4．
紫杉醇是从红豆杉属植物树皮中提取分离出来的具有独特抗肿瘤作用的物质，目前靠从树皮中提取紫杉醇远远不能满足需求。回答下列问题：
(1)研究人员从红豆杉树皮中分离出具有产紫杉醇能力的内生真菌。将获得的菌丝体分别置于不同pH或温度的培养液中，并加入适量酶X溶液，经过一系列处理后，收集纯化的原生质体，结果如下。图表结果表明，酶X在________条件下活力最佳。
酶解温度(℃) | 原生质体产量(×106个/mL) |
25 | 12 |
28 | 22 |
32 | 31 |
35 | 26 |
(2)培养基灭菌常采用__________法，灭菌后需要冷却到______________℃左右才能用来倒平板，平板冷却凝固后倒置其原因是_______________________________。
(3)若将收集到的原生质体培养液稀释104倍后，各取_____ mL稀释液分别均匀涂布在3个固体培养基上培养，一段时间后统计菌落数分别为18、19、17。这种接种方法是____________________________，得到的菌落数____________(填“大于”“等于”或“小于”)接种的有活力的原生质体的数量。
(4)Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：
①步骤①中，在核移植前应通过____________去除卵母细胞的__________。 ②步骤②中，重组胚胎培养到__________期时，可从其内细胞团分离出ES细胞。
③步骤③中，需要构建含有Rag2基因的表达载体。可以根据Rag2基因的__________设计引物，利用PCR技术扩增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有________________酶的酶切位点。
④ES细胞在体外不同培养条件下，可以维持不分化的状态，也可以诱导分化为不同类型的组织细胞，因而是研究_______________的理想材料。
⑤上述治病方法虽然操作复杂，但效果较为可靠，称为__________________。