苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害。小明同学准备依据下图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选苯酚降解高效菌株。请回答下列问题:

（1）苯酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K₂HPO₄、MgSO₄、苯酚和水，其中可作为碳源的有_____________。

（2）将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐_____________，以达到富集苯酚降解菌的目的。若上图平板中菌落过于密集，应进一步_____________，以便于菌落计数与分离。制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加_____________。

（3）下图为连续划线法示意图，在图中_____________ （填图中序号）区域更易获得单菌落。

（4）采用比色测定法（使用苯酚显色剂）检测降解后的废水中苯酚残留量。先制作系列浓度梯度并进行显色反应，下表中1～5号比色管的苯酚浓度应分别为________________（单位省略）。

如果废水为50 mg/ L 苯酚溶液，降解后约有21%的苯酚残留，则需将残留液稀释____________（填序号：①5   ②10   ③20）倍后，再进行比色。

（2）若想对初步筛选得到的目的菌进行纯化并计数，可采用的接种方法是 _________ ．对分离的细菌数目统计时，统计的菌落数目往往比活菌的实际数目偏少，原因是_______________________________________ 。

（3）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的_________________________________特点，又具备B淋巴胞的__________________________特点。单克隆抗体与常规的血清抗体相比 ，最大的优越性是________________________________。（至少填两个） 

【生物—选修1 生物技术实践专题】蛋白酶在生物医药和日用化工等生产领域具有重要的经济价值。某同学为筛选产蛋白酶的高产菌株，做了如下实验步骤（配制了下列培养基，在适宜条件下培养）：

（1）为实现筛选目的，步骤Ⅰ所使用的培养基配方中，应去除________并加入高浓度的________。

（2）步骤Ⅲ应挑取图A中________处的菌落，本步骤的目的是________。

（4）图B是该蛋白酶和其它酶的热稳定性数据，即酶在不同温度下保温足够长的时间，再在酶活性最高的温度下测其酶活性。在该蛋白酶的工业化生产过程中，通常需对发酵液在60－70℃保温一定时间的，其作用是________。

[生物一选修1：生物技术实践]多氯联苯是一种有机致癌物质，容易累积在脂肪组织，造成脑部、皮肤及内脏的疾病并影响神经、生殖及免疫系统。多氯联苯为油状液体，污染土壤后，土壤呈现油状板结，很难清除。研究发现部分酵母菌具有分解多氯联苯的作用，为消除这种污染，科研人员计划从受污染的土壤中筛选出高效分解多氯联苯的菌株。

（1）筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品稀释，接种到以             为唯一碳源的培养基上，从功能上讲，该培养基属于              。

（2）对初步提取到的菌株要进行     ，一般操作方法有两种，下图是利用       法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。培养一段时间后，如果出现菌落且菌落周围       消失或减少，说明该菌落中的菌株具有降解多氯联苯的能力。

（3）若要测定培养液酵母菌的菌体数，可在显微镜下用         直接计数。若用稀释涂布平板法统计菌落数，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板进行培养一段时间，这样做的目的是        。

（4）将1ml酵母菌溶液稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0．1mL稀释液经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为42、43、44，据此可得出每升溶液中酵母菌活菌数为             个/L。

人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物的胃,可用来发酵处理秸秆,提高秸秆的营养价值。

为了增强发酵效果,研究人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株,并对其降解纤维素能力进行了研究。 请回答下列问题:

(1)在样品稀释和涂布平板步骤中,下列选项不需要的是     (填序号)。

①酒精灯 ②培养皿 ③显微镜 ④无菌水

(2)在涂布平板时,滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是                        。

(3)向试管内分装含琼脂的培养基时,若试管口粘附有培养基,需要用酒精棉球擦净的原因是   。

(4)刚果红可以与纤维素形成红色复合物,但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。研究人员在刚果红培养基平板上,筛到了几株有透明降解圈的菌落(见下图)。 图中降解圈大小与纤维素酶的       有关。 图中降解纤维素能力最强的菌株是           (填图中序号)。

(5)研究人员用筛选到的纤维素酶高产菌株J1和J4,在不同温度和pH条件下进行发测得发酵液中酶活性的结果见下图,推测菌株       更适合用于人工瘤胃发酵,理是                         。

生物技术实践]某生物兴趣小组试图探究牛和山羊的瘤胃中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能降解尿素的细菌（目的菌）.培养基成分如表所示，实验步骤如图所示。请分析回答：

（1）培养基中加入尿素的目的是        ，原理是                                  。

（2）实验需要振荡培养，原因是                             。转为固体培养时，常采用                的方法接种，获得单菌落后继续筛选。

（3）在实验过程中：①培养基、培养皿；②玻棒、试管、锥形瓶、吸管；③瘤胃中液体。其中需要灭菌是                 （填序号）。

（4）分离分解尿素的细菌实验时,甲同学从培养基上筛选出大约150个菌落,而其他同学只选择出大约50个菌落.甲同学实验结果差异的原因可能有        

①取样不同    ②培养基污染    ③操作失误    ④没有设置对照

（5）以上表培养基培养“目的菌”后，加入指示剂酚红后变红色，说明“目的菌”能分解尿素。得出该实验结论的理由是                    

（6）为进一步确定取自瘤胃中液体的适当稀释倍数,将接种的培养皿放置在37°C恒温培养箱中培养24h～48h,观察并统计具有红色环带的菌落数,结果如下表,其中           倍的稀释比较合适。

茶饮料中含较多的天然成分。回答下列问题：

（1）红茶菌液是一种传统的活菌饮料，由酵母菌、醋酸菌等微生物利用蔗糖等营养物质共同发酵产生。在接种活菌前，将红茶糖液煮沸的目的是_______________。在发酵的过程中，发现先出现酒味后出现醋味，从物质代谢的角度分析，原因是________

_____________________________________________。

（2）茶饮料所用的胡萝卜素，通常采用______________法提取，理由是_________________________________________________

_____________________________________________。

（3）茶饮料所用的茉莉芳香油的提取流程如下：茉莉花+水→过程A→油水混合物→油层分离与粗提取→过程B+过滤→茉莉油。过程A的方法是_______________，过程B的目的是__________________。

[生物——选修1：生物技术实践]

为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行如图A所示的实验。

（1）配制好的培养基灭菌通常可以使用_________法。步骤③与步骤②中培养基成分的最大区别是________________________________。

（2）同学甲进行过程④的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图B所示。该同学的接种方法是___________；推测同学甲用此方法接种时出现图B结果可能的操作失误是________________；在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是__________________________________________________。

（3）同学乙也按照同学甲的接种方法进行了过程④的操作：将1mL样品稀释100倍，在3个平板上分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、58和57。据此可得出每升样品中的活菌数为________________。

（4）步骤⑤需要震荡培养其目的是提高培养液溶氧量，同时使____________________________________，提高营养物质利用率。

（5）步骤⑤后取样测定石油含量的目的是______________________________________________________。

某兴趣小组采用稀释涂布平板法对牛奶样品中的微生物进行计数，步骤如下。回答下列问题：

（1）梯度稀释：每次取样前需用手指轻压移液管上的橡皮头，吹洗三次，目的是_________

___________________。

（2）涂布平板：取0.1mL稀释液，均匀地涂布在牛肉膏蛋白胨固体培养基表面，每个浓度下涂布三个平板。

（3）培养与计数：将上述平板放入恒温培养箱中培养，每隔12小时统计一次菌落数，取菌落数稳定时的记录作为结果，防止________________________________________。在10⁴、10⁵、10⁶倍稀释时的统计结果记录如下表：

计算得每毫升牛奶样品中细菌数大约是___________个。这种方法统计的活菌数往往比实际数目低，原因是__________________________________________________________。除此以外，_________________________也是测定微生物数量的常用方法，此方法需要使用血细胞计数板。

微生物连续培养时，一部分旧的培养基以一定的速度流出，同时不断有等量的新鲜培养基流入以保证微生物对营养物质的需要。研究人员将大肠杆菌JA122菌株接种到葡萄糖含量受到限制的培养基中，连续培养多代，然后取样分析其中存在的新菌株。请回答下列问题：

（1）用于连续培养JA122大肠杆菌的培养基从物理性质看属于                  。培养基中除了含葡萄糖作为             外，还应该含有                            。

（2）样品中共发现CV101、CV103、CV116三种新菌株，产生新菌株的原因是由于JA122大肠杆菌发生了

                      导致的，产生三种不同类型的新菌株说明         。

（3）下图表示将CV101、CV103、CV116三种新菌株混合在一起培养的生长情况，三者之间互为竞争关系，并保持稳定生长水平，没有出现一种菌株生存而另外两种菌株灭绝的现象，说明它们已经具有了不同的适应能力，这是              的结果。

（4）对三种菌株的代谢差异进行分析发现，CV103对葡萄糖吸收率最高，代谢终产物是醋酸盐。进一步研究表明，CV101可以在过滤的培养过CV103的培养基中生长，据此作出的推测是：                   。请设计并完成下列实验步骤，来验证你的观点。

①配制                    的固体培养基（A组);和不含碳源的固体培养基（B组）；

②将等量的适量稀释的CV101菌液分别接种到A、B培养基中培养一段时间，并观察记录菌株的生长情况。实验过程应在          条件下进行。

③预期实验结果：                                               。