[选修1——生物技术实践]

(1)该图所示的鉴定方法称为________________。

(2)基线一般距底边________________cm。

(4)在图中的层析谱中，①代表的物质是______________________________。②代表的物质是______________________________。

(1)图中①和②分别表示番茄组织培养中细胞的__________和___________过程。

(2)图中培养外植体的培养基中常用的凝固剂是___________。对培养基彻底灭菌时，应采取的灭菌方法是__________________________________。

(3)图中外植体的消毒所需酒精的体积分数是___________（2分）。用酶解法将愈伤组织分离成单细胞时，常用的酶是__________________________酶。

(4)提取番茄红素过程中，萃取加热时需安装冷凝回流装置，其目的是_______________。

利用紫外线诱变选育高产β━胡萝卜素的三孢布拉霉负菌（单细胞真菌），未突变菌不能在含有浓度为10^﹣5M的β━紫罗酮的培养基上生长．菌体随β━胡萝卜素含量增加从黄色加深至橙红色．图甲为选育及提取获得β━胡萝卜素流程． 

(1)三孢布拉霉负菌与细菌共同具有的细胞器是________．   

(2)为选出高产突变菌种，还应在培养基中添加________．   

(3)进行③过程时，应选取________色的菌落接种至液体培养基．为筛选纯化β━胡萝卜素产量高的菌种，采取重复________（填图甲中数字）过程．   

(4)固体平板培养基经过程②接种培养后的菌落分布如图乙所示．该同学的接种方法是____。 

(5)过程⑥是________，用纸层析法鉴定提取的胡萝卜素粗品，结果发现颜色较浅，导致该现象的原因可能是萃取时，_______________________________．（写出两点）

如图1是在发酵罐内利用三孢布拉氏霉发酵生产β—胡萝卜素过程中，菌体生物量及β—胡萝卜素产量随时间变化的曲线图。图2是样品层析结果及与β—胡萝卜素标准样品的比对。请回答下列问题：

(1)发酵罐内三孢布拉氏霉培养基按物理形态分应为             ，玉米粉和豆饼为微生物的生长分別主要捉供             。在接入菌种前，应对培养基进行             ．以避免杂菌污染。

(2)图1中，菌体的最快增长出现在第             h．菌体的生物量到达最大值后下降，其原因是             。

(3)β—胡萝卜素常用的提取方法为             法，一般用_             作为提取剂，原因是该提取剂为水不溶性有机溶剂，提取效果好。

(4)将提取的胡萝卜素样品与β—胡萝卜素标准样进行比对、结果如图2。从图中分析可知，色带             为β—胡萝卜素。

①卡尔文向小球藻提供¹⁴C标记的CO₂，并追踪检测其放射性，探明了暗反应的过程；

②赫尔希和蔡斯利用³²P和³⁵S标记噬菌体侵染细菌的实验中，采用了搅拌和离心等手段将DNA和蛋白质分开，再分别检测其放射性；

③培养细菌时需将培养基的PH调至酸性；

④酒精可作为绿叶中色素提取的溶剂和萃取胡萝卜素的萃取剂。

&;在生物技术实践过程中，往往需要注意某些实验步骤的操作，请将下列实验中的注意事项填写完整：

（1）在生产过程中，发现葡萄酒变酸，表面观察到菌膜，造成此现象的生物是                      。在腐乳的制作时，用来腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干净后要用              消毒。腐乳外部有一层致密的“皮”，这是               的匍匐菌丝形成的。制作泡菜时，有时坛内会长一层白膜，这是          　繁殖形成的。

（2）提取洋葱DNA时，要在切碎的洋葱中加入一定的             　  ，并进行充分地搅拌和研磨，待过滤后再收集研磨液。

 （3）下图为花粉植株的培育途径

为了挑选到单核期的花药，通常选择          　的月季花蕾．选择花药时一般通过镜检确定花粉发育时期，此时需要对花粉细胞核进行染色．图中通过花药培养产生花粉植株，有两种途径，这两种途径之间没有并没有绝对的界限，主要取决于培养中              。

在花药离体培养中剥离花药时，要彻底去除          ，因为与其相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。

（4） 用萃取法提取胡萝卜素的实验中，要将胡萝卜进行粉碎和干燥的目是：           

                        ；过滤萃取液的目的是：                                 。胡萝卜素提取的萃取过程应采用          加热，因为有机溶剂都是易燃物。

胡萝卜素是一种广泛用于生产生活中的食用色素，可分别从胡萝卜或产生胡萝卜素的微生物体中提取获得，流程如下：
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（1）筛选产胡萝卜素的酵母菌R时，可选用稀释涂布平板法或平板划线法接种。采用平板划线法接种时需要先灼烧接种环其目的是         。 

（2）培养酵母菌R时，培养基中的蔗糖和硝酸盐可分别为酵母菌R提供   和    。 

（3）从胡萝卜中提取胡萝卜素时，干燥过程应控制好温度和     以防止胡萝卜素分解；萃取液浓缩前需进行过滤，其目的是                  ；萃取过程中还要在加热瓶口安装回流冷凝装置，目的是                           。 

（4）​          法可用于鉴定所提取的胡萝卜素，鉴定过程中需要用胡萝卜素标准品作为          。

请分析回答下列有关生物技术实践的问题：

（1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，倒平板时，需要等待平板冷却      后，将平板倒过来放置。微生物接种的方法，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法,后者是将菌液进行一系列的         ，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。菌落是在固体培养基上由              细胞繁殖而来的形态可见的子细胞群体。

（2）对月季进行组织培养时，适宜花药培养的时期是_______期，为确定花粉是否处于该时期，镜检时最常用的染色方法是_________。

（3）测定亚硝酸盐含量的原理是，在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与　　　　　　　生重氮化反应后，与N—1—萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料。

（4）用萃取法提取胡萝卜素的实验中，要将胡萝卜进行粉碎和干燥的目的是              ；得到的萃取液需要用             方法进行浓缩。