[生物——选修1：生物技术实践]

已知硅酸盐细菌在甲（尿素为唯一氮源）、乙、丙培养基上均能生长。表1表示以尿素为唯一氮源的培养基的配方，表2是每种培养基上每个稀释度的菌落数及菌落直径。请回答下列问题：

表1

表2

（1）表1从物理性质看属于________培养基，按用途划分属于________培养基。

（2）为统计硅酸盐细菌的数目，应采用________法进行接种，该方法的所有操作都应在________环境中进行。表2中，稀释度为________时，统计的结果较为可靠。

（3）为检测培养基灭菌是否彻底，应进行的操作是________。由表2中的数据得出，用________培养基分离硅酸盐细菌的效果最好。

（4）甲培养基中加入________指示剂，可根据指示剂变红的情况初步鉴定菌种分解尿素的情况。

一种广泛使用的除草剂(含氮有机物)在土壤中不易被降解，长期使用可污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌(已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明)。

(1)制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理。现有1 L土壤浸出液，用无菌吸管吸取1 mL至盛有9 mL无菌水的试管中，依次稀释至10³倍。各取0.1 mL已稀释10³倍的水样分别接种到三个培养基上培养，记录的菌落数分别为55、56、57，则每升原土壤浸出液样品中菌体数为________。

(2)要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，从用途方面来看，上述培养基的特点是___________________________。

(3)接种技术的核心是___________________________。接种时，连续划线的目的是将聚集的菌种逐步____________________________，培养时，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是________________________或有氧条件抑制了这些细菌的生长。

(4)在培养基上形成的菌落中，无透明圈菌落利用的氮源主要是________，有透明圈菌落利用的氮源主要是________，据此可筛选出目的菌。实验结果如下图所示，A～E五种菌株中，________是最理想菌株。

[生物—选修1：生物技术实践]某生物兴趣小组试图探究牛和山羊的瘤胃中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能降解尿素的细菌（目的菌）。培养基成分如表所示，实验步骤如图所示。请分析回答：

（1）培养基中加入尿素的目的是     ，原理是                                  。

（2）实验需要振荡培养，原因是                           。转为固体培养时，常采用                的方法接种，获得单菌落后继续筛选。 

（3）在实验过程中：①培养基、培养皿；②玻棒、试管、锥形瓶、吸管；③瘤胃中液体。其中需要灭菌是                 （填序号）。 

（4）分离分解尿素的细菌实验时，甲同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。甲同学实验结果差异的原因可能有              （填序号）①取样不同    ②培养基污染    ③操作失误    ④没有设置对照 

（5）以上表培养基培养“目的菌”后，加入指示剂酚红后变红色，说明“目的菌”能分解尿素。得出该实验结论的理由是                                                 。 

（6）为进一步确定取自瘤胃中液体的适当稀释倍数，将接种的培养皿放置在37°C恒温培养箱中培养24h～48h，观察并统计具有红色环带的菌落数，结果如下表，其中       倍的稀释比较合适。

螺杆菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验基本步骤如下：

→→→→

(1)在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为Hp含有脲酶，它能以尿素作为氮源；若有Hp，则菌落周围会出现          色环带。

(2)步骤X表示          。纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即          和          。接种时所用的接种环通过          灭菌，在第二次及其后的划线操作时，总是从          开始划线。

   (3)在培养时，需将培养皿倒置并放在          中。

(4)临床上用¹⁴C呼气试验检测人体是否感染Hp，其基本原理是Hp能将¹⁴C标记的____________分解为NH₃和¹⁴CO₂。

【生物一选修1：生物技术实践】

某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌，并统计每克土壤样品中活菌数目，培养基配方如下。将各种物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL，再经高温灭菌，制成固体培养基备用。

（1）根据培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌？________（填“能”或“不能”），原因是_________________。

（2）培养基用________方法灭菌，培养皿用________方法灭菌，待培养基冷却到________℃（填“20”、“30”、“40”或“50”）左右时，在________附近倒平板，等平板冷却凝固后，将平板倒过来放置，可以防止________，

 以免造成污染。

（3）要统计每克土壤样品中活菌数目，宜采用________法接种，根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的________就能大约推测出样品中活菌数。

（4）培养分解尿素的细菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是____________         ___。

（5）实验中使用过的培养基及其培养物必须经过______  __处理后才能丢弃，以防止微生物的扩散。

 生物兴趣小组试图为探究牛和山羊的瘤胃中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能降解尿素的细菌（目的菌）。培养基成分如下表所示，实验步骤如下图所示。请分析回答问题：

（2）分离分解尿素的细菌实验时，甲同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。甲与其他同学实验结果差异的原因可能有__________（填序号） ①取样不同②培养基污染③操作失误④没有设置对照 

（3）以_______为唯一氮源的培养基培养“目的菌”后，加入酚红指示剂后变红色，说明_____________________。

（4）比较细菌与酵母菌的结构最明显的区别是：细菌________。从同化作用类型来看的，筛选出来的“目的菌”属于____________________。

[生物——选修1：生物技术实践]

下表为培养某种微生物的培养基配方，请回答有关问题：

 （1）该种培养基可用来培养            的细菌。从用途看，这种培养基称为___ ____培养基。

（2）如果要通过统计培养基中的菌落数来估算样品中的细菌数，则在上述培养基中还需要添加 

        作为凝固剂，接种时应采用                  法才能达到目的。这种方法统计到的是样品中_______的数目，除了这种方法，还有                也是测定微生物数量的常用方法。在用不同浓度的稀释液培养得到的平板中，为保证统计的数目结果较为准确，一般选择菌落数在_______的平板进行计数。

（3）某同学从土壤中分离出目的细菌以后，若要对其作进一步的鉴定，可在上述的培养基中加入_______指示剂，培养该菌后，如果指示剂变_______，可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。

欲从土壤中筛选出能产生脲酶的微生物并予以纯化计数，采用了如图所示的基本操作流程，请回答下列问题：

(1)取得土样后应先用                           (填试剂)对土壤进行梯度稀释，然后将稀释液涂布在平面培养基上，这种选择培养基在营养组成上的重要特点是                   在这样的培养基上长出的细菌                    (填“一定”或“不一定”)都能产生脲酶。若在平板中加入酚红，目的菌落出现的变化是                      

(2)若要对相应微生物进行计数，一个稀释度应涂布2到3个平板，并计算________。若稀释度不够高，所得的数据与实际值比较应________(填“偏大”“偏小”或“相等”)。经涂布获得的菌落可以采用平板划线法进一步纯化，每次划线后接种环必须________，才能再次用于划线。获得的纯化菌种可以保存在试管中，塞上棉塞或盖上封口膜，不能密封，原因是                             

大肠杆菌是一种兼性厌氧菌，在无氧条件下，发酵能将葡萄糖转换成多种有机酸并生成二氧化碳，某研究机构用“滤膜法”对受污染的河流水体进行了大肠杆菌活菌数目的测定。

回答下列相关问题：

（1）研究人员向葡萄糖蛋白胨培养液中加入适量的溴麝香草酚蓝水溶液后，装入图甲所示的试管中，再将污水水样滴加进去振荡均匀，适宜条件下培养一段时间后可观察到溶液颜色的变化是                    。

（2）图乙中滤膜的孔径应______（“大于”、“小于”或“等于”）大肠杆菌。

（3）制备图乙中牛肉膏蛋白胨固体培养基时，培养基的灭菌方法是          ，待培养基冷却至   ℃左右时进行倒平板。

（4）为了鉴别大肠杆菌菌落，可向培养基中加入                染料，该研究机构通过统计______色菌落的数目，计算出单位体积样品中大肠杆菌数目。理论上他们的统计值要比实际值          ，（“偏高”、“偏低”或“相等”） 理由是                                                          。

请回答下列与微生物有关的问题：

（1）土壤中具有分解尿素的细菌，此类细菌能产生脲酶，该酶能将尿素分解成                  。

（2）为从富含尿素的土壤中分离获得尿素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基(成分见下表）：

注：“+”表示有，“-”表示无

培养基甲       (填“能”或“不能”)用于分离和鉴别尿素分解菌，原因是                        ；培养基乙           (填“能”或“不能”)用于分离和鉴别尿素分解菌，原因是                    。

（3）如分别取0.1mL已稀释10²倍的水样分别涂布到四个琼脂固体培养基的表面进行培养,培养基记录到产生脲酶的细菌的菌落数分别为161、

155、158、370，则每升原水样中该细菌数为                 。

（4）纯化细菌时使用的培养基一般用         法灭菌，               (填“可”或“不可”)用加入抗生素的方法防止杂菌感染。

（5）某小组采用平板划线法分离某样本的该细菌。在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是                      

（6）尿素分解菌在-20℃长期保存时,菌液中常需要加入一定量的            (填“石蜡”“蒸馏水”或“甘油”）。