[生物——选修1：生物技术实践]

   生活中，部分食品或饮料与微生物的发酵密不可分。回答下列关于微生物的培养及其运用的问题：

（1）不同微生物对营养的需求存在一定差异，但都能归纳为4类营养，即水、________、氮源和________。

（2）为增加分泌高效果胶酶的微生物的浓度，应该用________（填写物理状态）培养基。探究不同微生物分泌的果胶酶的活性实验，所用材料是果汁，那么该实验的自变量是________。

（3）制备果酒时，发酵菌为________，该发酵菌能将葡萄糖转化成酒精和CO₂，如图是某同学设计的发酵装置，该装置的优点有________。

（4）制备果醋时，发酵菌在________（填”有氧、无糖”“无氧、有糖”或“有氧、有糖”）条件下，能将乙醇转化成________，进而转化成乙酸。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

如图表示试管牛的培育过程。请据图回答下列问题：

（1）试管牛培育过程中，用到的生物技术有________（至少答出两种）等。

（2）试管牛的生殖方式是________，其细胞核内的遗传物质来自于________。

（3）试管牛体外受精是在________溶液或________溶液中完成的。

（4）体外培养受精卵时，需要提供无菌、无毒的环境、________、适宜的温度和pH以及________。

（5）此项技术还被应用于人类，因此产生了试管婴儿和设计试管婴儿两项技术，与试管婴儿技术相比，设计试管婴儿技术的不同点是植入前对胚胎进行________，你对设计试管婴儿技术的观点是支持还是不支持？请说明理由？________，________。

高温淀粉酶在大规模工业生产中有很大的实用性。研究者从赤峰市克旗热泉（出口水温达87℃）中筛选了高效产生高温淀粉酶的嗜热菌，其筛选过程如图所示。请回答下列问题：

（1）I号培养基中应加入___________，以便挑选出能产生高温淀粉酶的嗜热菌。从I号培养基中挑选__________菌落接种到II号培养基中。

（2）②过程所使用的接种方法是___________________。如果不经过①过程，直接将采集的样品进行接种培养，可能出现的结果是________________________________。

（3）I、II号培养基接种菌种后，应该置于__________的恒温培养箱中培养，培养皿要倒置的原因是_______________________________。

（4）在高温淀粉酶运用到工业坐产前，需对该酶的最佳温度范围进行测定。下图中的曲线①表示酶在各种温度下酶活性相对最高酶活性的百分比。将酶在不同温度下保持足够长的时间，再在酶活性最高的温度下测其残余酶活性，由此得到的数据为酶的热稳定性数据，如曲线②。根据实验结果分析：80℃并不是该酶使用的最佳温度，原因是____________________。曲线②35℃数据点是在_____________℃时测得的。

[生物--选修1：生物技术实践] 

由于酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的α-淀粉酶基因转入酵母菌中经筛选得到了可高效利用淀粉的工程菌菌种（过程如图甲所示）。

（1）图甲中，过程①需要的酶有                                   。为达到筛选目的，平板内的固体培养基应以                作为唯一碳源。②、③过程需重复几次，目的是                                        。

（2）某间学尝试过程③的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示。该同学的接种方法是                ；推测该同学接种时可能的操作失误是______________。

（3）以淀粉为原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的适宜条件下密闭发酵，接种________菌的发酵罐需要先排气，其原因是__________________________。

图示为稀释涂布平板法的操作流程。请回答下列问题：

(1)实验室获得纯净培养物的关键是________。

(2)图示流程的主要操作包括________和________。

(3)一般选择菌落数在________的平板进行计数，结果比较准确。

(4)当培养基中纤维素成为唯一碳源时，可筛选出________。要证明其有选择作用，可以用________作对照，比较菌落数目；还可以在培养基中加入刚果红染料，如果________，也证明其选择作用。

b

（1）如上图所示，菌株 A 和 B混合培养几小时后，把大肠杆菌洗涤后涂布在基本培养基的固体平板上，发现长出了若干野生型菌落，对此实验现象可作出如下假设：

① 不同大肠杆菌间遗传物质发生重组。 

②                                   。

（2）为了探究上述假设 ① ，有人设计了一种 U 型管（如下图），中间用过滤器隔开，大肠杆菌不能通过，但培养液和营养物质可通过，实验如下。请补充相关实验内容：

实验步骤：

① 在U型管中加入                            ；

② U型管两端各加入菌株 A、菌株 B，培养几小时；         

③ 将U 型管两端的大肠杆菌各自取出洗涤后涂 布在         上，观察有无菌落。

实验结果：                                   。

实验结论: 菌株 A 与菌株 B之间遗传物质发生重组。

（3）现有1升水样，用无菌吸管吸取1mL转至盛有9mL无菌水的试管中，依次稀释至10³倍。各取0.1mL已稀释10³倍的水样分别接种到三个培养基上培养，记录的菌落数分别为31、34、37，则每升原水样中大肠杆菌数为            。该数据理论上比细菌实际数目     。

（4）该实验中需要灭菌的是                                 。（至少写3个）

(1)制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行________处理。

(2)要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，上述培养皿中培养基为________体培养基。

(3)在第2次及其后每次划线前需对接种环进行________，并且从上次划线________端开始。

(4)培养后发现，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是________或有氧条件抑制了这些细菌的生长。

(5)在固体培养基上形成的菌落中，无透明带菌落利用的氮源主要是________，有透明带菌落利用的氮源主要是________，据此可筛选出目的菌。

以下是从自然菌群中筛选理想菌种的主要步骤，请回答：

采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定→菌种保藏

（1）在寻找目的菌株时，要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找，因此筛选嗜盐菌应从____________中分离、纯化。

（2）富集培养是在将样品稀释涂布到鉴别菌种的培养基之前，可以通过____________增加目的菌株的浓度，目的是_____________________________________________。

（3）下图所示的操作是培养基配制过程的____________，该操作的正确使用顺序是：____________（用图中的序号和箭头表示）。②步骤需要培养基冷却到____________才能操作。③步骤操作的目的是____________________________________。

（4）对获取的菌种通常是在低温条件下进行短时间保藏，也可以利用甘油管藏的方法____________。

35-2.[生物——选修3：现代生物科技专题] 

回答下列关于胚胎工程方面的问题。

（1）胚胎工程是指对动物        或         所进行的多种显微操作和处理技术，如体外受精、胚胎移植、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术。

（2）精子的顶体内含有              ，能协助精子穿过卵子的                。

（3）从供体母牛子宫内收集胚胎的方法叫          。

（4）在胚胎工程中，若要获得多个卵细胞，则需对母畜作            处理，若要出现“不同的母体产下性状相同的后代”这一现象，则应使用的技术为            。

（5）胚胎干细胞在功能上具有            性，在体外培养的条件下，可以增殖而不发生            。

(1)欲从多种微生物中分离某种细菌并抑制其他微生物的生长．应使用________培养基．纯化菌种时可采用比较简单的________法进行接种，接种操作应在________进行．

(2)纯化的菌种常采用固体斜面培养基临时保藏，该方法保存的时间较________，而且菌种易________．常用的凝固剂是________．

(3)从培养基所含的成分来看，从土壤中分离出固氮菌的培养基特点是________，从土壤中分离出纤维素分解菌的培养基特点是________．

（二）人组织纤溶酶原擞活物(htPA)是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得．流程如下：

(1)卵母细胞可以从活体________中采集，还可从已处死的雌羊卵巢中获取．对供体母羊用________处理，可以获取更多的卵(母)细胞．采集的精子需要经过________处理，才具备受精能力．

(2)欲用有限的早期胚胎获得多个转基用个体，可以利用________技术．由于代孕母羊对移入其子宫的外来胚胎________，才使早期胚胎能在代孕母羊体内存活．

(3)质粒上应有________，才能使htPA基因插入其中．在转htPA基因母羊的肌肉细胞中________(能、不能)检测到目的基因．若在其羊乳中检测到________，说明目的基因成功表达．

（1）巴氏消毒的方法是             。为检测消毒前后牛奶中细菌含量变化情况，做如图操作。用无菌吸管从三角烧瓶中吸取1 mL生牛奶稀释液至盛有9 mL无菌水的试管中，如此重复3次，将10mL生牛奶稀释到10^-4浓度后，取0.1mL滴在培养基上。

（2）将牛奶稀释液滴加在培养基上进行涂布，应选择的涂布工具是          。该涂布工具最合适的灭菌方法是____________。
  

 A．火焰灼烧    B．高温高压灭菌C．酒精擦拭    D．紫外线照射

（3）下图所示方法为稀释培养法，按此方法培养得到的3个培养皿中菌落数分别为25个、23个、24个，则生牛奶中每毫升含细菌数为________个。

（4）消毒后牛奶中绝大部分细菌被杀死，若用稀释培养法检测消毒后牛奶是否含有细菌，则在操作步骤上应作什么改动？__________________。 

（5）检测食品中大肠杆菌数量，可评价食品是否受到污染。下表培养基配方中，大肠杆菌能够生长的是______，理由是__________________。

（6）从生牛奶取样培养得到的菌落中，混有各种杂菌，从中检测出大肠杆菌的方法是在培养基中加入             ，具有              特征可以鉴别大肠杆菌。

多氯联苯是一种有机致癌物质，容易累积在脂肪组织，造成脑部、皮肤及内脏的疾病并影响神经、生殖及免疫系统。多氯联苯为油状液体，污染土壤后，土壤呈现油状板结，很难清除。研究发现部分酵母菌具有分解多氯联苯的作用，为消除这种污染，科研人员计划从受污染的土壤中筛选出高效分解多氯联苯的菌株。

（1）筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品稀释，接种到以             为唯一碳源的培养基上，从功能上讲，该培养基属于              。

（2）对初步提取到的菌株要进行      ，一般操作方法有两种，下图是利用                    法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。培养一段时间后，如果出现菌落且菌落周围           消失或减少，说明该菌落中的菌株具有降解多氯联苯的能力。

（3）若要测定培养液酵母菌的菌体数，可在显微镜下用                 直接计数。若用稀释涂布平板法统计菌落数，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板进行培养一段时间，这样做的目的是                                          。

（4）将1ml酵母菌溶液稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1ml稀释液经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为42、43、44，据此可得出每升溶液中酵母菌活菌数为             。