[生物——选修1：生物技术实践]

请回答下列与微生物有关的问题。

（1）土壤中具有分解尿素的细菌，此类细菌能产生脲酶，该酶能将尿素分解成________。

（2）为从富含尿素的土壤中分离获得尿素分解茵的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基（成分见下表）：

（注：“＋”表示有，“－”表示无）

培养基甲________（填“能”或“不能”）用于分离和鉴别尿素分解菌，原因是________；培养基乙________（填“能”或“不能”）用于分离和鉴别尿素分解菌，原因是________。

（3）如分别取0.1mL已稀释10²倍的水样分别涂布到四个琼脂固体培养基的表面进行培养，培养基记录到产生脲酶的细菌的菌落数分别为161、155、158、170，则每升原水样中该细菌数为________个。

（4）纯化细菌时使用的培养基一般用________法灭菌，________（填“可”或“不可”）用加入抗生素的方法防止杂菌感染。

（5）某小组采用平板划线法分离某样本的该细菌。在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是________。

（6）尿素分解菌在－20℃长期保存时，菌液中常需要加入一定量的________（填“石蜡”“蒸馏水”或“甘油”）。

请回答下列有关的问题：

（1）鉴定尿素分解菌需在培养基中加入        指示剂。纤维素分解菌的筛选方法                              

（2）制作泡菜时，所用盐水使用前，盐水需要         。为了缩短制作时间，有人还会在盐水中加入少量陈泡菜液，加入陈泡菜液的目的是         。

（3）在采用平板划线法分离硅酸盐细菌时，第二次及之后的划线，总是在上一次划线末端开始，这样做的目的是                                。

（4）水中蒸馏的方法对于有些原料不适用。这是因为水中蒸馏会导致                   、和                 等问题。

（5）萃取的效率主要取决于                     和                ，同时还要受到原料颗粒的大小、紧密程度、含水量、萃取的温度和时间等条件的影响。

（生物选修）某科研兴趣小组欲对土壤中分解尿素的细菌进行分离纯化和计数，请帮助完成实验．

（1）实验原理：分解尿素的细菌由于含有脲酶，可将 而使周围环境的PH上升，在以尿素为唯一氮源的培养基中加入 指示剂，对其进行分离、鉴别；通过平板上的菌落数可以推测样品中的活菌数．

（2）实验简要步骤：

①土壤取样并制备培养基：用 法对培养基进行灭菌．

②分离纯化该细菌：用稀释涂布平板法进行接种，首先需对土壤滤液进行 ，再分别取土壤滤液0.1mL涂布在每一平板上．

③培养、观察与计数．

（3）有同学发现，稀释倍数为10⁴的5个平板上，长出的菌落数分别为9、147、150、153和360，则每升土壤样液中的细菌数量为             个．

（4）某些同学想将分离出的目的菌在﹣20℃长期保存，菌液中常需要加入一定量的                  （填化学物质）．

[生物—选修1：生物技术实践]

   为研究酸奶中的乳酸杆菌数是否达标，某同学做了如图所示的实验。请回答下列问题：

（1）为避免样本中菌体浓度过高，需要对样本用无菌水进行________处理。

（2）培养乳酸杆菌的固体培养基中，除了含有________、水和无机盐等主要营养成分外，还应加入适量的________和琼脂，在灭菌前，还需调节培养基的________。接种后，培养基置于（填“25～28℃”或“30～37℃”）恒温箱中培养。

（3）如图，测定菌落数时，该同学涂布了5个平板，培养后的菌落数分别是20、110、116、134和120，可算出每毫升样品中的菌落数是________个。

（4）用这种方法测定的乳酸杆菌菌落数比实际活菌数量________，因为________。

欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，下列实验操作中不正确的是

①对于需要长期保存的菌种，可采用甘油管藏法，放在－４℃的冰箱中保存

②土壤中的细菌之所以能分解尿素的根本原因是它们含有脲酶　

③分离纤维素分解菌的选择培养所用培养基为液体培养基　

④植物组织培养中，生长素与细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化、再分化的关键性激素

(1)欲从多种微生物中分离某种细菌并抑制其他微生物的生长．应使用________培养基．纯化菌种时可采用比较简单的________法进行接种，接种操作应在________进行．

(2)纯化的菌种常采用固体斜面培养基临时保藏，该方法保存的时间较________，而且菌种易________．常用的凝固剂是________．

(3)从培养基所含的成分来看，从土壤中分离出固氮菌的培养基特点是________，从土壤中分离出纤维素分解菌的培养基特点是________．

（二）人组织纤溶酶原擞活物(htPA)是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得．流程如下：

(1)卵母细胞可以从活体________中采集，还可从已处死的雌羊卵巢中获取．对供体母羊用________处理，可以获取更多的卵(母)细胞．采集的精子需要经过________处理，才具备受精能力．

(2)欲用有限的早期胚胎获得多个转基用个体，可以利用________技术．由于代孕母羊对移入其子宫的外来胚胎________，才使早期胚胎能在代孕母羊体内存活．

(3)质粒上应有________，才能使htPA基因插入其中．在转htPA基因母羊的肌肉细胞中________(能、不能)检测到目的基因．若在其羊乳中检测到________，说明目的基因成功表达．

多氯联苯是一种有机致癌物质，容易累积在脂肪组织，造成脑部、皮肤及内脏的疾病并影响神经、生殖及免疫系统。多氯联苯为油状液体，污染土壤后，土壤呈现油状板结，很难清除。研究发现部分酵母菌具有分解多氯联苯的作用，为消除这种污染，科研人员计划从受污染的土壤中筛选出高效分解多氯联苯的菌株。

（1）筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品稀释，接种到以             为唯一碳源的培养基上，从功能上讲，该培养基属于              。

（2）对初步提取到的菌株要进行      ，一般操作方法有两种，下图是利用                    法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。培养一段时间后，如果出现菌落且菌落周围           消失或减少，说明该菌落中的菌株具有降解多氯联苯的能力。

（3）若要测定培养液酵母菌的菌体数，可在显微镜下用                 直接计数。若用稀释涂布平板法统计菌落数，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板进行培养一段时间，这样做的目的是                                          。

（4）将1ml酵母菌溶液稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1ml稀释液经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为42、43、44，据此可得出每升溶液中酵母菌活菌数为             。