【生物——选修1：生物技术实践】

某研究小组从牛的瘤胃中采集样本，进行分解尿素的微生物的分离与计数。实验基本步骤如下：

（1）分解尿素的微生物含有_______________，因此，配制培养基时以尿素作为唯一氮源，尿素会被分解成_________使培养基的碱性增强。

（2）配制培养基时，需添加琼脂，琼脂起________________作用；培养基中添加___________作为指示剂，可使目标菌落的周围产生红色环带。

（3）对尿素溶液进行灭菌的最适方法是___________灭菌。

  A.高压蒸汽  B.干热  C.添加抗生素 D.过滤  E.紫外线照射   F. 70﹪酒精浸泡

（4）该小组在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是__________________________；然后将1mL瘤胃样液稀释1000倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板的菌落数分别为49、47和45。据此可得出每升瘤胃样液中分解尿素的微生物活菌数为__________，理论上，统计的菌落数往往_____（低、等、高）于接种的实际活菌数目。

[生物——选修1：生物技术实践]

已知尿素分解菌合成的脲酶能将尿素分解成氨。回答下列问题：

（1）从土壤中分离尿素分解菌时，首先要进行选择培养，该过程使用的培养基中要添加________作为唯一氮源；制备上述培养基时，在倒平板之前要进行灭菌处理，常用的灭菌方法是________；而对接种环等金属用具常用的灭菌方法则是________。

（2）接种尿素分解菌后的培养基需要倒置培养，原因是________。若采用稀释涂布平板法检测土壤样液中的尿素分解菌含量，在涂布接种前，应随机选取若干个灭菌后的空白平板先培养一段时间．这样做的目的是________；然后，将1mL样液稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、58和60，据此可得出每升土壤样液中的活菌数为________。

（3）鉴别培养基中是否存在尿素分解菌时，可在培养基中加入________指示剂；如果有尿素分解菌存在，则培养基中该菌落的周围会出现红色。

某研究小组从牛的瘤胃中采集样本，进行分解尿素的微生物的分离与计数。实验基本步骤如下：

请回答：

（1）分解尿素的微生物含有_______________，因此，配制培养基时以尿素作为唯一氮源，尿素会被分解成_________使培养基的碱性增强。

（2）配制培养基时，需添加琼脂，琼脂起________________作用；培养基中添加___________作为指示剂，可使目标菌落的周围产生红色环带。

（3）对尿素溶液进行灭菌的最适方法是___________灭菌。

  A.高压蒸汽  B.干热   C.添加抗生素  D.过滤   E.紫外线照射    F. 70﹪酒精浸泡

（4）该小组在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是__________________________；然后将1mL瘤胃样液稀释1000倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板的菌落数分别为49、47和45。据此可得出每升瘤胃样液中分解尿素的微生物活菌数为__________，理论上，统计的菌落数往往_____（低、等、高）于接种的实际活菌数目。

[生物——选修1：生物技术实践]

已知硅酸盐细菌在甲（尿素为唯一氮源）、乙、丙培养基上均能生长。表1表示以尿素为唯一氮源的培养基的配方，表2是每种培养基上每个稀释度的菌落数及菌落直径。请回答下列问题：

表1

表2

（1）表1从物理性质看属于________培养基，按用途划分属于________培养基。

（2）为统计硅酸盐细菌的数目，应采用________法进行接种，该方法的所有操作都应在________环境中进行。表2中，稀释度为________时，统计的结果较为可靠。

（3）为检测培养基灭菌是否彻底，应进行的操作是________。由表2中的数据得出，用________培养基分离硅酸盐细菌的效果最好。

（4）甲培养基中加入________指示剂，可根据指示剂变红的情况初步鉴定菌种分解尿素的情况。

某实验小组欲从土壤中筛选出能分泌淀粉酶的芽孢杆菌，设计实验步骤如下，请给予合理的补充。

(1)采样与培养：将采集的土样混匀后称取1g，置于经过灭菌处理的________(填“固体”或“液体”)培养基中，28℃振荡培养。

(2)接种与选择：为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行________处理。之后，将菌液涂布接种于以________为唯一碳源的固体培养基上，30℃条件下培养。为避免污染，需将培养皿呈________状态放置。此外，为排除其他因素的影响，提高实验可信度．本步骤需设计________作为空白对照。

(3)筛选与纯化：将适量的碘液滴加在平板中的菌落周围，如果菌落周围的现象是________，则说明此种菌能够________。

[生物——选修1：生物技术实践]

请回答下列与微生物有关的问题：

(1)土壤中具有分解尿素的细菌，此类细菌能产生脲酶，该酶能将尿素分解成________。

(2)为从富含尿素的土壤中分离获得尿素分解菌的单菌落某同学设计了甲、乙两种培养基(成分见下表)：

注：“＋”表示有，“－”表示无。

培养基甲________(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别尿素分解菌，原因是________；培养基乙________(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别尿素分解菌，原因是___________________________。

(3)如分别取0.1mL已稀释10²倍的水样分别涂布到四个琼脂同体培养基的表面进行培养，培养基记录到产生脲酶的细菌的菌落数分别为161、155、158、370，则每升原水样中该细菌数为________。

(4)纯化细菌时使用的培养基一般用________法灭菌，________(填“可”或“不可”)用加入抗牛素的方法防止杂菌感染。

(5)某小组采用平扳划线法分离某样本的该细菌。在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是______________________________________________________。

(6)尿素分解苗在20℃长期保存时，菌液中常需要加入一定量的________(填“石蜡”“蒸馏水”或“甘油”)。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

回答下列与生物工程有关的内容

(1)基因工程技术中，________是将目的基因导入植物细胞最常用的方法，其中的Ti质粒上的T－DNA是指________。获得该基因后，将该基因在反应体系中扩增时需要舔加的有机物质有________。

(2)试管婴儿技术是指采用人工方法将卵子与精子从人体内取出并在体外受精，发育成胚胎后，再移植回母体子宫内，以达到受孕目的的一种技术。顺利受精必须满足两个条件来自父方的精子要进行________；来自母方的卵母细胞要________。

________(填生物技术)是培育试管婴儿最后一道工序。一般来说，该技术操作比较合适的时期是________。

(3)与传统方法生成的抗体相比，单克隆抗体最主要的优点是特异性强、灵敏度高、________。在癌症治疗时，把抗癌细胞的单克隆抗体跟________相结合，制成的“生物导弹”，借助单克隆抗体的________作用，将药物带到癌细胞位置，将其在原味杀死。

(4)桑基鱼塘生态系统能充分利用废弃物中的能量，形成无废弃物农业，这主要遵循了生态工程的________原理。同时，通过饲养家禽、家畜，栽培食用菌，提高农民经济收入使保护环境和发展经济相互协调，这又体现了生态工程的________原理。我国西北一些地区年降雨量少，适官种植灌小和草，却被硬性规定种植属于乔木的杨树，致使许多地方的杨树长成半死不活状，结果防护林成为残败的“灰色长城”。其失败的原困主要是违背了________原理。

（1）玉米秸秆预处理后，秸秆中的纤维素经C₁酶、C_X酶和          酶的协同作用下最终被 水解成葡萄糖；再经酵母菌发酵产生酒精。发酵过程中检测酵母菌的数量除可采用稀释涂布平板法

计数外，           法也是测定微生物数量的常用方法。

（2）在酸性条件下，发酵产生的酒精，与重铬酸钾反应呈现         色。在盐酸酸化条件下，泡菜腌制过程中产生的亚硝酸盐，与对氨基苯磺酸发生重氮反应后，与N—1—萘基乙二胺盐酸盐结合形成          色染料。在含           的培养基上培养大肠杆菌，菌落会呈现黑色。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入               ，因培养尿素分解菌后而变为红色。纤维素等多糖物质可以与          染料形成红色复合物。

2 （16分）当植物细胞脱离了原来所在植物体的器官或组织而处于离体状态时，在一定的营养物质、激素和其它外界条件的作用下，就可能表现出全能性，发育成完整的植株。影响菊花组织培养和月季花药培养的成功率的因素有材料的选择与培养基的组成。

（1）材料的选择：菊花的组织培养一般选择        植株的茎上新萌发的侧枝。在月季的花粉发育过程中，只有某一个时期（       期）对离体刺激敏感，为了挑选到该时期的花药，通常选择         的花蕾。要确定其中的花粉是否处于适宜的发育期，可用的方法有         和焙花青—铬钒法，后者能将细胞核染成            色。

（2） 培养基的组成：常用的MS培养基主要成分包括：大量元素、微量元素、有机物（如甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素以及            ）等。在配制好的MS培养基中，常常需要添加植物激素。植物激素的浓度、使用的先后顺序以及用量的比例等都会影响实验结果。如同时使用生长素和细胞分裂素，出现的实验结果是               ；生长素用量比细胞分裂素用量比值低时，出现的实验结果是                 。     

一种广泛使用的除草剂(含氮有机物)在土壤中不易被降解，长期使用可污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌(已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明)。

(1)制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理。现有1 L土壤浸出液，用无菌吸管吸取1 mL至盛有9 mL无菌水的试管中，依次稀释至10³倍。各取0.1 mL已稀释10³倍的水样分别接种到三个培养基上培养，记录的菌落数分别为55、56、57，则每升原土壤浸出液样品中菌体数为________。

(2)要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，从用途方面来看，上述培养基的特点是___________________________。

(3)接种技术的核心是___________________________。接种时，连续划线的目的是将聚集的菌种逐步____________________________，培养时，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是________________________或有氧条件抑制了这些细菌的生长。

(4)在培养基上形成的菌落中，无透明圈菌落利用的氮源主要是________，有透明圈菌落利用的氮源主要是________，据此可筛选出目的菌。实验结果如下图所示，A～E五种菌株中，________是最理想菌株。