长木蜂有在蜂巢内储存蜂粮(主要是长木蜂咀嚼过的花粉)的习性,其储存的蜂粮在蜂室中能长期保存不变质。研究人员为筛选出蜂粮中具有抑菌作用的微生物,开展实验如下:

(1) 配置培养基。称取适量的牛肉膏、蛋白胨、NaCl等营养物质,再加入____和适量的水,配置牛肉膏蛋白胨培养基,其中可提供碳源的有________。另配置适于乳酸菌生长的MRS培养基。 

(2) 系列稀释操作。将一批盛有9 mL水的试管作____处理;从三个蜂巢采集蜂粮各1 g,分别加入含有9 mL水的试管中混匀,再进行梯度稀释处理。在此过程中,为使菌液与水混合均匀,可将移液管上的橡皮头(洗耳球)________;移液管不能重复使用的原因除了需要避免混合上一个稀释浓度的残留液会使稀释不准确外,还有原因是_________________。 

(3) 涂布、培养和计数。将各稀释浓度的试管,分别吸取0.1 mL,在两种培养基上涂布均匀,并在适宜条件下培养。根据菌落的_______________________(至少写出三项)等特征初步判断微生物的种类。若在牛肉膏蛋白胨培养基上最多发现有51 种微生物生长,在MRS培养基上最多有17种微生物生长,则实际蜂粮中的微生物种类____(选填“可能”或“不可能”)大于68种。 

(4) 筛选具有抑菌作用的微生物。用接种针挑取一种微生物的菌落,分别接种到富含青霉菌(A组)、枯草芽孢杆菌(B组)、啤酒酵母(C组)的培养基中,每组选取一个平板接种三个位点,实验结果见图。其中作为对照的是____组;分析实验结果,对该微生物抑制作用最弱的微生物是____。 

水污染是全球性的环境问题，微生物降解是水污染治理的有效手段之一。聚乙烯醇(PVA)是存在于化工污水中的一种难以降解的大分子有机物，PVA分解菌能产生PVA酶分解PVA，PVA与碘作用时能产生蓝绿色复合物，当PVA被分解时蓝绿色复合物消失，形成白色透明斑，请回答下列问题：

(1)要从土壤中筛选出能高效分解PVA的细菌，应采用以________作为唯一的碳源的选择培养基，实验中还应设置对照组。将菌液稀释相同的倍数，对照组培养基上生长的菌落数目应明显________(填“多于”或“少于”)选择培养基上的数目，从而说明选择培养基具有筛选作用。

(2)要测定土壤稀释液中微生物的数目，可在显微镜下用________计数板直接计数。若将100 mL含有PVA分解菌的土壤样品溶液稀释10⁴倍后，取0.1 mL稀释液均匀涂布在选择培养基表面，测得菌落数的平均值为160个，空白对照组平板上未出现菌落，则100 mL原菌液中有PVA分解菌________个，该方法的测量值与实际值相比一般会________(填“偏大”“偏小”或“相等”)。

(3)要鉴定分离出的细菌是否为PVA分解菌，培养PVA分解菌的培养基中除了加入必需的营养物质外还需要加入碘用于鉴别PVA分解菌。要比较不同菌株降解PVA能力的大小，用含相同PVA浓度的上述培养基来培养不同菌株，一定时间后，通过测定________________来确定不同菌株降解PVA能力的大小。

(4)提取橘皮精油，常采用________而不用水蒸气蒸馏法，原因是_________________________________________________________________。

水污染是全球性的环境问题，微生物降解是水污染治理的有效手段之一。聚乙烯醇（PVA）是存在于化工污水中的一种难以降解的大分子有机物，PVA分解菌能产生PVA酶分解PVA，PVA与碘作用时能产生蓝绿色复合物，当PVA被分解时蓝绿色复合物消失，形成白色透明斑，请回答下列问题：

（1）下表是筛选能高效分解PVA的细菌的培养基配方，X物质最可能为_____________。实验中还应设置完全培养液对照组，将菌液稀释相同的倍数，对照组培养基上生长的菌落数目应明显_________（填“多于”或“少于”）选择培养基上的数目，从而说明选择培养基具有筛选作用。

（2）要测定土壤稀释液中微生物的数目，可在显微镜下用______________计数板直接计数。若将100mL含有PVA分解菌的土壤样品溶液稀释10⁴倍后，取0.1mL稀释液均匀涂布在选择培养基表面，测得菌落数的平均值为160个，空白对照组平板上未出现菌落，则100mL原菌液中有PVA分解菌_________________个，该方法的测量值与实际值相比一般会_________（填“偏大”、“偏小”或“相等”）。

（3）要鉴定分离出的细菌是否为PVA分解菌，培养PVA分解菌的培养基中除了加入必需的营养物质外，还可以加入___________，用于鉴别PVA分解菌。若用上述培养基比较不同菌株降解PVA能力的大小，请用简洁的语言写出设计思路：______________________________。

为了获得β-胡萝卜素产品，某小组开展了产β-胡萝卜素酵母菌的筛选与色素提取实验。请回答下列问题：

(1)实验用的培养皿常用的两种灭菌方法是________________________________；为了减少灭菌后器皿被污染，灭菌前应该________________。

(2)为了筛选出酵母菌，培养基中添加了青霉素，其目的是________________________________________________________________________。

(3)下图是灭菌锅及其局部剖面示意图，图中甲、乙、丙指示的依次是________。(填序号)

①安全阀、放气阀、压力表　②放气阀、安全阀、压力表

③安全阀、放气阀、温度表　④放气阀、安全阀、温度表

(4)为了将分离到的菌株纯化，挑取了菌落在3块相同平板上划线，结果其中一块平板的各划线区均未见菌生长，最可能的原因是_______________________。

(5)为增加β-胡萝卜素提取量，在研磨酵母细胞时，添加石英砂的目的是____________________________________；研磨时________(填"需要"或"不需要")添加CaCO，理由是________________________________________________________________________。

(1)要从土壤中筛选出能高效分解PVA的细菌，应采用以______________作为唯一碳源的选择培养基，实验中还应设置对照组。将菌液稀释相同的倍数，对照组培养基上生长的菌落数目应明显______________ (填“多于”或“少于”)选择培养基上的数目，从而说明选择培养基具有筛选作用。

(2)要测定土壤稀释液中微生物的数目．可在显微镜下用______________计数板直接计数。若将100 mL含有PVA分解菌的土壤样品溶液稀释10⁴倍后，取0.1mL稀释液均匀涂布在选择培养基表面，测得菌落数的平均值为160个，空白对照组平板上未出现菌落，则100 mL原菌液中有PVA分解菌_________个，该方法的测量值与实际值相比一般会___________(填“偏大”“偏小”或“相等”)。

(3)要鉴定分离出的细菌是否为PVA分解菌，培养PVA分解菌的培养基中除了加入必需的营养物质外还需要加入______________，用于鉴别PVA分解菌。要比较不同菌株降解PVA能力的大小，用含相同PVA浓度的上述培养基来培养不同菌株．一定时间后，通过测定______________来确定不同菌株降解PVA能力的大小。

根据所学知识，回答下列有关生物技术实践的问题

（1）为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量：

①该小组采用稀释涂布平板法检测水样中细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是                             ；然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为46、45和44，据此可得出每升水样中的活菌数为___________。

②该小组采用平板划线法分离水样中的细菌，操作时，接种环通过___________灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是_______                     。

    （2）尿素是一种重要的农业氮肥。但是，尿素并不能直接被农作物吸收，只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成         。

   （3）在筛选纤维素分解菌的过程中，人们发明了          ，这种方法能够通过颜色反应直接对微生物进行筛选。其基本的实验设计流程是①土壤取样→②         →③梯度稀释→④将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→⑤                      。

苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害。小明同学准备依据下图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。请回答下列问题：

（1）酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K₂HPO₄、MgSO₄、苯酚和水，其中可作为碳源的有________________。

（2）将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐____________，

以达到富集酚降解菌的目的。若上图平板中菌落过于密集，应进一步_____________，以便于菌落计数与分离。制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加_____________。

（3）下图为连续划线法示意图，在图中__________（填图中序号）区域更易获得单菌落。

（4）采用比色测定法（使用苯酚显色剂）检测降解后的废水中苯酚残留量。先制作系列浓度梯度并进行显色反应，下表中1～5号比色管的苯酚浓度应分别为________________。

如果废水为50mg／L苯酚溶液，降解后约有21％的苯酚残留，则需将残留液稀释_____________（填序号：①5②10③20）倍后，再进行比色。

请回答下面与微生物的培养与应用有关的问题：

  (1)在微生物培养过程中，获得纯净培养物的关键是______________________；对玻璃器皿的灭菌方法为__________。

  (2)微生物常用的接种方法有2种，但只有______________方法可用于微生物的计数，运用该方法计数的结果往往比实际结果__________。

  (3)农作物秸秆中含有大量的纤维素，利用微生物可以将纤维素转化为酒精以供人类所需。将纤维素转化为酒精需要先将纤维素转化为葡萄糖，将纤维素转化为葡萄糖的酶是一种复合酶，它包括C₁酶、_________________，将葡萄糖转化为酒精的微生物是__________。

  (4)下表是分离某种微生物的培养基配方：

表中X物质最可能为________(碳源、氮源、无机盐)；培养基中添加琼脂的作用是______________________________________。

尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们试图探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并初步筛选到能降解尿素的细菌（目的菌）。培养基成分如表所示。请分析回答问题：

（1）此培养基能否用于植物组织培养？________，理由是________________________。

（2）培养基中加入尿素的目的是________________，这种培养基属于__________培养基。

（3）在培养“目的菌”的实验过程中需要振荡培养，原因是____________________________________。

（4）分离培养细菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，常用的灭菌方法有___________、_____________和______________。

（5）将土壤样品经过梯度稀释后，涂布在培养基平板上，若培养基中存在有分解尿素的细菌，细菌合成的脲酶将尿素分解为_____________使pH增高，使其菌落周围会出现红色环带。细菌因没有______________系统，其分泌酶与真核细胞蛋白质的分泌方式不同。

以下是制作酸奶的生物化学过程：将适宜的菌种接种到牛奶中，产生的乳酸使牛奶蛋白凝聚形成浓稠的酸奶。酸奶的发酵剂中含有大体等量的两种细菌（保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌）。保加利亚乳杆菌在无氧条件下分解牛奶中的乳糖产生乳酸，还产生多肽酶，将牛奶蛋白分解成多肽和氨基酸；这些反应会刺激嗜热链球菌生长，产生二氧化碳和甲酸，使得发酵液的pH降低，这又会促进保加利亚乳杆菌的生长和代谢。

（1）用于制作酸奶的牛奶原液首先必须进行高温处理，其目的是_________，以保证接种后的正常发酵；操作者的双手需进行清洁和消毒；操作间内静止空气中的细菌可用物理方法__________杀灭，也可以用化学试剂_______________________（列出两种）进行消毒。

（2）牛奶原料中不能含有抗生素，这是因为____________________________________________________________________________。

（3）发酵剂中的两种细菌之间的关系属于___________。

（4）包装的酸奶在2～4℃下保存，这样可使细菌存活但无活性，食用酸奶前不需要杀死细菌这是因为用于酸奶发酵的两种微生物_____________，且能抑制人体中的某些有害菌群，因此不必灭菌即可食用。