(选修三)毛角蛋白Ⅱ型中间丝(KIFⅡ)基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转KIFⅡ基因的高绒质绒山羊的简单流程如图。

(1)过程①中最常用的运载工具是　　　　,所需要的酶是限制酶和　　　　。

(2)在过程②中,用　　　　处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。在培养过程中,将成纤维细胞置于5% CO₂的气体环境中,CO₂的作用是　　　　　。

(3)在过程③中,用　　　　处理以获取更多的卵(母)细胞。成熟卵(母)细胞在核移植前需要进行　　　　处理。

(4)从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是　　　　。在胚胎移植前,通过　　　　技术可获得较多胚胎。

（选修一）从自然菌样筛选较理想的生产菌种的一般步骤是：采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定。

（1）不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。培养嗜盐菌的菌样应从　　　　　　　环境采集。

（2）富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件，使其在群落中的数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择　　　　　的培养基，并在　　　　　　　条件下培养。

（3）下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解，请分析接种的具体方法。 

获得图A效果的接种方法是　　　　　　　　，获得图B效果的接种方法是　　　　　　　　。

（4）配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行　　　　　，接种前要进行　　　　　，在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在　　　　　　　条件下进行。

生物技术实践与人们生产和生活密切相关。请回答下列有关问题：

(1)无菌技术主要通过消毒和灭菌来避免杂菌污染。常用的灭菌方法有灼烧灭菌、________灭菌和________灭菌。某实验小组欲从豆油污染的土壤中筛选出能高效降解脂肪的菌株，应将土壤样品稀释液接种于以________为唯一碳源的同体培养基上，从功能上讲，该培养基属于________培养基。进行微生物的计数时，运用活菌计数法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是________。

(2)提取天然胡萝卜素的方法主要有三种，一是从植物中提取，二是从养殖的岩藻中获得，三是________。工业生产上，用养殖的岩藻作为原料提取胡萝卜素时，________(填“需要”或“不需要”)将新鲜的岩藻干燥。

(3)胡萝卜素是________(填“挥发性”或“非挥发性”)物质。乙醚、四氯化碳和石油醚三种有机溶剂中，应选择石油醚来提取胡萝卜素，不选择乙醚的理由是________；不选择四氯化碳的理由是________。

农业生产上有一种广泛使用的除草剂在土壤中不易被降解，长期使用会污染土壤。为修复被污染的土壤，可按图示程序选育出能降解该除草剂的细菌。已知该除草剂(含氮有机物)在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明。

（1）微生物接种是微生物学研究中最常用的基本操作技术，该技术的核心是__________________，应该在_____________旁完成。图中B、C所示操作的目的是将聚集的菌种逐步______________________。

（2）在选育过程中，应将土壤浸出液接种于以__________________为唯一氮源的固体培养基上。为了筛选出高效的目的菌，可比较单菌落周围透明圈的大小。实验结果如右图显示的A～E五种菌株中，________是最理想菌株。

（3）若想对初步筛选得到的目的菌进行纯化并计数，可采用的接种方法是_____________________。对分离的细菌数目统计时，统计的菌落数目往往比活菌的实际数目________。

（4）操作过程中有三种材料或用具需要消毒或灭菌：①培养细菌用的培养基与培养皿；②操作者的双手；③玻棒、试管、烧瓶和吸管。其中需要灭菌的是________。(填序号)

生产实践中应用的菌种主要来土壤,从土壤中分离微生物的一般实验流程是：土壤収样—选择培养—梯度稀释—鉴別培养。请回答：

（1）欲从土壤中分离纤维素分解菌，最好选择在      环境中采集土样，所选择的培养基应以       作为唯一碳源。

（2）Taq耐热菌的发现和分离为基因工程的发展作出了突出贡献。分离Taq耐热菌所需要的特殊培养条件是             ，在生物休内进行DNA复制所必需而PCR技术中不需要的酶是             。

（3）下图是纯化微生物培养的效果图。请冋答：

①先配制好的培养基在接种前都要进行             灭菌，在整个微生物的分离和培养过程中，一定要注意在            条件下进行。

②获得图A效果的接种方法是            ,获得图B效果的接种方法是            。

（1）筛选产胡萝卜素的酵母菌R时，可选用           或平板划线法接种。采用平板划线法接种时需先灼烧接种环，其目的是                  。

（2）培养酵母菌R时，培养基中的蔗糖和硝酸盐可分别为酵母菌R生长提供         和          。

（3）纸层析法可用于鉴定所提取的胡萝卜素。鉴定过程中需用胡萝卜素标准品作为      。

尿素是一种重要的农业肥料，需经细菌的分解才能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，下列是从土壤中分离分解尿素细菌的有关问题，请分析回答：

（1）培养基的类型很多，但培养基中一般都含有水、氮源、        和无机盐。而从土壤中分离分解尿素细菌时提供的唯一氮源是         。

（2）通常培养基采用________________法灭菌，在制备固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板倒置，目的是___________________

（1）请写出白僵菌的代谢类型             。

（2）微生物培养技术可以从自然菌群中筛选较理想的生产菌种。一般步骤为：采集菌样→冨集培养→纯种培养→性能测定。培养的白僵菌的菌样最好从           中采集。

（3）用于分离白僵菌菌种的培养基应选用            培养基（液体、固体）。配置的白僵菌培养基一定含有水、无机盐及            和             。

（4）分离与培养过程中，培养基和接种工具都要进行              处理。

（5）白僵菌培养时常用的接种方法是                和                           。请对应你所填的空写出这两种接种方法对应的接种工具是               和                。

（1）酸菜制作过程中，起主要作用的微生物是___________。但是在发酵初期，很多杂菌会大量繁殖，其中导致泡菜水的表面长白膜的微生物是_____________。

（2）实验室可采用__________法进行菌种纯化，在对该菌种进行培养时，与常规培养基相比，还需要额外在培养基中添加_________________。

（3）为了保持所获得的菌种纯净，需要进行菌种的保藏。若采用临时保藏，需将菌种接种在___________上。放入4℃冰箱中可保藏3-6个月；若要长期保存，可将菌液与灭菌的_______ ___混匀，放在-20℃的冰箱中保存一年。

（4）在市场上购买的真空包装酸菜，在没有发生漏气状态下发生了“胀袋”现象，A同学认为是杂菌污染导致的，B同学怀疑是乳酸菌大量繁殖导致的，说出你支持谁的观点并说出理由。支持_______的观点，理由是______________。

b

（1）如上图所示，菌株 A 和 B混合培养几小时后，把大肠杆菌洗涤后涂布在基本培养基的固体平板上，发现长出了若干野生型菌落，对此实验现象可作出如下假设：

① 不同大肠杆菌间遗传物质发生重组。 

②                                   。

（2）为了探究上述假设 ① ，有人设计了一种 U 型管（如下图），中间用过滤器隔开，大肠杆菌不能通过，但培养液和营养物质可通过，实验如下。请补充相关实验内容：

实验步骤：

① 在U型管中加入                            ；

② U型管两端各加入菌株 A、菌株 B，培养几小时；         

③ 将U 型管两端的大肠杆菌各自取出洗涤后涂 布在         上，观察有无菌落。

实验结果：                                   。

实验结论: 菌株 A 与菌株 B之间遗传物质发生重组。

（3）现有1升水样，用无菌吸管吸取1mL转至盛有9mL无菌水的试管中，依次稀释至10³倍。各取0.1mL已稀释10³倍的水样分别接种到三个培养基上培养，记录的菌落数分别为31、34、37，则每升原水样中大肠杆菌数为            。该数据理论上比细菌实际数目     。

（4）该实验中需要灭菌的是                                 。（至少写3个）

(1)制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行________处理。

(2)要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，上述培养皿中培养基为________体培养基。

(3)在第2次及其后每次划线前需对接种环进行________，并且从上次划线________端开始。

(4)培养后发现，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是________或有氧条件抑制了这些细菌的生长。

(5)在固体培养基上形成的菌落中，无透明带菌落利用的氮源主要是________，有透明带菌落利用的氮源主要是________，据此可筛选出目的菌。