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            • 1． 如图所示，质粒PBR322上含有青霉素抗性基因（XR）和四环素抗性基因（YR）．其中，XR内部含有限制酶KasI识别序列，YR内部含有限制酶FseI、HpaII、
              NaeI、NgoMIV识别序列，且这些识别序列在整个质粒上均仅有一处，目的基因内部不存在这些识别序列．
              （1）质粒PBR322的本质是 .FseI、HpaII、NaeI、NgoMIV中限制酶的作用特点是 
              （2）NaeI酶切目的基因和质粒，加入DNA连接酶连接后，进行大肠杆菌受体细胞导入操作．之后，受体细胞的类型包含 （多选）
              A．抗青霉素、抗四环素         B．抗青霉素、不抗四环素
              C．不抗青霉素、抗四环素        D．不抗青霉素、不抗四环素
              （3）若用KasI和FseI联合酶切上述重组质粒，则可能产生的酶切片段数 ．
              A.2             B．3            C．4              D．5
              （4）动物基因工程通常以受精卵作为受体细胞的根本原因是 ．
              A．受精卵能使目的基因高效表达B．受精卵可发育成动物个体
              C．受精卵基因组更易接受DNA的插入D．受精卵尺寸较大，便于DNA导入操作
              （5）若目的基因模板链中的TGA序列对应1个密码子，翻译时识别该密码子的tRNA上相应的碱基序列是 ．通过筛选出的受体细胞内，目的基因能成功表达的原因是 ．
              难度：中等
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            • 2． 普通番茄细胞中含有多聚半乳糖醛酸酶基因，控制细胞产生多聚半乳糖醛酸酶，该酶能破坏细胞壁，使番茄软化，不耐贮藏．科学家将抗多聚半乳糖醛酸酶基因导入番茄细胞，培育出了抗软化、保鲜时间长的转基因番茄．如图为操作流程图，据图回答问题．

              （1）实验中的目的基因是 
              （2）构建基因表达载体时必需的工具酶有 
              （3）图中步骤①→②使用的生物技术是 ．这种技术可保留番茄植株抗软化、保鲜时间长的优良性状，其原因是 
              （4）根据图中，转基因番茄细胞中的信息传递过程，分析转基因番茄抗软化的原因 
              （5）若将得到的二倍体转基因番茄植株自交，F1中抗软化与不抗软化的植株数量比为3：1，则可推测目的基因整合到了 
              A．一对同源染色体的一条上         B．一对同源染色体的两条上
              C．两条非同源染色体上             D．一对同源染色体的非姐妹染色体上．
              难度：中等
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            • 3． GDNF是一种神经营养因子．对损伤的神经细胞具有营养和保护作用．研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图1所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究．请回答：

              （1）完成图中A过程必需的工具是 ；该基因治疗的受体细胞为  ．
              （2）若要构建含GDNF基因的表达载体，则需选择图21中的 限制酶进行酶切．
              （3）限制酶XhoI和限制酶HpaI的识别序列及切割位点分别是﹣C↓AATTG﹣和﹣G↓AATTC﹣．如图2表示四种质粒，其中，箭头所指部位为酶的识别位点，质粒的阴影部分表示标记基因．适于作为图示GDNF基因运载体的是 ．

              （4）下列有关限制性核酸内切酶和质粒运载体的描述，错误的是 （多选）．
              A．限制性核酸内切酶能识别DNA、切割DNA任一序列
              B．限制性核酸内切酶的作用部位与RNA聚合酶的相同
              C．使用质粒运载体是为了避免目的基因被分解
              D．质粒运载体可能是从细菌或者病毒的DNA改造的
              （5）经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接（如图1所示）．为鉴定这3种连接方式，选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，若是正向连接的重组载体，其产生的酶切片段数为 个，反向连接的重组载体产生片段有 （多选）．
              1100bp  ②200bp  ③600bp   ④700bp  ⑤6000bp  ⑥6500bp．
              难度：中等
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            • 4． 基因工程操作步骤中，需要从受体细胞群中筛选出已获得目的基因的细胞，如图中①﹣③示一种筛选方法的过程．pBR322质粒含有两个抗性基因，分别是Ampr（氨苄青霉素）抗性基因和Tetr（四环素）抗性基因，其中在Tetr抗性基因上有下列目的基因的插入位点（插入将导致Tetr抗性基因功能性失活），请回答：

              （1）如图中①过程所需的酶除DNA连接酶以外，需要的限制酶是 ．
              （2）经过①过程，pBR322质粒可能出现的两种结果：A1是 A2是 
              （3）经过导入过程，B（受体细菌）可能出现结果是 （多选）
              A．导入未成功的细菌                   B．含A1的细菌
              C．含A2的细菌                        D．含A1和A2的细菌
              （4）②过程表示用含四环素（使细胞停止生长，但不致死）和环丝氨酸（使生长的细胞致死）的培养基中培养细菌甲，则培养结果C表示在培养基中可能存活的细菌包括 ．
              （5）若要进一步筛选出符合要求的受体细胞D，则③过程需要做的处理是（请参照过程②的方法）
              难度：中等
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            • 5． 苏云金杆菌（Bt）能产生具有杀虫能力的毒素蛋白．下图（一）是转Bt毒素蛋白基因植物的重组DNA形成过程示意图；下图（二）是毒素蛋白基因进入植物细胞后发生的二种生物大分子合成的过程，据图回答下列问题．
              （1）将图（一）①的DNA用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后，反应管中有 种DNA片段．过程②需要用到 酶．
              （2）假设图（一）中质粒原来BamHⅠ识别位点的碱基序列变为了另一种限制酶BclⅠ的碱基序列，现用BclⅠ和HindⅢ切割质粒，则该图（一）中①的DNA右侧还能选择BamHⅠ进行切割，并能获得所需重组质粒吗？ ，请说明理由 ．
              （3）若上述假设成立，并成功形成重组质粒，则重组质粒 
              A．既能被BamHⅠ也能被HindⅢ切开       B．能被BamHⅠ但不能被HindⅢ切开
              C．既不能被BamHⅠ也不能被HindⅢ切开   D．能被HindⅢ但不能被BamHⅠ切开
              （4）图（二）中α链是 ．不同组织细胞的相同DNA进行过程③时启用的起始点 （在“都相同”、“都不同”、“不完全相同”中选择），其原因是 
              难度：中等
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            • 6． 图1中①～③分别表示人体细胞中发生的3种生物大分子的合成过程．请回答下列问题．
              （1）细胞中过程②发生的主要场所是 
              （2）已知过程②的α链中鸟嘌呤与尿嘧啶之和占碱基总数的54%，α链及其模板链对应区段的碱基中鸟嘌呤分别占29%、19%，则与α链对应的DNA区段中腺嘌呤所占的碱基比例为 

              （3）由于基因中一个碱基对发生替换，而导致过程③合成的肽链中第8位氨基酸由异亮氨酸（密码子有AUU、AUC、AUA）变成苏氨酸（密码子有ACU、ACC、ACA、ACG），则该基因的这个碱基对替换情况是 
              （4）在人体内成熟红细胞、浆细胞、记忆细胞、效应T细胞中，能发生过程①②③的细胞是 
              （5）人体不同组织细胞的相同DNA进行过程②时启用的起始点 　 （填“都相同”“都不同”或“不完全相同”），其原因是 
              （6）图2为某病毒的遗传物质，上有两个限制酶酶切位点（标为P和Q），用相关酶完全切割后得到的每个DNA片段的长度如表格所示．下列说法错误的是 （多选）
              切割位置限制酶得到的每个DNA片段的长度
              QEcoRⅠ3，7
              PBamHⅠ8，2
              A．该病毒的遗传物质是DNA或RNA
              B．该病毒的中心法则是DNA→RNA→蛋白质
              C．若用EcoRⅠ和BamHⅠ完全切割该病毒DNA，新形成了8个游离的磷酸基团
              D．若用EcoRⅠ和BamHⅠ完全切割该病毒DNA，得到的各种长度的DNA片段有3、5、2．
              难度：中等
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            • 7． 下列是在生产实践中培育相应动植物的过程，请回答：
              （1）下面是培育转基因低乳糖奶牛的流程图．
              乳糖分解酶基因​成纤维细胞→转基因胚胎受体母牛转基因低乳糖奶牛
              乳糖分解酶基因是具有 的DNA片段，将其导入成纤维细胞中常用的方法是 ；转基因成功之后，通常还需要通过核移植技术将成纤维细胞的细胞核移入到 细胞中，才能培育出转基因牛胚胎，原因是 ．应选择 时期的胚胎移植到受体母牛体内，受体母牛需要经过 处理才适合进行胚胎移植．
              （2）为保持君子兰亲本的优良性状，科研人员取君子兰幼叶培养出愈伤组织，然后再从愈伤组织分化形成小植株，该过程中君子兰的生殖方式是 ．这种技术称为 ，该技术的实际应用还有 方面（答出一点即可）．
              难度：中等
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            • 8． 回答利用农杆菌转化法培育转基因植物的相关问题：

              （1）培育转基因植物过程的核心步骤是构建基因表达载体，其目的是使目的基因在受体细胞中 ， 并且可以通过复制遗传给下一代，同时，使目的基因表达和发挥作用．
              （2）构建基因表达载体时，可利用DNA连接酶连接被限制酶切开的 键．
              （3）组成基因表达载体的单体是 ．基因表达载体中的启动子是 识别和结合的部位，这种结合完成后才能驱动目的基因通过 （填过程）合成mRNA．
              （4）用两种限制酶XbaI和SacI（两种酶切出的黏性末端不同）切割某DNA，获得含目的基因的片段．若利用该片段构建基因表达载体，应选用下图中的何种Ti质粒？ 
              （5）将受体细胞培养成植株需要应用 技术，该技术的理论依据是
              难度：中等
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            • 9． 随着生物科学技术的发展，动物、植物乃至人类自身的生殖方式变得越来越多样化．既解决了一些社会的需求，也带来了一些社会的忧虑．请根据下列各种情况，回答有关问题：
              （1）试管婴儿技术：解决了部分夫妻不育的难题或生育健康后代的要求．这种技术和母亲正常怀孕生产过程的相同之处是都是以 为发育起点，不同之处在于试管婴儿是在体外进行受精后，在试管中进行胚胎培养；最后选取健康的胚胎进行 ，保证生出健康的孩子．
              （2）胚胎分割技术：可解决良种动物快速大量繁殖的问题；对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要注意  ， 否则将影响分割后的胚胎的恢复和进一步发育，如需做性别鉴定，还需从 细胞取样做DNA分析．
              （3）植物体细胞杂交技术：可以用来培育一些种间亲缘关系较近的杂交种，如白菜﹣甘蓝，实质上是利用了和 两大关键技术来实现．
              （4）利用基因工程培育转基因植物：如将富含赖氨酸的蛋白质编码基因导入玉米细胞中，可培育转基因高赖氨酸玉米．选用的表达载体可以是农杆菌的Ti质粒，是因为该质粒的T﹣DNA能 ；除农杆菌转化法外，还有基因枪法、 法等．
              难度：中等
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            • 10． 下列是生物学技术制备抗体的两个途径模式简图．

              （1）过程①和②得到的Y细胞称为 ．得到的单克隆抗体最主要的优点是 ．
              （2）抗体1与抗体2的氨基酸排列顺序相同，两者的空间结构是否相同？  ． 为什么？ 
              （3）在基因表达载体中，启动子的作用是 识别和结合的部位，驱动V1基因的 
              （4）质粒上的标记基因的作用是 ．
              （5）过程④要用到的主要酶是
              难度：中等
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