(1)M13噬菌体的单链环状DNA复制开始时，首先需要通过转录过程合成一小段RNA，转录过程需要的原料是________。若Ml3噬菌体的单链环状DNA中各种碱基的含量为：a％A，b％G，c％T和d％C，则复制形成的双链环状DNA中，碱基A的含量为________。

(2)与实验一相比，实验二无M13双链环状DNA的原因是________，实验三能检测到M13双链环状DNA的原因是________。

(3)生物体内DNA复制过程中，子链延伸需要引物的原因是________，子链片段在________作用下连接起来。

(4)PCR技术通常需要长度为20～30个核苷酸的DNA片段作为引物，如果引物过短，则对扩增结果的影响是________。

⑴主要步骤：

①制备两种培养基：一种是＿＿＿＿培养基，另一种＿＿＿＿＿的培养基。分别分成两份，依次标上A，A^／的B，B^／，备用。

②分别向A、B培养基中接种＿＿＿＿＿＿。

③接种后，放在恒温箱中培养3～4天。

④分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌种，接种到A^／、B^／培养基中。

⑤接种后，把A^／、B^／培养基放入恒温箱中培养3～4天。

⑵回答问题：

在步骤①中，为保证无杂菌污染，实验中应采用的主要措施有＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

第④⑤两个步骤的目的是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

（2）用基因工程技术从经过分离、提纯的圆褐固氮菌中获取固氮基因，然后进行PCR扩增。下列表1和表2分别表示用PCR扩增固氮基因的反应体系及反应条件。

①从上表中可得出，PCR技术与DNA复制相比较，主要区别之一是                                                         。

     此外，从反应条件看，所使用的DNA聚合酶应具有__________的特点。每次循环都需要2种引物的主要原因是_______________           ________________。

②下图为第1轮循环产生的产物。请绘出以a链和b链为模板经PCR扩增的产物。

（1）催化①过程的酶是                ；核酸酶H的作用是                        。

（2）③过程也称为DNA的变性，此过程在温度高达90~95℃时才能完成，说明DNA分子具

有                    性。

（3）由图中信息分析可知，催化②⑤过程的酶都是                  ，两者在作用特性上的区别是                                   。

（4）如果RNA单链中有碱基100个，其中A占25%，U占15%，则通过该过程合成的一个双链DNA片段中有胞嘧啶              个。

回答下列问题：

（1）理论上，基因组文库含有生物的      基因；而cDNA文库中含有生物的      基因。

（2）若要从植物甲中获得耐旱基因，可首先建立该植物的基因组文库，再从中筛选出所需的耐旱基因;若利用PCR技术获得耐旱基因,需要在反应体系中添加的有机物质有         、        、4种脱氧核苷酸三磷酸和               ，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成。

（3）将耐旱基因导入农杆菌，常用Ca^2＋处理农杆菌，其目的是                       。并通过               法将其导入植物      的体细胞中，经过一系列的过程得到再生植株。要确认该耐旱基因是否在再生植株中正确表达，应检测此再生植株中该基因的       ，如果检测结果呈阳性，再在田间试验中检测植株的       是否得到提高。

（4）假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交，子代中耐旱与不耐旱植株的数量比为3∶1时，则可推测该耐旱基因整合到了             （填“同源染色体的一条上”或“同源染色体的两条上”）。

请回答：

（1）图中重组细胞的细胞核来自            细胞，早期胚胎移入受体子宫后继续发育，经桑椹胚、囊胚和             胚最终发育为克隆猪。

（2）在PCR过程中可检测出cDNA中Bcl-2 cDNA的分子数，进而计算总mRNA中Bcl-2 mRNA的分子数，从而反映出Bcl-2基因的转录水平。

①图中X表示                 过程。

②从基因组数据库中查询Bcl-2 mRNA的核苷酸序列，以便根据这一序列设计合成                用于PCR扩增，PCR扩增过程第一轮循环的模板是                    。

(1)PCR技术已经走入人们的生活，例如亲子鉴定、刑侦破案等都用到。PCR技术的基础知识是DNA复制，辨认细胞内DNA复制的示意图，请指出1、2、3、4代表的物质：

    1.______________2._______________

    3.______________4._______________

(2) 比较PCR技术和DNA复制过程， 完成表格：

2,4-D作为除草剂在农田中大量使用,研究认为它是某种淋巴癌的致病因子。为降低2,4-D的危害,科研人员通过

基因工程技术构建了能高效降解2,4-D的基因工程菌。请回答:

(1)在农业生产上常会使用_______________浓度2,4-D进行麦田除草,在杀死杂草的同时却不会对小麦生长造成损害,原因是__________________________________________。

(2)从被2,4-D污染的土壤中得到能降解2,4-D的细菌,从该菌提取RNA,据此可建立_                     __                                      文库。

(3)PCR技术扩增目的基因的过程是:目的基因DNA受热变性后解链为单链,引物与单链相应互补序列结合,然后在_______________酶作用下进行延伸,如此重复循环多次,使目的基因的量呈_______________形式扩增。PCR技术扩增目的基因的前提是_                。

(4)一个基因表达载体的组成中要有标记基因,标记基因的作用是鉴别受体细胞中_______。欲知基因工程成功与否,需要进行分子水平的检测,有时还需进行_                。

 
（1）控制小鼠尾形的基因位于____（2分）（常/X/Y）染色体上，子一代雄鼠的基因型是____________（2分）。 

（2）为确定转基因小鼠DNA插入的具体位置，研究者让该转基因小鼠与非转基因弯曲尾雄性小鼠杂交，统计子代的表现型种类及比例，并进行了以下分析（不考虑交叉互换）：若子代表现型及比例为弯曲雌﹕正常雌﹕弯曲雄﹕正常雄=                    （2分），则该DNA片段的插入位置属于第一种可能性；若子代表现型及比例为弯曲雌﹕正常雌﹕弯曲雄﹕正常雄=                       （2分），则该DNA片段的插入位置属于第二种可能性。

（3）培育该转基因小鼠，需运用________技术将含有外源DNA的体细胞的细胞核与去核的______细胞融合得到重组细胞，培养至早期胚胎后通过                        技术转移至受体体内。 

（4）外源DNA影响B基因表达的机制是：二者转录的产物碱基互补配对从而抑制                     。 

（5）图二中的两条长链为B基因的两条单链，若要对B基因进行PCR扩增，应选用引物                      。该过程中需使用                        酶以合成子链中的

                     键。

“葡萄美酒夜光杯，欲饮琵琶马上催。醉卧沙场君莫笑，古来征战几人回。”这是唐诗中提及的葡萄酒。19世纪，法国的巴斯德发现葡萄汁变酒是酵母菌的发酵作用。
​

（1）在无氧的条件下，酵母菌能进行酒精发酵，反应式是                          ，研究表明，酵母菌也可以在有氧条件下进行呼吸作用，说明酵母菌是一种    微生物。葡萄汁发酵后是否有酒精产生可以用重鉻酸钾来检验，在酸性条件下，重鉻酸钾与酒精反应的颜色变化情况是                 。

（2）酵母菌的酒精发酵过程一般控制在                温度范围，最适合酵母菌繁殖，请简要说明理由                                              。

（3）为了提高葡萄酒品质可以在葡萄汁中加入人工培养的酵母菌，可利用           培养基来分离获得较为纯净的酵母菌种。

（4）对野生酵母菌进行诱变可筛选出具有耐高糖和耐酸性的高产突变菌株，利用PCR技术可大量获得突变菌所携带的特殊基因，在PCR扩增反应中加入引物的作用是       ，加入DNA聚合酶的作用是                                      。

（1）基因工程中，A→B利用____________技术，依据的原理是__________，其中①为__________过程。

（2）B→C为转基因绵羊的培育过程，其中③用到的生物技术主要有动物早期胚胎培养和____________。

（3）B→D为抗虫棉的培育过程，其中④过程常用的方法是____________，要确定目的基因(抗虫基因)导入受体细胞后，是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，请写出在个体生物学水平上的鉴定过程：_____________________。