8.
利用PCR技术扩增目的基因,其原理与细胞内DNA复制类似(如图所示).图中引物a、b为单链DNA样品片段,它是子链合成延伸的基础.请回答有关问题:
(1)PCR扩增开始前,需要向离心管中加入的物质除了DNA样品,Taq酶 以及缓冲液之外,还需要加入
和
.
(2)A、B、C中属于退火的步骤是
,A过程的目的是
.
(3)C步骤温度为72℃时发挥作用的酶是
.
(4)从理论上分析,PCR技术利用DNA分子的
复制的方式,一个样品DNA分子经n次循环共需消耗引物a的数量为
.
(5)设计引物是PCR技术关键步骤之一.某同学设计的两组引物(引物对B只标注了部分碱基序列)都不合理(如表),请分别说明理由.
引物对A | P1:AACTGAAATCTAGCTATC |
P2:GTCCGACTAGTGGCTGTG |
引物对B | S1:3′-AACTG-CAGTT-5′ |
S2:3′-CAGTT-GATTA-5′ |
①引物对A中P
1和P
2的
(碱基对)含量差异较大,导致退火温度不一致.
②引物对B S
1局部碱基配对导致自身
而失效;S
1和S
2之间出现
而失效.
(6)获取目的基因的途径除上述外,还有另外两个途径是
、
.