玉米是重要的粮食作物，经深加工可生产酒精、玉米胚芽油和果糖等。流程如下：

（2）玉米胚芽油不易挥发，宜选用___________法或____法从玉米胚芽中提取。

（3）玉米淀粉经酶解形成的葡萄糖可在葡萄糖异构酶的作用下转化成果糖。利用________技术可使葡萄糖异构酶重复利用，从而降低生产成本。

（4）利用PCR技术扩增葡萄糖异构酶基因时，需用耐高温的__________催化。PCR技术一般要经历三十次以上的循环，每次循环包括变性、_______和_______三步。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

基因工程在农业中的应用发展迅速，基因可导入农作物中，用于改良该农作物的性状。通过多重PCR技术可扩增并检测转基因农作物的外源基因成分。多重PCR是在一个PCR反应体系中加入多对引物，针对多个DNA模板或同一模板的不同区域，扩增多个目的基因的PCR技术。请回答：

（1）我国科学家将Bt毒蛋白基因、鱼的抗冻蛋白基因、控制果实成熟的基因导入农作物，可获得     、     、延熟的转基因作物。

（2）引物是根据      的一段核苷酸序列合成的，每种基因扩增需要一对引物的原因是                      。下表是A、B、C三种基因的引物，据表分析，引物特异性主要体现在                         。

  （3）PCR过程中温度从90℃降到55-60℃的目的是                  。

（4）检测人员通过多重PCR技术确定农作物中是否含有A、B、C三种转基因。将A、B、C三种基因和待测的农作物基因样品进行PCR，扩增后的产物再进行电泳，结果如图。据图分析：含有三种转基因的农作物是    ，判断依据是         。

  （5）与PCR技术相比，多重PCR技术的优势是

嗜热菌可以生活在98℃的高温环境中，研究发现其耐热性与基因H的表达产物有关。下图表示某研究小组利用大肠杆菌对H基因实行的克隆和表达过程，其中NdeⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ、SalⅠ四种限制酶的识别序列和酶切位点分别为CA^↓TATG、G^↓AATTC、A^↓AGCTT、G^↓TCGAC。请分析回答：

(1)图中的结构A是________，其主要作用是________。一个完整的基因表达载体组成，除了质粒1中所示结构以外，还应该含有________。

(2)用图中质粒1和H基因构建重组质粒，应选用________两种限制酶进行切割，影响限制酶处理效果的因素可能有________(多选)。

①反应温度 ②缓冲液pH ③限制酶的浓度 ④DNA样品的纯度

(3)实验中发现，重组质粒导入大肠杆菌后H基因的表达效率很低，但在含有质粒2(辅助性质粒)的细胞中，H基因可以高效表达。为了筛选出转入了两种质粒的受体菌，应在筛选平板培养基中添加________，整个实验过程应保持________操作。

(4)PCR反应中引物的设计非常关键，据图分析，扩增H基因时应选择的一对引物是________。

A.引物Ⅰ：···GGGAATTC···；引物Ⅱ：···CTCATATG···

B.引物Ⅰ：···GAATTCCC···；引物Ⅱ：···CATATGAG···

C.引物Ⅰ：···GGAAGCTT···；引物Ⅱ：···AAGCTTCC···

D.引物Ⅰ：···CTCATATG···；引物Ⅱ：···AAGCTTAAGCTT···

基因工程是在现代生物学、化学和工程学基础上建立和发展起来的，并有赖于微生物学理论和技术的发展，现在基因工程在动植物育种上有广泛而重要的应用。基因工程基本操作流程如下图，请据图分析回答：

（1）图中A最常用的是________。在基因工程中，第②步需要在________的催化作用下才能完成拼接过程。如果利用PCR技术扩增目的基因，需要加入的酶是________。

（2）研究中发现，番茄体内的蛋白酶抑制剂对害虫的消化酶有抑制作用，导致害虫无法消化食物而被杀死，人们成功地将番茄的蛋白酶抑制剂基因导人玉米体内，玉米获得了与番茄相似的抗虫性状，玉米这种变异的来源是________。

（3）科学家在某种植物中找到了抗枯萎病的基因，需要将该基因导入金茶花叶片细胞的染色体DNA上，培育出抗病的金茶花植株。在此基因工程操作过程中，如果需要检测目的基因是否在受体细胞中转录出相应的mRNA，需要利用________技术。如果需要

在个体生物学水平上检测该植物是否具备抗病性，需要做________实验。

（4）利用大肠杆菌可以生产出人的胰岛素，联系有关细胞器功能的知识，请回答为什么不能利用大肠杆菌生产人的糖蛋白?

[生物——选修3：现代生物科技专题]

下图为基因工程获得转基因抗虫棉的过程。据图回答下列问题：

(1)图中①②所示的PCR技术是       反应的缩写，其原理是       。

（2）过程①中，加热至94℃的目的是       。过程②中，引物与单链相应互补序列结合，然后在       酶的作用下进行延伸，如此重复循环多次，使目的基因的数量以       形式扩增。

（3）过程③常用农杆菌转化法，农杆菌中Ti质粒上的       可转移至受体细胞，并整合到受体细胞染色体DNA上。要检测目的基因是否转录出了mRNA分子，可采用       技术。

PCR是聚合酶链式反应的缩写，利用PCR技术可对目的基因进行扩增。请回答有关问题:

(1)PCR的原理是                     。

(2)PCR技术使DNA解链是通过           实现的，PCR技术中       提供能量。

(3)DNA解链后冷却的目的是让           与           相结合。

(4)当温度加热至70～75℃时，是 酶把单个脱氧核苷酸，通过 键连接到引物上。如此逐渐延伸形成互补链，进而使目的基因加倍。

(5)通过重复循环(2)、(3)、(4)过程，经过n次循环需要       个引物。 

【选修3—现代生物科技专题】

   2016年日本动物学家培育出转基因“绿光猴”，其培育过程为：将能编码绿色荧光蛋白基因嵌入长尾猴的卵子中，使其受精，所生下的小猴受到紫外线照射时就成了全身发绿的“绿光猴”。

请据此回答下列问题：

（1）如果对已有的荧光蛋白基因进行大量扩增，需要用________方法，该方法的原理是DNA复制，这项技术需要用到________酶，该酶需从________的末端开始催化子链的延伸。

（2）绿色荧光蛋白基因需要构建成________之后，用________方法将其导入到长尾猕猴的卵子中。

（3）受精卵在体外培育成________后再利用________技术将其导入到受体猕猴的子宫中继续发育，检测所出生的猕猴是否为“绿光猴”通常用________方法。

科学家运用基因工程技术将结核杆菌MPT64基因（能控制合成MPT64蛋白）成功导入胡萝卜细胞，最终表达出肺结核疫苗。请回答下列问题：

（1）为获取MPT64基因，可从结核杆菌的细胞中提取对应mRNA，在               的作用下合成双链cDNA片段，获得的cDNA片段与结核杆菌中该基因碱基序列             (填“相同”或“不同”)。

（2）通常采用           扩增MPT64基因，前提是要有一段已知MPT64基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成               ，在操作步骤中需要加热至90-95℃的目的是                   。

（3）根据农杆菌的特点，如果将MPT64基因插入到              上，通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入胡萝卜细胞。要确认MPT64基因是否在胡萝卜植株中表达，应检测胡萝卜植株中是否含有                。

（4）研究发现，如果将MPT64蛋白20位和24位的氨基酸改变为半胱氨酸，其保存时间将大大延长，科学家可以生产上述耐储存的MPT64蛋白的现代生物工程技术是                   。

(1)向小型猪转入外源基因时．其受体细胞通常是________ ，导入方法是________ .

(2)PCR技术扩增目的基因的过程是：目的基因DNA________变性后解旋为单链，降温后 ________与单链相应互补序列结合，然后在________酶的作用下进行延伸，如此重复循环多次，使目的基因的数量扩增.

(3)欲知基因工程成功与否，需要进行________水平的检测，有时还需进行 ________水平的鉴定.
(4)基因工程的“剪刀”是________，基因工程中使用的载体包括________、________  和________.