(2)为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以________为碳源的固体培养基进行培养。

(3)若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用____________直接计数；若要测定其活菌数量，可选用________法进行计数。

(4)为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35 ℃、40 ℃、45 ℃温度下降解10 g油脂所需酶量依次为4 mg、1 mg、6 mg，则上述三个温度中，________℃条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕________℃设计后续实验。

下图表示细胞融合技术的一些过程。阅读下列材料，并简要回答下列问题。

(注“十”代表有抗性，“-”代表无抗性）

材料一:近年来，细胞工程已进人高速发展阶段，已经成为生物学领域中一颗耀眼的明星。该工程可在细胞水平或细胞器水平上，按照人们的意愿获得新型生物或特种细胞产品。

材料二：微生物采油的关键技术是获得性能优异的菌种，应用原生质体融合技术将两种微生物进行融合，构建耐中高温采油微生物引起了科学家的广泛关注。宋绍富等人选用细菌I和细菌JD先后进行了各自抗生素抗性以及融合实验的相关研究。研究发现，I菌与JD菌对不同抗生素的抗性是不同的，测量结果见上表。

（1）上图中，若A细胞和B细胞均为植物细胞，细胞融合完成的标志是____________ ；形成的D细胞还要应用植物组织培养技术将其培养成植株。

（2）上图中，若A细胞和B细胞均为动物细胞，与植物细胞融合相比，从A细胞和B细胞到C细胞的过程中，______________是诱导动物细胞融合特有的诱导因素，该过程说明了细胞膜具有_______________。

（3）利用I菌和JD菌进行细胞融合时，首先应使用 _______________法去除菌体的细胞壁，将获取的______________保存在等渗溶液中待用。

（4）在对I菌和JD菌融合后的融合子进行筛选时，比较理想的是在培养基中添加3μg/ml红霉素（或3μg/ml利福平）与_______________两种抗生素,此种培养基称为_____________。             

(1)目的菌生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的____________。实验需要振荡培养，振荡培养的作用是__________________________________，由此推测目的菌的代谢类型是____________。

(2)培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量________的培养液，接入新的培养液中连续培养，使目的菌的数量增多。

(3)转为固体培养基时，常采用平板划线法或_____________ 进行接种。平板划线法所使用的工具称_______，这种工具操作时应采用的灭菌方法是_________。接种时，在第二次及其后的划线操作时，总是从__________________开始划线。

(4)某同学将污水样液制成了10¹〜10⁴的四个稀释样液，分别取0.1mL接种到4组(每组4个)固体选择培养基上，若在10³组的4个平板上，获得的菌落数是357、39、38和37，则每升污水样液中的活菌数约为____________个。

(5)在上述实验操作过程中，获得纯净目的菌的关键是_________________。

回答下题：

（一）酵母膏胨葡萄糖（YPD）培养基是一种常用的酵母菌培养基，其基本配方是：1%酵母膏，2%蛋白胨，2%葡萄糖。某兴趣小组欲用超市购买的干酵母进行系列生物技术实践尝试，请回答下列问题：

（1）干酵母处于休眠状态，为迅速活化酵母菌，应将干酵母放在小烧杯中，加入少量温水和极少量  ______  ，混匀。

（2）为防止YPD培养基中的葡萄糖分解碳化，要选用以下选项中的 ______ 灭菌条件。

A．121℃、lkg/cm²压力、15min         B．121℃、500g/cm²压力、15min

C．90℃、500g/cm²压力、30min         D．90℃、500g/cm²压力、15min

有些培养基成分中含不能加热灭菌的化合物，如尿素等，应该用  ______  除菌。

（3）若要对酵母菌进行划线分离培养，则应在培养基中添加  ______  ，并用  ______  蘸取菌液，进行划线。

（二）下图为转基因奶牛的克隆过程，据图回答问题。

（4）动物细胞培养基的营养成分中，应该添加  ______ 等一些天然成分。不管是原代培养还是传代培养过程中一般都需要用  ______酶处理使细胞分散。

（5）③操作过程称为  ______  技术，图中早期胚胎的外表一层扁平细胞B称为  ______  。

（6）在④操作前应对受体母牛进行 _______  处理。

人类利用微生物发酵制作果酒、果醋的历史，源远流长。如图为酵母菌、醋酸菌的实验室培养和纯化的部分操作步骤。请回答下列问题：

（1）利用酵母菌制作果酒的原理是_____________________。

（2）①是制备培养基时__________中的主要操作，该操作中需要将培养基冷却到________℃左右时进行。②是冷却接种环，此步骤应在__________进行。

（3）步骤④使用的接种方法是___________。纯化的醋酸菌菌种将频繁用于果醋生产，则可以采用________的方法保存菌种，这种方法保存的时间不长，原因是_______________。

（4）利用步骤④纯化细菌时，接种环最少灼烧________次，最后一区域的菌种来源是_________________。

(1)培养基中加入化合物A的目的是筛选________，这种培养基属于________培养基。

(2)“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的________。实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是________。

(3)培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量的培养基，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌”的数量________。

(4)转为固体培养时，常采用________的方法接种，获得单菌落后继续筛选。

(5)若研究“目的菌”的生长规律，将单个菌落进行液体培养，可采用________法进行计数。实验结束时，使用过的培养基应该进行__________处理后，才能倒掉。

31.高温淀粉酶在大规模工业生产中有很大的实用性。研究者从热泉中筛选了高效产生高温淀粉酶的嗜热菌，其筛选过程如下图所示。

（1）从用途上来说，Ⅰ号培养基属于________培养基，仅以淀粉作为________源；从物理状态上来说，Ⅱ号培养基属于固体培养基，配制时一般加入________作为凝固剂。

（2）进行①过程的目的是________；②过程所使用的接种方法是________法。

（3）Ⅰ、Ⅱ号培养基配制和灭菌时，灭菌与调节pH的先后顺序是________；一般对配制的培养基采用________法灭菌。

（4）部分嗜热菌在Ⅰ号培养基上生长时可释放________分解培养基中的淀粉，在菌落周围形成透明圈；应挑出透明圈________（大或小）的菌落，接种到Ⅱ号培养基。

（1）腐乳的制作过程中发挥作用的主要微生物合成脂肪酶的场所是         。各地腐乳风味迥异，在原料和菌种相同时，可通过                                           制作出不同风味的腐乳。

（2）制作泡菜过程中亚硝酸盐的含量变化趋势是                        。

（3）植物花药离体培养产生花药植株时，选材非常重要。对某些不易着色的花粉细胞核，采用的染色方法是                       。

（4）无菌技术中，获得纯净培养物的关键是                                     。

（5）能使纤维素分解成纤维二糖的酶是                             。

（1）分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将           分解成           。

（2）在含纤维素的培养基中加入               ，该染料可与纤维素形成红色复合物。用含有该染料的培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的                  。

（3）为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基（成分见下表)：

注：“+”表示有，“-”表示无。

据表判断，培养基甲         〔填“能”或“不能”〕用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是                                          ；培养基乙      〔填“能”或“不能”〕用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是                                                         。

（1） 与乳酸菌相比，酵母菌在结构上的主要区别是。培养酵母菌R时，培养基中的蔗糖和硝酸盐可分别为酵母菌R的生长提供。

（2）采用平板划线法接种酵母菌R时，需先灼烧接种环，其目的是。培养基通常采用的灭菌方法是。 

（3）为了验证萃取物是否是胡萝卜素，该同学将叶绿素b、叶绿素a、叶黄素、萃取物和色素混合液(含叶绿素b、叶绿素a、叶黄素和胡萝卜素)依次点样在滤纸的1、2、3、4、5位置（如图甲所示），并进行层析，滤纸条上各色素带的位置为（填字母）时，即可说明该萃取物最可能是胡萝卜素。

（4）酵母菌R能分泌A、B两种酶，下图是某课题组关于这两种酶的实验结果：

①图中结果显示，在40℃至60℃范围内，热稳定性较好的酶是。高温条件下酶容易失活，其原因是。

②由图可知，若要从酵母菌R种群中筛选出能产生热稳定性高的酶的菌株，应在的条件下培养。