[生物一选修1：生物技术实践]多氯联苯是一种有机致癌物质，容易累积在脂肪组织，造成脑部、皮肤及内脏的疾病并影响神经、生殖及免疫系统。多氯联苯为油状液体，污染土壤后，土壤呈现油状板结，很难清除。研究发现部分酵母菌具有分解多氯联苯的作用，为消除这种污染，科研人员计划从受污染的土壤中筛选出高效分解多氯联苯的菌株。

（1）筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品稀释，接种到以             为唯一碳源的培养基上，从功能上讲，该培养基属于              。

（2）对初步提取到的菌株要进行     ，一般操作方法有两种，下图是利用       法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。培养一段时间后，如果出现菌落且菌落周围       消失或减少，说明该菌落中的菌株具有降解多氯联苯的能力。

（3）若要测定培养液酵母菌的菌体数，可在显微镜下用         直接计数。若用稀释涂布平板法统计菌落数，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板进行培养一段时间，这样做的目的是        。

（4）将1ml酵母菌溶液稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0．1mL稀释液经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为42、43、44，据此可得出每升溶液中酵母菌活菌数为             个/L。

[生物——选修1：生物技术实践]

农作物秸秆中含有大量的纤维素，这些纤维素通过纤维素酶的作用可以转化为葡萄糖，而葡萄糖是重要的能源物质，也是食品、医药等的重要原料。纤维素酶一般从纤维素分解菌中获取，因此，要获取纤维素酶需要分离纤维素分解菌。如图是从土壤中分离纤维素分解菌的流程图，请回答下列问题：

（1）图中步骤A表示________，该过程所使用的培养基中含有的碳源为________。

（2）鉴别纤维素分解菌的培养基中加入的鉴别物质是________，其鉴别原理是________。

（3）纤维素酶是一种复合酶．它包括C₁酶、________，其中能将纤维二糖分解为葡萄糖的酶是________。

（4）将纤维素转化为葡萄糖后，利用葡萄糖可以生产乙醇，能将葡萄糖转化为乙醇的微生物是________。

[生物——选修1：生物技术实践]

诱变育种的方法可获得纤维素酶高产菌株而提高酶的产量。某同学设计了如下的实验方案，以获得纤维素酶高产菌株。

（1）实验原理：

①用一定剂量的诱变剂或紫外线照射（或高能辐射）处理微生物可以诱导基因突变。

②纤维素和刚果红反应固体培养基呈________色，微生物可释放纤维素酶分解培养基中的纤维素，在菌落周围形成无色透明圈。

③在纤维素和刚果红固体培养基上的菌落周围，出现透明圈越大，菌株产纤维素酶量越多。

（2）实验步骤：

①第一步：将纯化培养的生产菌株分别处理，甲组用一定剂量的诱变剂处理，乙组用________，内（对照）组不作任何处理。

②第二步：制备含纤维素（作为唯一________）和刚果红（纤维素指示剂）的固体培养基，灭菌和倒甲板。

③第三步：把甲、乙和丙组的菌株采用平板稀释涂布或划线法，分别接种于多个含纤维素和刚果红的固体培养基上，均在________的无菌条件下培养。

④第四步：观察比较实验组和丙组菌株的菌落周围透明圈，选出透明圈最大的菌落，再进行________培养和如此反复处理，可获得高产菌株。

（3）预期结果：

①诱发突变率低，实验组中绝大多数菌落周围的透明圈大小与对照组________（相同或不同）。

②诱发突变多害少利性，实验组与对照组比较，透明圈中大多________（变大或变小）。

③微生物对紫外线照射或高能辐射更敏感，甲和乙组中________的培养基往往无菌株生长。

人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物的胃,可用来发酵处理秸秆,提高秸秆的营养价值。

为了增强发酵效果,研究人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株,并对其降解纤维素能力进行了研究。 请回答下列问题:

(1)在样品稀释和涂布平板步骤中,下列选项不需要的是     (填序号)。

①酒精灯 ②培养皿 ③显微镜 ④无菌水

(2)在涂布平板时,滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是                        。

(3)向试管内分装含琼脂的培养基时,若试管口粘附有培养基,需要用酒精棉球擦净的原因是   。

(4)刚果红可以与纤维素形成红色复合物,但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。研究人员在刚果红培养基平板上,筛到了几株有透明降解圈的菌落(见下图)。 图中降解圈大小与纤维素酶的       有关。 图中降解纤维素能力最强的菌株是           (填图中序号)。

(5)研究人员用筛选到的纤维素酶高产菌株J1和J4,在不同温度和pH条件下进行发测得发酵液中酶活性的结果见下图,推测菌株       更适合用于人工瘤胃发酵,理是                         。

一种广泛使用的除草剂（含氮有机物）在土壤中不易被降解，长期使用可污染土壤．为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明）．

   （1）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理．现有一升土壤浸出液，用无菌吸管吸取1mL液样至盛有9mL无菌水的试管中，依次稀释10³稀释度．各取0.1mL已稀释10³倍的水样分别接种到三个培养基上培养，记录的菌落数分别为55、56、57，则每升原土壤浸出液样中菌体数为______．

   （2）要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，从用途方面来看，上述培养皿中培养基的特点是______．

   （3）接种技术的核心是______．在划线接种时，连续划线的目的是将聚集的菌种逐步______，培养时，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是______或有氧条件抑制了这些细菌的生长．

   （4）在培养基上形成的菌落中，无透明圈菌落利用的氮源主要是______，有透明圈菌落利用的氮源主要是______，据此可筛选出目的菌．实验结果如图显示的A～E五种菌株中，______是最理想菌株．

（选修1：生物技术实践）

水污染是全球性的环境问题，微生物降解是水污染治理的有效手段之一。聚乙烯醇（PVA）是存在于化工污水中的一种难以降解的大分子有机物，PVA分解菌能产生PVA酶分解PVA，PVA与碘作用时能产生蓝绿色复合物，当PVA被分解时蓝绿色复合物消失，形成白色透明斑，请回答下列问题：

（1）上表是筛选出能高效分解PVA的细菌的培养基配方，从物理性质来看，该培养基为         培养基，表中X物质最可能为_______________。实验中还应设置完全培养液对照组，将菌液稀释相同的倍数，选择培养基上生长的菌落数目应明显__________（填“多于”或“少于”）对照组培养基上的数目，从而说明选择培养基具有筛选作用。

（2）要测定土壤稀释液中微生物的数目，可在显微镜下用___________计数板直接计数。若将100mL含有PVA分解菌的土壤样品溶液稀释10⁵倍后，取0.1mL稀释液均匀涂布在选择培养基表面，测得菌落数的平均值为160个，空白对照组平板上未出现菌落，则100mL原菌液中有PVA分解菌_______个，该方法的测量值与实际值相比一般会_______（填“偏大”、“偏小”或“相等”），原因是                       

                  。

（3）要鉴定分离出的细菌是否为PVA分解菌，培养PVA分解菌的培养基中除了加入必需的营养物质外还需要加入_________________用于鉴别PVA分解菌。

（选修一）部分科学家预言未来最理想的燃料是绿色植物，如秸秆等。回答下列相关问题：

（1）秸秆的主要成分是纤维素，可构成植物细胞的______________，其单体为______________。

（2）纤维素的分解需要纤维素酶，纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分,即C₁酶、C₂酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成________。

（3）从土壤中分离分解纤维素的微生物的实验流程如下：

(一)土壤取样→（二）选择培养→(三)梯度稀释→（四)将样品涂布到鉴别培养基上→（五）挑选菌落。

该培养基从物理性质来看属于____________培养基；该过程中步骤(二)选择培养基的营养物质的特点是____________,步骤(三)中稀释的目的是_________。

（4）我国每年都有大量的玉米秸秆被燃烧，科学家建议通过秸轩沼气池来利用秸秆，其中发挥作用的主要微生物有甲烷菌，甲烷菌的代谢类型最可能为____________。通过沼气池利用秸秆的优点是____________。

[生物——选修1：生物技术实践]

为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行如图A所示的实验。

（1）配制好的培养基灭菌通常可以使用_________法。步骤③与步骤②中培养基成分的最大区别是________________________________。

（2）同学甲进行过程④的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图B所示。该同学的接种方法是___________；推测同学甲用此方法接种时出现图B结果可能的操作失误是________________；在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是__________________________________________________。

（3）同学乙也按照同学甲的接种方法进行了过程④的操作：将1mL样品稀释100倍，在3个平板上分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、58和57。据此可得出每升样品中的活菌数为________________。

（4）步骤⑤需要震荡培养其目的是提高培养液溶氧量，同时使____________________________________，提高营养物质利用率。

（5）步骤⑤后取样测定石油含量的目的是______________________________________________________。

玉米是重要的粮食作物，经深加工可生产酒精、玉米胚芽油和果糖等，流程如下：

(1)某同学设计了从土壤中分离纤维素分解菌的实验流程：土壤取样→选择培养→梯度稀释→鉴别培养。最好选择　　　　　　　　　　环境采集土样。配制培养基时，各种成分在分装前必须进行　　　 　   　，接种前要进行　　　    　　。在整个微生物的分离和培养过程中，一定要注意在无菌条件下进行。在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板倒过来放置，这样做的目的是　　　　　　　。

(2)为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基中加入　　　　　，将筛选获得的菌液稀释后用　　　　　      法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生  　    　的菌落作为菌种进行进一步的扩大培养。

(3)玉米胚芽油不易挥发，宜选用萃取法或         法从玉米胚芽中提取。

将没有吃完的西瓜，盖上保鲜膜后放入冰箱，是很多人日常储藏西瓜的办法。但事实上，有时候盖上保鲜膜储藏的西瓜中的细菌种类和数目反而比没用保鲜膜的多。某生物研究小组用保鲜膜保存三天的西瓜表面的瓜瓤制备浸出液，研究细菌的种类和数量。

(1)该研究小组需配制用于培养微生物的培养基，配制的培养基一般都含有水、碳源、          和         。一般采用            法对培养基进行灭菌。

(2)为了避免培养基污染，在培养过程中，需将平板           (填“正置”或“倒置”)。为了观察浸出液中微生物的种类和数量，采用          法接种。接种时，为了避免环境中微生物的污染，实验操作应在         附近进行。

(3)在培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，说明西瓜的浸出液中有                    （填“一种”或“多种”）细菌。细菌总数越多，说明西瓜被细菌污染的程度越         （填“高”或“低”）。