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          共50条信息

            • 1．
              基因工程技术包括一系列的分子生物学操作步骤．请回答下列问题：
              （1）基因工程操作的核心步骤是 ______ ．
              （2）cDNA文库的构建方法为 ______ ．
              （3）限制酶、DNA连接酶和 ______ 是基因工程的基本操作工具．其中限制酶的特点是 ______ ．
              （4）Mullis教授因发明PCR技术获1993年诺贝尔奖，PCR技术中需要的酶是 ______ ，若PCR进行30轮循环，理论上可获得 ______ 个基因片段．
              （5）将目的基因导入动物受体细胞的方法是 ______ ．
              （6）周光宇教授提出的花粉管通道法为我国的转基因抗虫棉作出重要贡献．请写出分子水平检测抗虫棉基因是否表达的方法 ______ 及个体水平鉴定的方法 ______ ．
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            • 2．
              目前已成功利用基因工程技术培育出马铃薯新品种。请根据教材中知识回答下列问题：
              （1）马铃薯易患的多种疾病，可导致其产量下降。通过导入抗病基因，并使该基因表达，可以提高马铃薯产量，基因工程中使用最多的抗病基因是病毒外壳蛋白基因和 ______ 。
              （2）由于受体细胞不同以及将目的基因导入受体细胞的方法不同，因此基因表达载体的构建 ______ （填
              “完全相同”或“有所差别”）。
              （3）马铃薯是双子叶植物，常用 ______ 法将目的基因导入马铃薯体细胞中。将病毒外壳蛋白基因转入普通马铃薯植株细胞内，并成功表达的过程，在基因工程中称为 ______ 。
              （4）科学家还培育出了抗除草剂转基因马铃薯，其设计思路是，修饰除草剂作用的靶蛋白，使其对除草剂， ______ （填“敏感”或“不敏感”）或使靶蛋白过量表达植物吸收除草剂后仍能 ______ 。
              （5）将目的基因导入受体细胞后，还需对转基因植物进行目的基因的检测与鉴定，一般要进行 ______ 水平和个体水平的鉴定。
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            • 3．
              阅读以下资料，回答问题：
              多酚氧化酶是引起苹果果肉褐变的主要酶类。研究人员通过转基因技术，将相关目的基因导入苹果细胞内，该目的基因转录的产物RNA能与苹果细胞内源mRNA序列特异性结合，从而减少多酚氧化酶基因的表达，延缓褐变。
              （1）构建基因表达载体需用同种的 ______ 酶对含有目的基因的DNA和运载体进行酶切；基因表达载体包含目的基因、启动子、终止子和 ______ 等；将基因表达载体导入苹果细胞，最常用的方法为 ______ 。
              （2）要将转基因苹果细胞培育成幼苗，常用的细胞工程技术是 ______ ，该技术的原理是 ______ ，使用的培养基中除了含有营养物质外，还必须含有一定比例的 ______ 等植物激素。
              （3）若在个体生物学水平上鉴定转基因苹果是否培育成功，则鉴定的实验思路是 ______ 。
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            • 4．
              甲型流感病毒为RNA病毒，易引起流感大规模流行。我国科学家在2017年发明了一种制备该病毒活疫苗的新方法，主要环节如下。
              （1）改造病毒的部分基因，使其失去在正常宿主细胞内的增殖能力。以病毒RNA为模板，逆转录成对应DNA后，利用 ______ 技术扩增，并将其中某些基因（不包括表面抗原基因）内个别编码氨基酸的序列替换成编码终止密码子的序列。与改造前的基因相比，改造后的基因表达时不能合成完整长度的 ______ ，因此不能产生子代病毒。将该改造基因、表面抗原等其他基因分别构建重组质粒，并保存。
              （2）构建适合改造病毒增殖的转基因宿主细胞。设计合成一种特殊tRNA的基因，其产物的反密码子能与（1）中的终止密码子配对结合，并可携带一个非天然氨基酸（Uaa）。将该基因与 ______ 连接后导入宿主细胞。提取宿主细胞的 ______ 进行分子杂交鉴定，筛选获得成功表达上述tRNA的转基因宿主细胞。
              （3）利用转基因宿主细胞制备疫苗。将（1）中的重组质粒导入（2）中的转基因宿主细胞，并在补加 ______ 的培养基中进行培养，则该宿主细胞能利用上述特殊tRNA，翻译出改造病毒基因的完整蛋白，产生大量子代病毒，用于制备疫苗。
              特殊tRNA基因转录时，识别其启动子的酶是 ______ （单选）。
              A．病毒的DNA聚合酶  B．宿主的DNA聚合酶
              C．病毒的RNA聚合酶  D．宿主的RNA聚合酶
              （4）上述子代病毒不能在正常宿主细胞中增殖，没有致病性，因此不经灭活或减毒即可制成疫苗。与不具侵染性的流感病毒灭活疫苗相比，该病毒活疫苗的优势之一是可引起 ______ 免疫，增强免疫保护效果。
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            • 5．
              噬菌体抗体库技术是指将人的全部抗体基因插入噬菌体的基因组中，然后让该噬菌体感染大肠杆菌，最终使抗体以复合蛋白质的形式表达于噬菌体的表面，形成含有全套抗体谱的噬菌体抗体库，请回答下列问题：
              （1）人体内的抗体是在 ______ 中合成后，以胞吐的方式分泌到内环境中的．
              （2）若要获取人的抗体基因，可以从细胞中提取相应的RNA，通过逆转录过程获取 ______ 片段，再合成目的基因，采用PCR技术扩增目的基因的过程中，需要的物质除模板链、四种肤氧核苷酸外，还需要 ______ ．
              （3）构建重组DNA分子的目的是 ______ ．在噬菌体抗体库的构建过程中，是否需要利用CaCl2处理大肠杆菌以制备感受态细胞？请写出原因： ______ ．
              （4）检测大肠杆菌转录出的相应RNA时应采用技术，即从原核细胞中提取RNA，以 ______ 为探针，与RNA杂交．该技术的原理是 ______ ．
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            • 6．
              目前普遍种植的玉米具有较强的耐旱性，若从玉米细胞中提取耐旱基因转移到苜蓿细胞中，便可提高苜蓿的耐旱性。
              （1）理论上，构建的基因组文库中含有生物的 ______ 基因。苜蓿是否获得耐旱性需经过一系列的检测与鉴定，首先应采用 ______ 技术检测苜蓿细胞的 DNA上是否插入了耐旱基因；最后还要在实验田中鉴定苜蓿植株的 ______ 。
              （2）将提取到的耐旱基因导入农杆菌，再利用 ______ 法将其导入到苜蓿的体细胞中，然后利用 ______ 技术获得苜蓿的再生植株。获得苜蓿再生植株的实验过程中需要进行无菌操作，其主要原因是 ______ 。
              （3）获得苜蓿再生植株需分别配制诱导丛芽和生根的培养基，这两类培养基的最大区别是 ______ 。
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            • 7．
              回答下列问题：
              （1）博耶（H．Boyer）和科恩（s．Cohen）将非洲爪蟾核糖体蛋白基因与质粒重组后导入大肠杆菌细胞中进行了表达。该研究除证明了质粒可以作为载体外，还证明了 ______ （答出两点即可）。
              （2）体外重组的质粒可通过Ca2+参与的方法导入大肠杆菌细胞；而体外重组的噬菌体DNA通常需与组装成完整噬菌体后，才能通过侵染的方法将重组的噬菌体DNA导入宿主细胞。在细菌、心肌细胞、叶肉细胞中，可作为重组噬菌体宿主细胞的是 ______ 。
              （3）真核生物基因（目的基因）在大肠杆菌细胞内表达时，表达出的蛋白质可能会被降解，为防止蛋白质被降解，在实验中应选用 ______ 的大肠杆菌作为受体细胞，在蛋白质纯化的过程中应添加 ______ 的抑制剂。
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            • 8．
              21三体综合征是一种常见的染色体病，通过产前诊断等手段可有效预防该遗传病的产生。常用的方法有：
              （1）唐氏筛查：抽取孕妇血液化验，检测血清中的甲型胎儿蛋白、绒毛膜促性腺激素等指标，然后进一步检查鉴定。检测这些物质常用 ______ 技术，以细胞工程技术生产的纯度高的 ______ 为试剂进行检测，该试剂最主要的优点在于它的 ______ 。
              （2）羊水检查：胎儿的某些细胞会脱落在羊水中，通过羊水穿刺，可以得到胎儿的 ______ 细胞。将这些细胞通过技术以扩大细胞的数量，对细胞中的染色体进行核型分析，了解胎儿细胞染色体的结构和数目是否正常。患者比正常人多了一条21号染色体，其形成原因是 ______ 。
              （3）无创基因检测：在孕妇的血液中存在胎儿游离DNA片段，可以对21号染色体上的特有基因DSCR3和非21号染色体上的基因GAPDH（做参照）进行实时荧光定量PCR扩增，以测定DSCR3基因和GAPDH基因的含量，计算2种基因剂量的比值如表：
              样品数 DSCR3/GAPDH
              正常人 80 0.884±0.420
              21三体胎儿 5 1.867±0.054
              21三体患者 7 1.810±0.169
              要利用胎儿游离的DNA片段扩增出相应的基因，关键是 ______ 的设计。据表格分析，正常人与21三体患者基因的差异主要是 ______ 。
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            • 9．
              为研究肝癌致病机理，科研工作者利用图所示的差异杂交法和基因工程获取相关癌基因以作进一步研究。请据图回答问题：

              （1）图1中，A过程需要用 ______ 酶，D过程需要回收 ______ （填“未杂交”或“杂交分子”）的含32P的cDNA单链，继而通过人工合成，获得 ______ ，并用其构建基因文库。
              （2）从图1构建的基因文库中获取的目的基因，一般还需进行人工改造后才能用于基因表达载体的构建，改造内容除了在基因两端添加限制酶的识别序列外，还需添加 ______ ，以便其随载体导入到受体细胞后，能正常调控表达过程。
              （3）上图2为改造后的目的基因。图3为两种质粒，其中Ampr为氨苄青霉素抗性基因，Tetr为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，其表达产物可使底物X-Gal呈蓝色。EcoRⅠ（0.7Kb）、NotⅠ（1.2Kb）等为限制酶及其切割位点与复制原点之间的距离（1kb=1000个碱基对）。
              ①图3中能作为载体的最理想的质粒是 ______ （填“X”或“Y”），用选定的质粒与图2的目的基因构建基因表达载体时，应选用的限制酶是 ______ 。为筛选出成功导入目的基因的受体细胞，培养基中应适量添加 ______ 。
              ②若用EcoRⅠ完全酶切上述①中获得的重组质粒，并进行电泳观察，可出现四种长度不同的片段，其长度分别为1.7kb、5.3kb、 ______ 。
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            • 10．
              人参是珍贵的药用植物，研究人员运用转基因技术构建乙肝病毒表面抗原（HBsAg）的人参细胞表达系统，为珍贵药用植物与疫苗联合应用开辟了新思路，其构建过裎如图所示，图中SmaⅠ、SstⅠ、EcoRV为限制酶。请回答相关问题：

              （1）②的构建过程除限制酶外还需要 ______ 酶；想要从②中重新获得HBsAg基因，所用的限制酶不能是EcoRV或SmaⅠ，原因是 ______ 。
              （2）将重组质粒转入农杆菌常用 ______ 处理細胞；要使目的基因成功整合到人参细胞的染色体上，该过程所采用的质粒应含有 ______ 。
              （3）分析图可知，②中应含有的标记基因是 ______ ；过程⑤的目的是 ______ 。
              （4）该疫苗进入机体后可刺激机体产生能与乙肝病毒特异性结合的 ______ ，同时还能产生 ______ 使机体长期对乙肝病毒具有免疫力。
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