（1）图中②所示的生物技术的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，这是因为________。

（2）重组细胞培养成囊胚过程所用的培养液与植物组织的培养基在成分上的主要区别是前者必须含有________。重组细胞培养过程中所需要的基本条件包括充足的营养、________、________、气体环境。

（3）④所示的生物技术名称是________，若想得到大量健康的胰岛B细胞的胰岛素基因，可利用________技术。

（4）图示方法与一般的异体移植相比最大的优点是________。该种基因治疗所属类型为________。

（1） 由过程①获得的A为____________；过程①中需用到的酶有____________；过程①中，PCR扩增人凝血因子IX基因前需根据已知的一小段核苷酸序列合成出________。

（2） 利用A中的_________基因特性来筛选鉴定出含有人凝血因子IX基因的成纤维细胞。

（3） 进行胚胎移植时，代孕母羊对移入子宫的重组胚胎基本上不发生______________，这为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。

​

请根据上述材料回答下列问题：

（1）图中过程②常用的方法是                 ；过程③利用的生物技术是              ；在进行过程④前，利用          技术可以获得数目更多且基因型相同的绿色荧光小鼠。

（2）用于培育绿色荧光小鼠的基因表达载体的组成必须有启动子、        、        、         等部分。

（3）cDNA属于        基因文库，其构建方法是：用某种生物发育的某个时期的mRNA通过              产生cDNA片段，与           连接后储存在一个受体菌群中。

（4）PCR是一项利用DNA复制的原理在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。其基本过程是：加热至90～95℃使          →冷却至55～60℃使         结合到互补DNA链→加热至70～75℃使         从引物起始进行互补链的合成，如此反复进行。

请依材料所给出的信息分析回答下列问题：

（1）在基因工程操作程序中，                是基因工程的核心，为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的         和       之间。

（2）采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。该PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液（含Mg^2＋）、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、              和                 。

（3）据材料Ⅱ，在过程②中，将成纤维细胞置于5％CO₂的气体环境中，CO₂的作用是         。在过程③中，用           处理以获取更多的卵（母）细胞。成熟卵（母）细胞在核移植前需要进行          处理。

（4）从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是               。在胚胎移植前，通过             技术可获得较多胚胎。

(1)图中①～⑤所示的生物工程为________。该工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过对基因的________，对现有的基因进行改造，或制造出一种新的________，以满足人类生活的需求。

(2)图中序号④所示过程叫作________，该过程遵循的碱基互补配对原则不同于翻译过程的是________(请将模板碱基写在前)。

(3)若大量扩增目的基因，则用的是________(写出全称)技术，该过程需要的聚合酶的特点是________。

(4)若预期蛋白质欲通过乳腺生物反应器生产，则构建基因表达载体时，在基因的首端必须有________；且在图中⑨过程之前，要对精子进行筛选，保留含________性染色体的精子。

用农杆菌转化法可以获取转基因抗病植物，回答有关问题：

(1)若该抗病基因取自某种真菌的CDNA文库，转入植物细胞后，________(能、否)正常表达。若想得到大量的抗病基因，需用到________技术，中文全称为________，条件除了原料、能量、模板外还需要________、________。

(2)某培养基中的卡那霉素会抑制愈伤组织细胞的生长，欲利用该培养基筛选已导入抗病基因的植物细胞，应使基因表达载体中含有________基因，作为________基因。

(3)农杆菌是一种在________中生活的微生物，农杆菌转化法适用于________和________植物，其原因是该类植物受到损伤时，伤口的细胞会分泌大量的________。

(4)Ti质粒的T—DNA(可转移的DNA)可整合到植物细胞中________上，所以，构建基因表达载体时，将目的基因插入到________中。用到的工具酶有________。

(5)鉴定成功获得转基因植物的最简捷的方法是________。

(1)PCR技术的必要条件，除了模板、原料、ATP、酶以外，至少还需要三个条件，即：液体环境、适宜的________和酸碱度，前者由PCR仪自动调控，后者则靠________来维持。

（2）在对病毒核酸进行检测时，主要通过RT-PCR扩增其关键的基因序列，这时引物的设计就非常关键，根据下图分析，请你选择合适的引物____________。

（3）GDNF是一种神经营养因子。对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。用PCR技术扩增GDNF基因并构建含GDNF基因的表达载体（如图1所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。请回答：

①构建含GDNF基因的表达载体时，需选择图1中的               限制酶进行酶切。

②经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接（如图1所示）。为鉴定这3种连接方式，选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，结果如图2所示。图中第         泳道显示所鉴定的载体是正向连接的。

据图回答：

(1)获得A的一条途径是以A的mRNA为模板，在　　　　   酶的催化下，合 成互补的单链DNA，然后在　　　　的作用下合成双链DNA，从而获得所需基因。

(2)利用PCR技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有　　　　、模板、4种脱 氧核糖核苷三磷酸和　　　　，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成。

(3)由A和载体B拼接形成的C通常称为　　　　。

(4)在基因工程中，常用Ca²⁺处理D，其目的是　　　　           。

（1）短时间内大量扩增抗凝血酶Ⅲ蛋白基因经常采用                 技术。过程①是将抗凝血酶Ⅲ蛋白基因导入受精卵，该过程常用的方法是                 。            

（2）过程②包括             技术和               技术；为获得多只与该转基因奶牛遗传物质相同的牛犊，在过程②还可使用          技术。

（3）若要检测牛奶中是否含有抗凝血酶Ⅲ蛋白，可采用              技术。

（4）如果检测发现抗凝血酶Ⅲ蛋白基因被成功导入了受精卵，但却没有检测到抗凝血酶Ⅲ蛋白的存在，那应该考虑分别位于目的基因首端的          和末端的          没有设计好，应从这方面进一步改善。