已有研究证实,在体外培养条件下耐药基因能够在不同种属的乳酸菌菌株中发生转移。鉴于此,科研小组对市售酸奶中的乳酸菌进行分离和鉴定,通过药物敏感性实验确定菌株的耐药谱,同时调查环丙沙星、庆大霉素、四环素等耐药基因在这些菌株中的分布情况,为乳酸菌的安全评价提供参考依据。请分析回答下列有关乳酸菌培养过程中的相关问题:

(1) 本研究使用的细菌培养基中特别加入了一定量的碳酸钙,乳酸菌产生的乳酸能与不溶性的碳酸钙生成可溶性的乳酸钙,从而在菌落周围形成溶钙圈。从功能角度分析,本研究使用的培养基属于______。 

(2) 在利用高压蒸汽灭菌锅对培养基灭菌时,锅内水加热煮沸后,必须____,以保证锅内气压上升、温度升至121 ℃,灭菌后的培养基应适当冷却后,在____附近倒平板。 

(3) 在酸奶制作过程中要严格控制发酵条件是保证发酵正常进行的关键,通常所指的发酵条件包括_____________(至少写出两项)。一般情况下含抗生素牛奶不宜制作酸奶,原因是_______________。 

(4) “检测乳酸菌对环丙沙星、庆大霉素、四环素耐药性”实验中,____(选填“需要”或“不需要”)设置对照实验,培养基配制好后再分别接种____。 

(5) 在统计菌落时,发现0.1 mL稀释倍数为10⁵的稀释液在平板上的平均菌落数为40个,则每毫升样液中的乳酸菌数大约为____个。用此法测定的乳酸菌数量比实际活菌数量____,原因是______________。 

为解决塑料袋(化学成分为聚乙烯)造成的“白色污染”这一问题，某同学试图从土壤中寻找一种能加速塑料袋自然降解过程的目的菌，以下是该同学从土壤中寻找并筛选目的菌的流程，请回答下列问题：

(1)对培养基灭菌常用的方法是____________________。在接种前需要检测使用的培养基是否被污染，方法是______________________________________________________________。

(2)Ⅰ号培养基属于________________(按功能分)培养基，其作用是使目的菌能“脱颖而出”。如图采用的接种方法为________________。Ⅱ号培养基从物理性质来看，________(填“能”或“不能”)添加琼脂。

(3)该同学在稀释倍数为10⁴的培养基中测得平板上菌落数的平均值为20.4，则每毫升样品中的菌落数是________个。(涂布平板时所用稀释液的体积为0.2 mL)

(4)假设该同学发现培养基上细菌数目过多而连成一片，说出一种可能的原因并提出合理的处理措施。原因：__________________；措施：_______________________________。

A．大肠杆菌    B．产甲烷细菌    C．金黄色葡萄球菌      D．极端嗜盐菌

A．缺乏25万单位抗生素X的实验数据     

B．避免抗生素滥用

C．10万单位抗生素X对B.subtilis亦有作用 

D．25万单位抗生素X会对人体细胞造成损害

（1）如用大肠杆菌作为受体细胞，则该大肠杆菌中不应含有青霉素抗性基因，请阐述其原因？                                   。

（2）培养导入了重组质粒的大肠杆菌时，需配制培养基。该培养基除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入的物质有（    ）（多选）

A．细胞分裂素 B．琼脂 C．噬菌体 D．青霉素 

（3）培养基配制和灭菌时，灭菌与调节pH的先后顺序是         ；一般对配制的培养液采用

         法灭菌。

（4）微生物接种培养时，可采用两种方法。下图为接种后微生物培养的效果图，那么，获得图A效果的接种方法是______________，获得图B效果的接种方法是_____________。

（5）与大肠杆菌相比，嗜热菌具有的特点是         。（多选）

临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本（如痰液、粪便等），然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：

⑴为了从样本中分离并获取某种致病菌单菌落，可用             法或             法将人体样本接种于固体培养基表面，再经过选择培养、鉴别等步骤实现。

⑵为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，取该单菌落适当稀释，接种于固体培养基表面，在37℃培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板。将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板的不同位置，培养一段时间后，在四个滤纸片周围出现透明圈由大到小依次是A＞C＞D＞B。由此推断，该病人目前适合使用的是抗生素        。含D的滤纸片周围的透明圈比含A、C的小，但透明圈中出现了一个菌落，这种菌落的出现可能是由于杂菌污染导致的，也可能是由于该致病菌发生了突变；若发生了基因突变，这种突变一般是否由抗生素诱发的？         ，若要证明这种致病菌发生了基因突变，可检测和比较这类细菌细胞中        （“DNA 的碱基组成”“mRNA 的含量”“ DNA 的碱基序列”）。

⑶为防止杂菌污染，培养基的灭菌方法是         灭菌，接种环的灭菌方法是         灭菌，接种过程应该在               旁进行。

将没有吃完的西瓜，盖上保鲜膜后放入冰箱，是很多人日常储藏西瓜的办法。但事实上，有时候盖上保鲜膜储藏的西瓜中的细菌种类和数目反而比没用保鲜膜的多。某生物研究小组用保鲜膜保存三天的西瓜表面的瓜瓤制备浸出液，研究细菌的种类和数量。

(1)该研究小组需配制用于培养微生物的培养基，配制的培养基一般都含有水、碳源、          和         。一般采用            法对培养基进行灭菌。

(2)为了避免培养基污染，在培养过程中，需将平板           (填“正置”或“倒置”)。为了观察浸出液中微生物的种类和数量，采用          法接种。接种时，为了避免环境中微生物的污染，实验操作应在         附近进行。

(3)在培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，说明西瓜的浸出液中有                    （填“一种”或“多种”）细菌。细菌总数越多，说明西瓜被细菌污染的程度越         （填“高”或“低”）。