（2）若想对初步筛选得到的目的菌进行纯化并计数，可采用的接种方法是 _________ ．对分离的细菌数目统计时，统计的菌落数目往往比活菌的实际数目偏少，原因是_________________________ 。

（3）在实验室应采用___________法对培养基进行灭菌处理，在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在_____________条件下进行．若发现在⑤中菌落过多，无法准确计数，可以将③中取出的菌液_____________________________ ．

Ｉ下图表示单克隆抗体制备过程示意图。据图回答：

（1）淋巴细胞是由动物体骨髓中的造血干细胞分化、发育而来得到，B淋巴细胞从小白鼠体内分离之前,应对小白鼠进行的处理是_________________ ,该处理的实质是在小白鼠体内发生_____________过程。骨髓瘤细胞与进行原代培养的细胞相比较,遗传物质发生的主要变化是___________,从而违背了“程序性细胞死亡”规则,打破了细胞产生与细胞死亡的动态平衡。

（2）____________________技术是单克隆抗体技术的基础，根据培养基的用途分类，图中HAT培养基属于__________培养基，试设想运用生物工程其它领域的技术制备单克隆抗体的另一条途径________________ 。

（3）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的_______________特点，又具备B淋巴胞的_______特点。单克隆抗体与常规的血清抗体相比 ，最大的优越性是_______________，_______________。                                            

II绿色荧光蛋白(GFP)能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，GFP基因可作为目的基因用于培育绿色荧光小鼠，下图表示培育绿色荧光小鼠的基本流程：

（1）①过程需要限制酶切断________________键，使DNA分子断裂，其结果形成_____________。图中过程②常用的方法是_____________ ；过程③利用的生物技术主要是___________________；在进行过程④前，利用______________技术可以获得数目更多且基因型相同的绿色荧光小鼠。

（2）GFP基因与目的基因一起构建到载体上不影响目的基因的表达，也不影响由目的基因控制合成的蛋白质的结构与功能,且对细胞无毒性作用，因此GFP基因可以作为基因表达载体上_____________。

（3）获取外源基因若需在短时间内获得大量的某种外源基因，通常采用 _________ 技术．在供体雌鼠发情周期的某一阶段，用______激素处理促使卵巢里大量卵泡成熟并排出，称为超数排卵．在让供体母鼠与健康公鼠交配的同时，让代孕母鼠与结扎公鼠进行交配，使代孕母鼠与供体母鼠的生理条件达到同步或者一致，称为 __________ 处理．将目的基因导入受体细胞后，还需对转基因生物进行_________________。

微生物与人类生产生活越来越密切，如酵母菌可以用于酿酒，醋酸菌可以用来制醋，毛霉可以制作腐乳。请回答下列相关问题。

（1）酵母菌与醋酸杆菌相比，在结构上的主要区别是        。

（2）若在果汁中含有醋酸菌，在果酒发酵旺盛时，醋酸菌能否将果汁中的糖发酵为醋酸？说明原因。                             。

（3）为了获得高纯度的果酒，需要对酵母菌进行分离和纯化，其过程为：第一步：配制培养基：该培养基必须含有微生物生长所需要的______________________等基本营养成分，原料称重溶解后需进行______________________，然后进行灭菌操作，常用的灭菌方法是____________。第二步：接种。微生物常用的接种方法有___________________。第三步：培养。温度控制在____________。 第四步：挑选符合要求的菌落。

(4)若要测定发酵罐中酵母菌的菌体数，可在显微镜下用___________________直接计数。

酵母菌是生物科学研究中一种重要的生物材料，如图示，请回答下列问题：

（1）在①中，酵母菌与醋酸菌结构上最主要的区别是：____________________________。

（2）在②③的实验中，如何测定酵母菌有氧呼吸无酒精产生，而进行无氧呼吸过程中有酒精产生，其反应式为：__________________________________________，若酒精的测定步骤如下，请补全．取3支干净的试管编上号A、B、C，在A、B两支试管中分别加入2mL有氧呼吸、无氧呼吸的发酵液，在C试管中加入____________做对照．在3支试管中分别滴加_______________________________并轻轻震荡，观察溶液是否变色。

（3）在④的实验中，如要连续7天测定恒定体积和浓度的培养液中酵母菌种群数量的变化，需要用7支试管来培养并持续分别测定的原因是_______________________________。

其中操作正确的有__________ （填下列操作的序号）。

A．将适量干酵母放入装有一定浓度葡萄糖溶液的试管中，在适宜条件下培养

B．静置一段时间后，用吸管从试管中吸取培养液

C．在血球计数板中央滴一滴培养液，盖上盖玻片

D．用滤纸吸除血球计数板边缘多余培养液

E．将计数板放在载物台中央，待酵母菌沉降到计数室底部，在显微镜下观察、计数

（4）在制作葡萄酒的过程中，假设某同学的某一步骤操作错误导致发酵瓶瓶塞被冲开，该错误操作是____________________________________。

回答下列（一）、（二）小题。

(一）某研究小组欲用苹果汁为原料，利用发酵瓶制作果酒和果醋，请分析回答：

(1)将苹果汁放入发酵瓶，要预留约的空间。若发酵瓶内持续无气泡产生，则需加入更多的，使发酵作用尽快发生。

(2)变酸的果酒表面有一层醋杆菌形成的菌膜，若要在该菌膜中筛选高表达量的醋杆菌菌株，可通过获得的方法来分离筛选。若要统计获得菌种的数目，则常采用法。

(3)下图是果酒和果醋的发酵装置，关于果醋发酵叙述错误的是（  ）

A.发酵前，瓶内酒—水混合物的pH需调至7.0 

B.B.发酵过程中，充气口要适时适量充气

C.发酵过程中，排气口排出醋酸发酵产生的CO₂

D.发酵完成后，出料口的pH值不再减少

(二）下图为平板划线法分离纯化细菌示意图。根据所学生物学知识，回答下列问题。

（1）选择培养和扩大培养所用培养基从物理性质上常用培养基，两者共同的目的是。

（2）抗生素可以抑制肽聚糖合成，从而可以抑制多数原核生物繁殖。实验室现有酵母菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌三种微生物混杂生长的固体培养基，已知大肠杆菌菌落遇伊红美蓝试剂变为紫色，并带有金属光泽；金黄色葡萄球菌耐高浓度食盐水，菌落为金黄色；酵母菌细胞壁成分主要为几丁质，营养条件好，氧气充足时，显微镜下可见典型的出芽生殖。现在请你设计一个合理的实验方案，从一个培养基中，将三种微生物一次分离开来。(所需试剂可自选)

【加试题】（一）蓝莓富含花青素，含有丰富的营养成分，是世界粮农组织推荐的五大健康水果之一，蓝莓的深加工产品也深受人们的喜爱，下图是某实验室利用蓝莓酒制作蓝莓醋的实验装置，回答以下问题：

（1）果醋发酵需要的菌种是__________，实验前需将该菌种在______上进行扩大培养。

（2）甲中是蓝莓酒和蒸馏水的混合物，其比例是_____

   A.1：2 B.1：4 C. 2：1 D.4：1

（3）乙中是经_________灭菌过的锯末，采用_________法将发酵菌株固定在锯末上制成固定化菌株，可大幅缩短生产周期，降低生产成本和提高生产效率，并增强果醋的风味。

（4）若该菌种在杂菌污染，欲消除污染的杂菌，最简单的方法是____________________。

（二）2014年7月，FDA批准了利用转基因兔生产的新药Rucones（重组人C1酯酶抑制剂），该药物可用于治疗成人及青少年遗传性血管性水肿患者的急性发作，其部分技术路线如图：

（1）由过程①得到的A为_____________ 。

（2）过程②常用的方法是______________。

________细胞作为饲养层细胞，用以___________________。

（4）兔的胚胎干细胞不能发育成完整个体，但可以通过___技术形成重组细胞，然后利用____技术，通过代孕母兔分娩出转基因兔，从转基因兔的乳汁中提取Rucones药物。

(1)蓝莓富含花青素等营养成分，具有保护视力、软化血管、增强人体免疫力等功能。某同学尝试用蓝莓来制作蓝莓果酒和蓝莓果醋。

①制酒中利用的微生物是________，取样后可用________观察该微生物。发酵时一般要先通气，通气的目的是________________。制酒过程中可用________检验酒精的存在，检验后颜色变成灰绿色。

②酿制成功的蓝莓果酒如果暴露在空气中酒味会逐渐消失而出现醋酸味，尤其是气温高的夏天更易如此，分析其原因是________________。醋酸菌将乙醇变为醋酸的环境条件是糖源________(填“充足”或“缺少”)。

③酿制蓝莓果酒时，并不需要对蓝莓进行严格的消毒处理，这是因为在________的发酵液中，绝大多数微生物因无法适应这一环境而受抑制。

④为鉴定蓝莓果醋是否酿制成功，除可以通过观察菌膜、尝、嗅之外，还可以通过检测和比较________作进一步的鉴定。

(2)某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌，并统计每克土壤样品中活菌数目，培养基配方如下。将各种物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL，再经高温灭菌，制成固体培养基备用。

①根据培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌？________(填“能”或“不能”)，原因是__________________________________。

②培养基用________方法灭菌，培养皿用________方法灭菌，等平板冷却凝固后应将平板如何操作以免造成污染？操作是___________________。

③要统计每克土壤样品中活菌数目，宜采用________法接种，根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的菌落数目就能大约推测出样品中活菌数。

④培养分解尿素的细菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是________________________________________________。

⑤实验中使用过的培养基及其培养物必须经过________处理后才能丢弃，以防止微生物的扩散。

(3)为了探索海藻酸钠固定化对绿球藻生长的影响，以及固定化藻对含Zn^2＋污水的净化作用，科研人员用筛选到的一株绿球藻进行试验，流程及结果如下。请回答下列问题：

—→—→

①实验中的海藻酸钠作用是________，CaCl₂的作用是________。

②为洗去凝胶球上残余的CaCl₂和其他污染物，并保持绿球藻活性，宜采用________洗涤。若图1中增加一组1.0%海藻酸钠培养24 h后，移去凝胶球，溶液呈绿色，原因是___________________________________________________________。

③为探索固定化藻对含Zn^2＋污水的净化作用，应选用浓度为_____海藻酸钠制备凝胶球。

④图2中空白凝胶球组Zn^2＋浓度下降的原因是________。结合图1和图2分析，固定化藻的实验组24～48 h间Zn^2＋浓度下降速度较快的主要原因是__________；72～96 h间Zn^2＋浓度下降速度较慢的原因有①_________________________________；②________________________________________。（答两点）

（1）过程①中使用到的微生物是__________，该微生物的代谢类型是__________。

（2）过程①发酵的温度应该在__________℃，在发酵过程 中要先通气后密封，先通气的原因是__________。

（3）若要进一步制作果醋，应在发酵液中加入__________菌种。