(1)步骤①核移植前为获得更多的卵母细胞，采用________处理使其超数排卵，从输卵管中冲出的卵子处于________时期，去除卵母细胞的________(结构)。

(2)培养细胞过程中，要置于CO₂培养箱中，其中CO₂的主要作用是________。

(3)图中ES细胞来自________时期的________细胞。步骤③中需要先利用PCR技术扩增正常基因片段，可以根据正常基因的________设计引物，PCR技术中使用的酶为________。为检测目的基因是否表达，采用的方法为________。

将双链DNA在中性盐溶液中加热，两条DNA单链分开，叫做DNA变性。变性后的DNA如果慢慢冷却，又能恢复成为双链DNA，叫做退火。

(1)低温条件下DNA不会变性，说明DNA有______________________特点，从结构上分析原因有：外侧__________________________________，内侧碱基对遵循____________________

(2)某DNA完全解旋成单链所需的温度明显高于其他DNA，其最可能的原因是___________________________________________________________________________。

(3)大量如图1中N元素标记的DNA在变性后的退火过程中会形成________种DNA，离心后如图2，则位于________链位置上。

(4)图1中α链中A和T的比例和为46%，则DNA分子中A和C的和所占比例为________，若此DNA由1000个碱基对组成，则其连续复制3次共需要消耗G______个，第3次复制需要消耗G_______个。

(1)过程①中，应提取_______________的基因组DNA作模板；同时根据________________基因的核苷酸序列合成引物，过程①中使用的工具酶为____________________

(2)进行过程③前，利用_______________处理大肠杆菌，使其成为感受态细胞。

(3)过程④中，应将大肠杆菌置于__________条件下诱导培养；然后提取大肠杆菌的____________进行检测，以鉴定目的基因是否成功表达，此方法称为___________

(1)如图表示目的基因在DNA分子中的相对位置及利用PCR技术(多聚酶链式反应)扩增目的基因过程中第一轮循环产生的产物：

①PCR技术的原理是利用了________。

②与体内DNA复制相比较，PCR反应要在一定的缓冲溶液中才能进行，并且要严格控制________条件。

③PCR中加入的引物有________种。

④请绘出以3链为模板经PCR扩增的产物________。

(2)用两种识别序列不同的限制酶M和N切割(识别序列和切割位点如图)某种质粒后，通过凝腔电汰分离分析得下表：

则：①在该质粒中，N酶的切割位点有________个。

②若将M酶与N酶切出的DNA末端用________酶相互连接后，对于该连接部位序列是否仍可以用M酶、N酶进行切割：________(填“都可以”、“都不可以”或“只有一种可以”)。

为增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连，导入油菜叶片细胞并获得了转基因油菜品种。

（1）研究人员依据基因的已知序列设计引物，采用             技术从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因，所含三种限制酶（ClaI、SacI、XbaI）的切点如图所示。则用      和        酶处理两个基因后，可得到     端与    端（填图中字母）相连的融合基因。

（2）将上述融合基因插入图所示Ti质粒的T-DNA中，构建     并导入农杆菌中。将获得的农杆菌接种在含     的固体平板上培养得到含融合基因的单菌落，再将其制备成用于转化的侵染液。

（3）剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞，进一步筛选后获得转基因油菜细胞，该细胞通过植物组织培养技术，可培育成转基因油菜植株。

（4）用     法可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达

应用生物工程技术获得人们需要的生物新品种或新产品。请据图回答下列问题：

（1）在培育转人生长激素基因牛过程中，②过程常用的方法是               ，  采用                  技术可以获得多头基因型相同的转基因牛。

（2） 转人生长激素基因牛可通过乳腺细胞分泌乳汁来生产人生长激素，在构建基因表达载体时，人生长激素基因的首端必须含有        。

A.人生长激素基因的启动子     B.牛生长激素基因的启动子

C.人乳腺蛋白基因的启动子     D.牛乳腺蛋白基因的启动子

启动子的作用是能够被____________________识别和结合，从而启动转录过程

（3）prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，Ⅲ代表的细胞具有                                                       的特点。

（4）在抗虫油菜培育过程中，应将抗虫基因基因转移到Ti质粒的              上；④过程最常采用的方法是                         ；⑤过程采用的技术是                    ；在分子水平上可采用                    方法来检测转基因抗虫油菜的抗虫基因是否成功表达。

（5）下面是获取目的基因的几种方法，其中需要模板的是_______。

① 从基因组文库中获取目的基因   ② 利用PCR技术扩增目的基因  

③ 构建cDNA文库               ④ 通过DNA合成仪利用化学方法人工合成目的基因     

A．①②    B．②③    C．①③     D．①④

据图回答：

（1） 获得A有两条途径：一是以A的mRNA为模板，在                酶的催化作用下，合成互补的单链DNA，然后在                    的作用下合成双链DNA，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的                序列，推测出相应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA的                     序列，再通过化学方法合成所需基因。

（2） 利用PCR技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有              、             、4种脱氧核糖核苷三磷酸和                  ，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成。

（3） 结构B的基本组成单位是                      ，由A和载体B拼接形成的C通常称为                       。

（4）在基因工程中，常用Ca²⁺处理D，其目的是                                   。

（1）甲和乙的细胞都属于_________细胞．从图中看，与丙细胞结构主要区别是甲和乙的细胞都有___________________________。

（2）酵母菌产生ATP的场所是_______________________________。

（3）甲细胞比乙细胞代谢速率快，从结构方面找出可能的原因是：____________（多选）

A．甲细胞线粒体多   B．甲细胞核糖体多   C．甲细胞核孔多   D．甲细胞核仁大

（4）从甲图结构上提取了某种物质，加入双缩脲试剂出现紫色；若加入斐林试剂并加热，出现砖红色沉淀，则说明该物质是______________。

如图是从酵母菌细胞内获取某植物需要的某种酶基因的流程，请回答下列问题：

​

(1)图中cDNA文库含有酵母菌的________基因，与基因组文库中的基因相比无________、_________。

(2)①过程提取的DNA需要用限制酶，该酶能够识别_____________________，并且使_____________________断开。

(3)为在短时间内大量获得目的基因，可用PCR方法扩增，该反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液(含 )、水、4种脱氧核苷酸、模板DNA、________和________。

(4)蛋白质工程也被称为第二代基因工程，其基本途径是从________出发，通过设计蛋白质结构和推测相应的氨基酸序列，进而确定相对应的________，据此获得基因，再经表达、纯化获得蛋白质。

（1）图中cDNA文库               基因组文库（填“大于”、“等于”或者“小于”）。

（2）①过程提取的DNA需要              的切割，B过程是                    。

（3）为了在短时间内获得大量目的基因，可用                技术扩增数量。

（4）将该目的基因导入某双子叶植物细胞，常采用的方法是                ，若要判断其能否在此植物体内稳定遗传可以用                技术进行检测。

（5）如果要想使该酶活性更强或具有更强的耐受性，需要对现有蛋白质进行改造，这要通过基因工程延伸——蛋白质工程。首先要设计预期的                 ，再推测应有的氨基酸序列，找到相对应的                     。