抗凝血酶Ⅲ蛋白是一种血浆糖蛋白，临床上主要用于血液性疾病的治疗。凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。下列是生产这两种酶的相关思路，请回答下列问题：

（1）图1为通过培育转基因奶牛获得抗凝血酶Ⅲ蛋白的流程。

①图中过程a指的是利用________法将目的基因导入受精卵，受体细胞不选用体细胞的理由是________________。

（2）从牛胃液中分离得到的凝乳酶以其催化能力强而被广泛应用，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中。

①从牛胃细胞中提取目的基因。以此DNA为模板进行PCR扩增，还需要____________、____________、____________等。

②为提高重组DNA分子的比例，在构建重组DNA分子（如图2所示）时最好选用______________作限制酶。

③经研究发现，如果将该凝乳酶的第20位和24位氨基酸变为半胱氨酸，则其催化能力将提高2倍。现已知通过蛋白质工程可生产高效凝乳酶，请写出有关制备步骤：________________________。

科学家通过利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，提高了光合作用过程中Rubisco酶基因对CO₂的亲和力，从而显著提高了植物的光合作用速率。请回答下列问题：

（1）PCR过程所依据的原理是                           ，该过程需要加入的酶是          。利用PCR技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成          。

（2）该技术不直接改造Rubisco酶，而通过Rubisco酶基因进行改造，从而实现对Rubisco酶的改造，其原因是                           。和传统基因工程技术相比较，定点突变最突出的优点是获得的产物一般是自然界中             （填“存在的”或“不存在的”），PCR定点突变技术属于         工程的范畴。

（3）可利用定点突变的DNA构建基因表达载体，常用                法将基因表达载体导入植物细胞，将该细胞经植物组织培养技术培育成幼苗，从细胞水平分析所依据的原理是                        。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

   科学家通过利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，提高了光合作用过程中Rubisco酶对CO₂的亲和力，从而显著提高了植物的光合作用速率。请回答下列问题：

（1）PCR过程所依据的原理是________，利用PCR技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成________；扩增过程需要加入________酶。

（2）启动子是一段有特殊结构的DNA片段，其作用是________。目的基因能在不同生物体内正常表达原来的蛋白质，说明整个生物界________。PCR定点突变技术属于________的范畴。

（3）可利用定点突变的DNA构建基因表达载体，常用________将基因表达载体导入植物细胞，还需用到植物细胞工程中的________技术，才能最终获得转基因植物。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

科学家通过利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，提高了光合作用过程中Rubisco酶对CO₂的亲和力，从而显著提高了植物的光合作用速率。请回答下列问题：

（1）PCR过程所依据的原理是________，利用PCR技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成________；扩增过程需要加入________酶。

（2）启动子是一段有特殊结构的DNA片段，具作用是________。目的基因能在不同生物体内正常表达原来的蛋白质，说明整个生物界________。PCR定点突变技术属于________的范畴。

（3）可利用定点突变的DNA构建基因表达载体，常用________将基因表达载体导入植物细胞，还需用到植物细胞工程中的________技术，来最终获得转基因植物。

下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1和图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

(1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有________个游离的磷酸基团。

(2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越________。

(3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是____________________________________________________________________。

(4)与只使用EcoR Ⅰ相比较，使用BamH Ⅰ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止_____________________________。

(5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入___________酶。

(6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了_____________________。

(7)蛋白质工程也被称为第二代基因工程，其基本途径是从预期蛋白质功能出发，通过_____   ___和________________，进而确定相对应的脱氧核苷酸序列，据此获得基因，再经表达、纯化获得蛋白质。

(8)将重组DNA分子导入植物受体细胞的常用方法为               法。 为了确定转基因是否培育成功，要用放射性同位素标记的                         作探针进行分子杂交检测。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

为增加油葵种子中的含油量，科学家尝试将花生中的酶A基因导入油葵细胞．获得转基因油葵新品种。

(1)为获取目的基因，可从花生细胞中提取_____________，经逆转录形成cDNA。以此cDNA为模板通过PCR技术扩增目的基因。

(2)构建重组DNA分子(如图所示)最好选用__________________________限制酶，目的是可避免________________________________。

(3)普通大肠杆菌细胞中没有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因，将构建的重组DNA分子导入农杆菌中，将获得的农杆菌接种在含_______________的固体平板上培养得到含重组质粒的单菌落，再利用培养基震荡培养，可以得到用于转化的浸染液。

(4)剪取油葵的叶片放入浸染液中一段时间后，经过筛选获得转基因油菜细胞。最后经过__________________培育成转基因油葵植株。此种技术的原理是______________。

(5)研究发现，如果将该酶A的20位和24位氨基酸变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍。通过蛋白质工程对酶A进行改造，所需步骤有                 

a．蛋白质的结构设计                   b．蛋白质的结构和功能分析

c．蛋白质结构的定向改造               d．酶A基因的定向改造

e．将改造后的酶A基因导入受体细胞     f．将定向改造的酶A导入受体细胞

(6)经过种植转基因油葵发现，虽然转基因油葵种子中含油量上升，但是抗灰霉菌的能力丢失，其原因是_____________________。

【生物—现代生物科技专题】研究人员欲对拟芥蓝叶片中某种蛋白质进行改造，使其能结合空气中微量的黄色炸药挥发分子，导致叶片产生特定颜色变化，从而有助于检测公共场所是否存在爆炸物。请回答:

（1）研究人员从上述预期蛋白质的功能出发，设计蛋白质的         结构，然后推测相应目的基因的     序列，最终人工合成出目的基因。

（2）将目的基因插入到T1质粒的        上，通过农杆菌的        作用，导入拟芥蓝细胞。

（3）将上述芥兰细胞培养在人工配置的             上，给予适宜条件，诱导其产生           组织，最终形成转基因植株。

（4）在转基因植株附近放置           ，从个体生物学水平鉴定出目的基因成功表达的转基因植株，然后利用            技术高效快速繁殖该基因植株，以移植于公共场所。

(1)为了精确地获取图中的重组质粒，应用          切割质粒，用切割目的基因          。

(2)将基因表达载体导入大肠杆菌B之前，要将大肠杆菌B放入一定浓度的        溶液中处理，使之成为感受态的大肠杆菌。

(3)人的基因之所以能与大肠杆菌的质粒进行重组并发挥其功能，是因为二者都是            人的生长激素基因能在细菌体内成功表达是因为                         。

  (4)将得到的大肠杆菌B涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上能够生长，说明该菌已导入了                                 ，反之则没有导入。

(5)上述方法制备人的生长激素，运用的现代生物技术是                。

基因工程又称为DNA重组技术，回答相关问题：

（1）限制酶能识别双链DNA分子的________并切割，形成黏性末端或________；它存在于原核生物中的主要作用是________。

（2）从基因组文库获取目的基因的数目比从cDNA文库中获取的要多，原因是________。

（3）PCR技术可扩增目的基因，运用的原理是________，其参与的组分有DNA模板、4种脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶、分别与两条模板相结合的两种________。

（4）基因表达载体中的标记基因的作用是________。

（5）蛋白质工程之所以称为后基因工程，是因为要实现对新蛋白质的设计改造，必须要通过________或基因合成来实现。