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            • 1.

              回答下列有关微生物培养的相关问题:

              Ⅰ.已知微生物A可以产生油脂,微生物B可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可以用于生物柴油的生产。回答下列问题:

              (1)显微观察时,微生物A菌体中的油脂通常可用____________染色。微生物A产生的油脂不易挥发,可用____________(填"萃取法"或"水蒸气蒸馏法")从菌体中提取。

              (2)为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落,可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样,并应选用以_______为碳源的______(物理状态)培养基进行培养。培养的结果发现没有得到微生物B的菌落或者数量极少,可在此操作之前增加____________这一操作步骤。

              (3)若要测定微生物B的菌体数,可在显微镜下用____________直接计数,若要测定活菌数量,可选用____________法进行计数。

              Ⅱ.某医院有一个罕见的细菌感染患者,医生想通过抑菌实验,从常用的抗生素一青霉素(A),氨苄青霉素(B),庆大霉素(C),氯霉素(D),环丙沙星(E)中寻找对病人最有效的一种.部分实验步骤如下:

              第一步:按下方所列配方配置培养基:

              牛肉膏

              蛋白胨

              NaCl

              H2O

              5.0g

              10.0g

              5.0g

              1000mL

              第二步:取单菌落适当稀释,用3支无菌滴管吸取从此病人体内分离到的细菌悬浮液2滴,滴于3个平板培养基表面,然后分别用3个无菌涂布棒涂匀,37℃恒温箱中培养,使细菌长满平板表面。

              (4)上述培养基配方中作为蛋白胨为微生物的生长提供了____________________。

              (5)如图圆环表示一个培养皿平面,用浸有不同抗生素的圆纸片间隔放到培养基土,如下图所示。

              培养2d后,A滤纸片周围出现透明圈,说明该致病菌对青霉素____________;B滤纸片周围没有出现透明圈,说明该致病菌对氨苄青霉素____________;C滤纸片周围的透明圈比A滤纸片周围的透明圈小,说明____________;D滤纸片周围的透明圈比A滤纸片的也小,且透明圈中出现了一个菌落,在排除杂菌污染的情况下,此菌落很可能是氯霉素的____________。

              (6)经测量透明圈大小,得到如下结果(单位mm):

              A

              B

              C

              D

              E

              7

              0

              3

              5

              10

              那么,你建议医生使用哪一种抗生素?____________.

            • 2.

              回答下列与酵母菌有关的问题:

              (1)培养酵母菌的培养基应采用________法灭菌。若将酵母菌划线接种在平板上,培养一段时间后会观察到菌落,菌落的含义是_______________。

              (2)酵母菌液体培养时,若通入氧气,可促进_______(填“菌体快速增殖”、“乙醇产生”或“乳酸产生”);若进行厌氧培养,可促进______(填“菌体快速增殖”、“乙醇产生”或“乳酸产生”)。

              (3)制作面包时,为使面包松软通常要在面粉中添加一定量的酵母菌,酵母菌引起面包松软的原因是___________。

              (4)为筛选和纯化酵母菌,根据用途应选用 ____________培养基,常用的接种方法____________和____________.扩大培养过程中需要对酵母菌进行计数,取0.2mL样品,用固体培养基对其培养,最后统计了三个平板,菌落数分别是200、180、220.则样品中微生物的数量为__________个/mL.该统计结果_____________(低于、高于)实际值。

            • 3.
              幽门螺杆菌是栖息在胃粘膜的革兰氏阴性螺旋状杆菌,具有强的脲酶(能降解尿素)活性,其代谢类型属于异养厌氧型(氧气浓度在5%〜8%左右适合,完全无氧或空气环境中无法生存),这种细菌是慢性胃炎、甚至胃癌发生的元凶.
              (1)为了对胃炎患者的胃粘膜提取物稀释样液中幽门螺杆菌进行分离,应将样品稀释液接种于以 ______ 为唯一氮源的固体选择培养基上,接种后的培养皿在 ______ 条件下,倒置于37℃的恒温培养箱中培养.
              (2)分离培养幽门螺杆菌时必须进行无菌操作,包括培养基和各种器皿都必须是无菌的,培养基常用的灭菌方法有 ______ .
              (3)欲检测上述培养基中是否具有幽门螺杆菌这类细菌的存在,向培养基中添加酚红指示剂,培养基中菌落周围显示红色环带,即表明这类细菌的存在,这种检测过程的机理是 ______ .
              (4)采用液体培养基培养幽门螺杆歯菌,为了测定菌液中的菌体数量,一般采用 ______ 法将一定量的菌液接种到固体培养基上,统计 ______ 的数量来代表菌体数,这种检测方法测得的结果一般偏 ______ (填“大”或“小”),原因是 ______ .
            • 4.
              回答有关微生物培养和筛选的问题
              空气中的微生物在重力等作用下,可以一定程度地沉降.某研究小组欲用平板(培养基)收集教室空气中的微生物,以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况.实验步骤如下:
              ①配制培养基(成分:牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O);
              ②制作无菌平板(培养基);
              ③设置空白对照组和若干实验组,进行相关操作;
              ④将各组平板置于37℃恒温箱中培养一段时间,统计各组平板上菌落的平均数.
              请回答下列问题:
              (1)该培养基中微生物所需的氮源是 ______ ,成分X通常是 ______ .
              (2)步骤③中,实验组的操作是将不同平板分别置于教室中的 ______ ,敞口静置一段时间.
              (3)若在某次调查中,某一高度实验组平板上菌落平均数为36个/平板,而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落,这种结果说明在此次调查中培养基出现了 ______ 现象.若将30(即36-6)个/平板作为本组菌落数的平均值,该做法 ______ (填“正确”或“不正确”).
              (4)若想确定平板上的菌落是否有大肠杆菌,应在培养基中加入 ______ ;若要筛选出空气中的真菌,应加入 ______ .
              枯草芽孢杆菌广泛分布在含淀粉丰富的土壤中.若要从土壤中分离筛选出能高效降解淀粉的枯草芽孢杆菌,另一研究小组做了如下实验:
              ①制备土壤稀释液:取土样与水充分混合,放入锥形瓶中,常压80℃的水浴处理样品1小时后,取出冷却.然后制成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5不同稀释度的土壤溶液.
              ②用无菌滴管吸取1ml10-5菌液,用 ______ 法接种于以 ______ 为唯一碳源的平板上.
              ③将平板于37°C培养箱中培养1-3d后,加入碘液,观察菌落周围白色区域,如图所示.
              (5)若要大规模产业化该淀粉酶,则首选的菌株是 ______ .
            • 5.
              苹果园广泛使用的一种除草剂(含氮有机物)在土壤中不易被降解,长期使用可污染土壤.为修复被该除草剂污染的土壤,科学工作者按甲图程序选育能降解该除草剂的细菌(已知该除草剂在水中溶解度低,含一定量该除草剂的培养基不透明).

              (1)制备土壤浸出液时,为避免菌体浓度过高,需将浸出液进行稀释处理.现有一升土壤浸出液,用无菌吸管吸取1mL液样至盛有9mL无菌水的试管中,再稀释103倍.各取0.1mL已稀释103倍的水样分别接种到三个培养基上培养,记录的菌落数分别为55、56、57,则每升原土壤浸出液样中菌体数为 ______ .
              (2)科学工作者为修复被该除草剂污染土壤的目的来选择细菌,所用培养基应该 ______ .
              (3)接种技术的核心是 ______ .在划线接种时,连续划线的目的是将聚集的菌种逐步 ______ ,培养时,只有很少菌落出现,大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是 ______ 或有氧条件抑制了这些细菌的生长.
              (4)在培养基上形成的菌落中,无透明带菌落利用的氮源主要是 ______ ,有透明带菌落利用的氮源主要是 ______ ,据此可筛选出目的菌.实验结果如乙图显示的A~E五种菌株中, ______ 是最理想菌株.
            • 6.
              现代工业可将硅酸盐细菌制成细菌肥料,达到增产目的.硅酸盐细菌在无氮培养基、钾细菌培养基以及硅酸盐细菌培养基上均能生长,表1是硅酸盐细菌培养基的一种配方.答下列问题:
              表1
              硅酸盐细菌培养基的一种配方
              葡萄糖 10.0g
              MgSO4•7H2O 0.2g
              CaCO3 0.2g
              K2HPO4 2.0g
              NaCl 0.2g
              K2SO4 0.2g
              琼脂 20.0g
              将上述物质溶解后,用蒸馏水定溶至1000mL
              表2
              培养基种类 各稀释度对应的平均菌落数 菌落直径(mm)
              103 104 105 106
              无氮培养基 32 3 2 0 1.0-2.0
              钾细菌培养基 36 6 4 0.6 多数小于1.5
              硅酸盐细菌培养基 50 8 5 1.2 多数大于2.0
              (1)根据硅酸盐细菌培养基的配方可知,从功能上看,该培养基属于 ______ 培养基,原因是 ______ .
              (2)培养硅酸盐细菌时必须进行无菌操作.培养基的灭菌一般采用 ______ 法.配制培养基时,灭菌与调节pH的先后顺序是 ______ .
              (3)在进行接种时,所有的操作都应在 ______ 附近进行.在采用平板划线法分离硅酸盐细菌时,第二次及之后的划线,总是在上上一次划线末端开始,这样做的目的是 ______ .
              (4)在进行表2所示实验的同时也设置了空白对照,空白对照的培养基中 ______ ,说明培养基灭菌合格;根据表2数据可以得出,用 ______ 培养基筛选硅酸盐细菌的效果最好.
            • 7.
              分离筛选降解纤维素能力强的微生物对于解决秸秆等废弃物资源的再利用和环境污染问题具有理论和实际意义.研究人员从土壤和腐烂的秸秆中分离筛选出能高效降解纤维素的菌株,并对筛选出的菌株进行了初步研究.
              (1)对培养基进行灭菌的常用方法是 ______ .为在培养基表面形成单个菌落,若以接种环为工具,则用 ______ 法进行接种.
              (2)先将样品悬液稀释后涂在放有滤纸条的固体培养基上进行筛选得到初筛菌株.再将初筛菌株接种到以 ______ 为唯一碳源的培养基培养2~5天,加入刚果红溶液后,依据出现的颜色反应进行筛选,观察菌落特征并测量 ______ .同时将初筛菌株制备成的菌液放入加有滤纸条的液体培养基中,恒温振荡培养8天,观察滤纸条的破损情况.结果见表.由表可知,8种菌株中1、3、7号菌株产酶能力较强,原因是 ______ .
              菌株编号
              检测指标
              1号 2号 3号 4号 5号 6号 7号 8号
              DP 5.91 1.73 6.54 1.53 3.23 1.76 7.29 1.34
              滤纸破损 +++++ +++ +++++ ++ ++++ +++ +++++ ++
              注:①DP=(D/d)2,其中d表示菌落直径(cm),D表示水解圈直径(cm)
              ②“+”为滤纸边缘膨胀,“++”为滤纸整齐膨胀并弯曲,“+++”为滤纸不定形“++++”为成团糊状“+++++”为半清状
              (3)为进一步研究1、3、7号菌株对秸秆降解的效果.分别用这三种菌株对秸秆进行处理,并在第5天和第10天对秸秆和秸秆中含有的纤维素、半纤维素以及木质素等组分的降解情况进行了测定.结果见图.

              由图分析可知,三种菌株对的 ______ 降解最强,与第5天结果相比,第10天秸秆各组分中 ______ 的降解率变化最大.整体分析号菌株 ______ 的降解效果最好.
            • 8.
              某校生物兴趣小组为调查自来水水质,测定了自来水水样中的细菌含量,并进行了细菌分离等工作.请回答下列问题:
              (1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量,涂布平板所用的培养基是 ______ (填“固体”或“液体”)培养基,该培养基的制备过程是:计算→称量→溶化→灭菌→ ______ ,为使培养基满足细菌生长对pH的特殊要求,应在灭菌之 ______ (填“前”或“后”)调节pH.
              (2)培养基灭菌后,将1mL水样稀释1000倍,在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液,经适宜条件下培养后,3个平板上的菌落数分别为51、50和49.据此可得出每升水样中的活菌数为 ______ . 要使该实验所得结果可靠,还应该同时在另一平板上接种 ______ 作为对照进行实验.
              (3)工业生产中,提取胡萝卜素的方法主要有三种,一是从植物中提取,二是从大面积养殖的岩藻中获得,三是利用 ______  生产.从胡萝卜中提取胡萝卜素常用的方法是 ______ ,用这种方法提取胡萝卜素的主要步骤:粉碎、干燥、萃取、过滤、用蒸馏方法浓缩.胡萝卜素粗品的常用鉴定方法是 ______ .
            • 9.
              请回答下列有关生物技术实践方面的问题:
              (1)传统发酵技术应用十分广泛,果酒和果醋就是常见例子.当发酵装置由果酒酿造转为果醋酿时,首先要提高 ______ ,其次要注意通入 ______ .
              (2)微生物培养基通常用 ______ 方法进行灭菌.
              (3)在对土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验中,将一定稀释度的样品接种在以尿素为唯一氮源的培养基上,并在适宜的条件下培养,若根据用途划分,该培养基属于 ______ (填“选择”或“鉴别”)培养基.为检测尿素分解菌的存在与否,在以尿素为唯一氮源的培养基中加入 ______ 指示剂,如果存在尿素分解菌,则指示剂将变红色.
            • 10.
              某学校打算开辟一块食用菌栽培基地,以丰富学生的劳动技术课内容.首先对食用菌实验室进行清扫和消毒处理,准备食用菌栽培所需的各种原料和用具,然后从菌种站购来各种食用菌菌种.请回答下列问题:
              (1)对买回来的菌种进行扩大培养,首先制备试管培养基,写出制备固体牛肉膏蛋白胨培养基所需的原料: ______ 、 ______ 、 ______ 、 ______ 、 ______ .
              其中提供氮源的是 ______ ;提供能源的主要物质是 ______ .
              (2)微生物在生长过程中对各种成分所需量不同,配制培养基时各成分要有合适的 ______ .在烧杯中加入琼脂后要不停地 ______ ,防止 ______ .
              (3)将配制好的培养基分装到试管中,加棉塞后将若干个试管捆在一起,包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入高压蒸汽灭菌锅中灭菌,压力 ______ kPa,温度 ______ ,时间 ______ .灭菌完毕拔掉电源,待锅内压力自然降到0时,将试管取出.如果棉塞上沾有培养基,此试管应 ______ .
              (4)使用高压蒸汽灭菌锅时应注意,先向锅内倒入适量的水.把锅内水加热煮沸并将其中原有的 ______ 彻底排出后再将锅密闭.
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