[生物——选修3：现代生物技术专题]

  （1）若甲细胞的膜蛋白用红色荧光染料标记，乙细胞的膜蛋白用绿色荧光染料标记，结果丁细胞两种颜色荧光均匀分布，说明了               。

  （2）若上图表示植物体细胞杂交的部分过程，欲将丁细胞培育成植株，可选用          技术，这一技术的两个关键步骤是              。丁细胞经脱分化可产生胚状体，胚状体与愈伤组织在结构上的主要区别在于愈伤组织的细胞排列疏松无规则，是一种高度液泡化的薄壁细胞，胚状体与

      发育形成的胚有类似的结构，即具有胚芽、胚轴和胚根。

  （3）若上图表示制备单克隆抗体的部分过程，甲细胞为小鼠的骨髓瘤细胞，则乙细胞为            。在分离乙细胞之前，应对小鼠进行的处理是         。过程①区别于植物细胞常用的诱导剂是            ，细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有                                ，体系中出现多种类型细胞的原因是                                   。过程②可利用特定的选择性培养基进行筛选，筛选得到的丁细胞还需进行               和抗体检测，经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。

“生物导弹”可用于杀死人类某些癌细胞。制备“生物导弹”是单克隆抗体的重要应用之一，其过程如下图所示：

（1）在①-⑤批量生产A蛋白抗原的过程中，要快速获得大量的Ａ基因可采用       技术，在该技术中，解旋的方法是       ；过程③所用的方法是          ；④过程一般选择发育良好的                   ，移植到受体牛的子宫中。

（2）在⑥-⑨批量生产生物导弹的过程中，⑦过程所用的“脾脏中的细胞”为          。

⑦过程区别于植物体细胞杂交技术所特有的诱导因素是           ，要得到所需的杂交瘤细胞要经过   次筛选，最终筛选出的杂交瘤细胞的特点是                  。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

马铃薯是种植广泛的农作物，病毒侵染后导致产量大幅下降，培育脱毒的马铃薯品种是提高产量的有效方法。请分析并回答。

（1）马铃薯茎尖病毒极少甚至无病毒，因此可将马铃薯茎尖接种在培养基中，经过人工培养获得脱毒苗。培养基中添加________（填激素名称），诱导离体细胞经过________和再分化完成组织培养过程，从而形成脱毒苗。为监控脱毒苗的质量，可采用________的方法检测病毒的蛋白质。

（2）为了获得脱毒的番茄马铃薯，研究人员研究了离体的茎尖大小对幼苗的成苗率和脱毒率的影响，实验结果如图。

实验结果表明，茎尖越小，________，________，因此马铃薯脱毒培养中离体茎尖的适宜大小为________mm。

（3）取番茄、马铃薯的0.27mm茎尖处的组织细胞进行去壁处理得到________，然后再利用________技术和植物组织培养技术最终可以得到脱毒的番茄马铃薯植株。

如图为细胞融合的简略过程，请据图回答：

( 1)若A、B是植物细胞，在细胞融合之前已用___________________处理，除去_____________；A、B到细胞C的过程中，常用的物理方法是__________________________。融合完成的标志是_______________.

(2)若A、B是植物细胞，则形成的D细胞还应用______________技术把D培养成植株。

(3)若A、B是动物细胞，一般用___________________（酶）使其分散开来，A、B到C的过程中，常用的不同于植物细胞的手段是____________________，所形成的D称为____________________。

(4)若该过程是制备单克隆抗体，A为小鼠B淋巴细胞，那么，在获得此细胞之前，小鼠已被注射了___________，注射后小鼠身体产生了相应的____________生成了___________。图中B为_________________。

(5)若该过程仍是制备单克隆抗体，在A、B到C的过程中，所形成的C有______种，（只考虑细胞两两融合）用来培养的D的细胞应该是_____________，它有什么特点？________________________________________________________________，获得D后，常用的培养方法是______________和________________。

下图所示为用两栖动物的卵所做的实验图解，据图回答下列问题：

  （1）蝌蚪肠上皮细胞核中含有青蛙发育所需的                          ，重新组合的细胞相当于蛙的                 细胞，经过细胞分裂和             形成组织和器官。本实验结果说明                       具有全能性。

  （2）图中A过程采用的技术手段称作              技术。如果用生物技术使番茄和马铃薯的体细胞融合，首先要获得             ，其方法是                ，然后诱导             。要将其融合形成的细胞培养成植株，要用          技术。从理论上讲用融合后的细胞培育出的“番茄—马铃薯”植株是          （可育、不可育）。

科研人员利用野生型二倍体马铃薯（2n=24）和抗青枯病的二倍体茄子（2n=24）进行体细胞杂交，培育抗青枯病马铃薯。

（1）自然界中马铃薯和茄子间存在___________，难以通过有性生殖产生后代。

（2）科研人员从PCR鉴定为阳性的杂种植株中选出杂种植株B，用流式细胞仪进一步测定二倍体马铃薯、二倍体茄子和杂种植株B的DNA相对含量结果如下图。

依据上述结果预测，马铃薯—茄子四倍体融合细胞的DNA相对含量约为___________。据图中结果推测，杂种植株B应为___________倍体，判断依据是______________________。

（3）取杂种植株B的根尖制成临时装片，进一步从染色体水平进行鉴定。在显微镜下找到有丝分裂_________期的细胞，观察并统计来自茄子和马铃薯的染色体数目，若________  _          __，则支持上述推测。

（4）为确定杂种植株是否符合育种要求，还需对其进行___________检测。

⑴图中①过程用到的酶是______，所形成的B叫做 ______。

⑵②过程常用______处理农杆菌，使之成为______细胞，利于完成转化过程．

⑶图中③过程需要用到的激素是______。

⑷在分子水平上，可采用______的方法来检测转基因草莓果实提取液中有无相应的抗原．

B、野生马铃薯品种的植株具有较强的抗病、抗虫、抗盐碱、抗寒能力，但块茎不能食用．俄、德、芬兰专家共同做实验研究，用野生马铃薯与马铃薯的体细胞进行杂交，培育出了生活能力强的杂交系马铃薯．

⑴专家在实验中，需用到的酶主要有______和______等。

⑵专家在实验中，用于诱导融合使用的化学试剂是______。

⑶对于农民，种植杂交系马铃薯除可获得较高的收成外，还有什么优点？(要求写出两点) ______。

基因工程和植物细胞工程技术在科研和生产实践中有广泛应用，请据图回答：

(1)①②过程采用最多的是农杆菌转化法，原因是农杆菌中Ti质粒上的________可转移到受体细胞并整合到受体细胞的_______上；检测目的基因是否导入受体细胞可用DNA分子杂交技术，要用__________作探针。

(2)图中③④过程须在无菌条件下进行，培养基中除加入营养物质外，还需添加________等物质，作用是____________________。

(3)若要获取转基因植物人工种子，需培养到________阶段，再进行人工种皮的包裹；如用植物细胞实现目的基因所表达的蛋白质类药物的工厂化生产，培养到_______阶段即可。

(4)若采用植物体细胞杂交技术获得新的植物体，细胞间杂交一般采用________作为诱导剂诱导细胞融合，与传统的有性杂交相比，其优是______。

花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病，野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株。流程如下图。

（1）过程①所需的酶是                       。

（2）过程②后，在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的             存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。

（3）原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压，其作用是              。原生质体经过             再生，进而分裂和脱分化形成愈伤组织。

（4）采用特异性引物对花椰菜和黑芥基因组DNA进行PCR扩增，得到两亲本的差异性条带，可用于杂种植株的鉴定。下图是用该引物对双亲及再生植株1—4进行PCR扩增的结果。据图判断，再生植株1—4中一定是杂种植株的有                    。

（5）对杂种植株进行                 接种实验，可筛选出具有高抗性的杂种植株。

絮凝性细菌分泌的具有絮凝活性的高分子化合物，能与石油污水中的悬浮颗粒和有机物等形成絮状沉淀，起到净化污水的作用。为进一步提高对石油污水的净化效果，将絮凝性细菌和石油降解菌融合，构建目的菌株。其流程图如下,据图回答：

（1）溶菌酶的作用是_________________________。

（2）PEG的作用是_________________________。

（3）经处理后，在再生培养基上，未融合的A、B难以生长。图中AB融合菌能生长和繁殖的原因是_______________________________。

（4）目的菌株的筛选：筛选既能分泌具有絮凝活性的化合物，又能在含有_________的培养基上生长的AB融合菌，选择效果最好的最为目的菌株。

（5）为探究目的菌株不同发酵时间发酵液的絮凝效果，将目的菌株进行发酵培养，定时取发酵液，加入石油污水中：同时设置________________为对照组。经搅拌、静置各3分钟后，分别测定上层水样的石油浓度COD值（COD值越高表示有机物污染程度越高）,计算石油去除率和COD去除率，结果如下图。

（6）目的菌的种群增长曲线是_____________型。在40～44小时，发酵液对石油污水的净化效果最好，其原因是_________________。