 96 560
              a．在该实验中，自变量是 ______ ．
              b．根据实验结果，你能得出的结论是 ______ ．
              （4）在体外培养肿瘤细胞时，除了给予一定量的O2以维持细胞呼吸外，需要提供 ______ 气体以维持PH值，还需要提供 ______ 环境，合成培养基需特别添加 ______ ．
              （5）若开始培养时取一滴培养液观察有100个肿瘤细胞，经24h培养后，取一滴稀释100倍后再取一滴（设三次的“一滴”等量）观察，发现有64个肿瘤细胞，此肿瘤的细胞周期约为 ______ h．
              难度：中等
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            • 10． 科学家通过诱导黑鼠体细胞去分化获得诱导性多能干细胞（iPS），继而利用iPS细胞培育出与黑鼠遗传特性相同的克隆鼠，流程如下：

              （1）从黑鼠体内获得体细胞后，对其进行的初次培养称为 ______ ，培养的细胞在贴壁成长至铺满培养皿底时停止分裂，这种现象称为 ______
              （2）图中2-细胞胚胎可用 ______ 方法从灰鼠输卵管内获得，也可从灰鼠体内取出卵子，通过 ______ 后进行早期胚胎培养获得．
              （3）图中重组囊胚通过 ______ 技术移入白鼠子宫内继续发育，暂不移入的胚胎可使用 ______ 方法保存．
              （4）小鼠胚胎干细胞（ES）可由囊胚的 ______ 分离培养获得，iPS与ES细胞同样具有 ______ 特性，有望在对人类iPS细胞进行定向诱导分化后用于疾病的细胞治疗．
              难度：较易
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