[生物——选修1：生物技术实践]

根据所学知识，回答下列问题

（1）用萃取法提取胡萝卜素的原因是________。萃取的效率主要取决于萃取剂的________，同时还受原料颗粒的大小、含水量等条件的影响；在对新鲜胡萝卜进行干燥时，要注意控制________，否则会引起胡萝卜素的分解。

（2）从橘皮中能提取出橘皮油，为提高出油率，需要将橘皮干燥，并用________浸泡。为探究浸泡时间对出油率的影响，应设置________作为对照。

（3）酒精发酵时，当酒精含量达到12～16％时，发酵就停止了。为获得耐酒精的酵母菌，用涂布器在含高浓度酒精的培养基上进行________操作。这种培养基只允许耐酒精的微生物生长，该培养基称作________培养基。再根据菌落的________、隆起程度和颜色等菌落特征获得酵母菌。

在微生物连续培养时，一部分旧的液体培养基以一定的速度流出，同时不断有等量的新鲜液体培养基流入以保证微生物对营养物质的需求。研究人员将大肠杆菌JA122菌株接种到葡萄糖含量受到限制的液体培养基中，连续培养多代，然后取样分析其中存在的新菌株。请回答下列问题：

    （1）液体培养基中除了把葡萄糖作为____________外，还应该含有________________________。

    （2）样品中还发现了CV101、CV103新品种，对其菌株的代谢差异进行分析发现，CV103对葡萄糖吸收率最高，代谢终产物是醋酸盐。进一步研究表明，CV101可以在过滤的培养过CV103的培养基中生长，据此作出的推测是：_______________。请设计并完成下列实验，来验证你的观点。

    ①配制______________________的固体培养基（A组）和不含碳源的固体培养基（B组）；

    ②将等量且适量稀释的CV101菌液分别接种到A、B培养基中培养一段时间，并观察记录菌株的生长情况。实验过程应在____________条件下进行。

    ③预期实验结果：___________________________________________________________。

为研究“某品牌酸奶中乳酸菌数量及其对抗生素耐药性情况”某同学进行了如下实验:

请分析回答下列问题：

(1)配制的乳酸菌培养基除了含有水、碳源、氮源和无机盐等主要营养成分外，还应加人适量的_______和琼脂。在培养基各成分溶化与灭菌之间，要进行的操作是_________。

(2)接种微生物的方法有很多，图中过程①②③所示的方法为__________。用该方法统计样本菌落数时，同时需要做A、B、C三个培养皿，原因是__________。用该方法统计样本菌落数后，所得数据需要乘以10ⁿ后，才可表示乳酸菌的数量（单位：个/ml)，据图分析，这里的n=___________。

(3)请完善“检测乳酸菌对青霉素、四环素耐药性”的实验操作步骤：

步骤1:分别取等量且适量的_______________________分别加入三组无菌培养皿中，再加入灭菌并冷却到 _________℃左右的培养基，立即混匀，静置凝固成平板。

步骤2:向三组培养基中分别接种待检测的乳酸菌菌种。

步骤3:将接种后的三组培养基和一个__________________都倒置于适宜温度的恒温箱中培养一定时间，观察比较培养基中菌落生长情况。

某兴趣小组对某蓄水池进行细菌数目测定，以了解池水是否符合饮用水卫生标准。回答下列问题：

（1）用无菌三角瓶取水样前，水龙头需使用酒精棉擦拭消毒后，再通过_________灭菌。取水前进行无菌操作的目的是______________。

（2）该小组通过滤膜法测定细菌总数，将10mL的水样进行过滤后，将滤膜放在牛肉膏蛋白胨培养基上培养，培养时应将平板倒置，其原因是__________（填2点原因）。所用培养基中的牛肉膏除为微生物提供碳源和氮源外，还能提供磷酸盐和__________。在培养过程中，不同时段观察到的平板上菌落特征的差异有__________（至少写出两点）。

​（3）该小组若想检测水样中大肠杆菌的数目，可将滤膜放在__________培养基上培养一段时间，然后计算培养基上__________（颜色）菌落的数目。

[生物·选修1：生物技术实践]

微生物的培养在生物科学史和现代生物工程中都是极其重要的基础技术。下图1是某学生重复艾弗里证明DNA是遗传物质实验的其中一组实验；下图2是基因工程中运用影印法将培养基A上的菌落按原来方向印在培养基B上，以检测重组质粒是否导入大肠杆菌的示意图，请据图回答下列问题。

（1）图1、图2的培养结果显示，两实验中使用的都是         （填物理状态）培养基

     ①酒精灯 ②接种环  ③高压蒸汽灭菌锅  ④培养皿

（3）培养基灭菌是避免杂菌污染的有效途径之一。适用于图1、图2所示培养基的灭菌方法是                        ；接种前还需检测灭菌效果。方法是将                   置于恒温箱中，在适宜温度下培养一段时间，观察培养基上是否有菌落产生。

（4）实验证明，上述两项实验中R型菌和大肠杆菌的转化率都很低。为获得图1、图2所示的培养结果，一是要设法提高图1中S型菌的                                ；二是要使用恰当的方法接种。两实验都不能用平板划线法和稀释涂布平板法接种，而应采用不加稀释的涂布平板发接种R型菌和大肠杆菌，理由是                                     。接种培养4天后，可通过观察             的形态特征来识别R型菌和大肠杆菌。

【生物—选修1：生物技术实践】

请回答下列有关微生物培养的问题：

（1）具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，为了获得耐高糖、耐酸特性的酵母菌菌种，可以对野生酵母菌菌种进行诱变处理，然后在__________（培养基的物理状态）培养基上进行培养，该培养基要在基本培养基上额外添加______________________。

（2）若要用酿造果酒的装置酿造果醋，需要改变的环境条件是                      。

（3）分析下面培养基的配方：NaNO₃、KH₂PO₄、NaH₂PO₄、MgSO₄·7H₂O、KCl、H₂O。若用于培养纤维素分解菌，应加入____________，为检验纤维素分解菌的存在与否，还应加入__________。

（4）安徽怀远盛产石榴，石榴酒也是当地的特产。利用石榴发酵制作石榴酒的过程中，发酵装置内加入石榴汁后要留出约1/3的空间，目的是____________________________。

（5）筛选乳酸菌时可选用平板划线法或______________________接种，培养基中的尿素可为乳酸菌生长提供__________。

有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。回答问题：

（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以       为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于       培养基。

（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即       和       。

（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力       。

（4）通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、        和         。无菌技术要求试验操作应在酒精灯       附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。

为了获得纯度高的大肠杆菌,需要对大肠杆菌进行培养和分离。培养大肠杆菌一般用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。

(1)培养大肠杆菌,配制固体培养基的基本步骤:计算→称量→________→_________→倒平板。 

(2)称量时,由于牛肉膏比较黏稠,可以用______挑取,放在____上称量。由于牛肉膏和蛋白胨______,称量时动作要迅速,称量后要及时盖上瓶盖。 

(3)在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上的大肠杆菌能生长,说明培养基含有_________等大肠杆菌生长所需的营养要素。 

(4)微生物纯化培养可以通过多种接种方法_________和_________等,使大肠杆菌在固体培养基上形成单个_________,从而获得纯菌株

豆浆是深受中国百姓喜爱的饮品,但易变质,保质期较短。科研人员对变质豆浆中的腐败细菌进行分离,并研究了乳酸链球菌素对腐败细菌的抑制效果,为生产豆浆时,优化保质方法提供依据。主要研究过程如下:

①豆浆变质处理:将2种市售豆浆A、B和自制豆浆在无菌操作台上分别装入已灭菌的250 mL三角瓶中,密封、37 ℃条件下,放置7 d后,豆浆发生变质。

②腐败细菌的初步分离和计数:取变质的豆浆在无菌条件下接种到细菌培养基上,培养一段时间后,统计各培养基上菌落种类和数量。结果如下表:

③比较乳酸链球菌素添加量对腐败细菌的抑制效果:以自制的新鲜豆浆为材料,经相应处理后,在37 ℃下放置35 d后,统计豆浆中腐败细菌数量,结果如图。

请回答下列问题:

(1) 步骤①中三角瓶的常用灭菌方法是________,步骤②中培养基的常用灭菌方法是____________。 

(2) 步骤②中适宜采用的接种方法是________。区分菌落种类的依据是________________。统计菌落种类和数量时要每隔24 h观察统计一次,直到各类菌落数目稳定,以防止____________________。 

(3) 乳酸链球菌素是一种天然食品防腐剂,它是由34个氨基酸组成的多肽。步骤③结果表明,最能耐受乳酸链球菌素的细菌是____;为有效防止豆浆腐败,在生产中乳酸链球菌素的添加量应控制在____左右。 

(4) 与用抗生素防腐相比,使用乳酸链球菌素防腐的优点是_。 

下表是某培养液成分含量表，请回答：

（1）若用于培养微生物，该培养液中有   类营养物质，可培养的微生物同化作用类是          。

（2）此营养液若用来培养固氮微生物，则应除去的成分是         ，加入的物质是                。

（3）若用该培养液培养大肠杆菌，应加入的物质是             ，为检测大肠杆菌的存在与否还应加入              和        ，将呈现             反应。

（4）此培养液若用于培养金黄色葡萄球菌并观察菌落形态，除有机物外还应加入       ，为使其正常生长繁殖，同时又抑制其他杂菌，还应加入         。

（5）此培养液若用于植物组织培养，还应加入        和        。