​（5）如果利用上述方法培育出的蕃茄不具抗软化性状，经分子杂交技术检测，发现细胞内有抗PG存在，但检测不到mRNA2分子，可能原因是目的基因（抗PG）上游缺少___________。

下面是将乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白的基因HBsAg导入巴斯徳毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程及有关资枓：

资料1：巴斯德毕赤酵母菌可用培养基中甲醇作为其生活的唯一碳源，此时AOX1基因受到诱导而表达（5′AOX1和3′AOXl（TT）分别是基因AOX1的启动子和终止子）。

资料2：巴斯德毕赤酵母菌体内无天然质粒，所以改造出了图1所示的pPIC9K质粒用作载体，其与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，将目的基因整合于染色体中已实现表达。

资料3:限制酶酶切位点

（1）如果要将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，应在图2中HBsAg基因两侧的A和B位置接上_______限制酶识别序列，这样可避免质粒和目的基因自身环化。

（2）为确认巴斯德毕赤酵母茵转化是否成功，在培养基中应该加入卡拉霉素以便筛选，转化后的细胞中是否含有HBsAg基因，可以用___________方法进行检测。

（3）转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后，需要向其中加入___________以维持其生活，同时诱导HBsAg基因表达。   

（4）与大肠杆菌等细菌相比，用巴斯德毕赤酵母菌细胞作为基因工程的受体细胞，其优点是在蛋白质合成后，细胞可以对其进行___________并分泌到细胞外，便于提取。

（5）下图为HBsAg某DNA片段一条链的碱基排列顺序。其中图1的碱基排列顺序已经解读，其顺序是:GGTTATGCGT，请解读图2显示的碱基排列顺序：______________________。

如图是以二倍体水稻(2N=24)为亲本的几种不同育种方法示意图，回答下列问题：

（1）A～D表示的育种方法依据的原理是_________， 过程B常采用____________的方法来获取单倍体幼苗，从细胞的角度分析，其依据的生物学原理是__________。

（2）E方法获得所需品种成功率最低的原因是_____________，C和F过程常用一定浓度的________处理，其原理是___________________________。

（3）若亲本的基因型有以下四种类型：

①两亲本杂交，后代表现型为3︰1的杂交组合是_________________。

②选乙、丁为亲本，经A、B、C途径可培育出_______种纯合植物，该育种方法突出的优点是_____________________________。

科学家通过基因工程，成功培育出能抗棉铃虫的棉花植株——抗虫棉，其过程大致如图所示。

(1)细菌的基因之所以能“嫁接”到棉花细胞内，原因是 。

(2)上述过程中，将目的基因导入棉花细胞内使用了 法，这种导入方法较经济、有效。目的基因能否在棉株体内稳定维持和表达其遗传特性的关键是 。

(3)某棉农在食用该抗虫棉种子压榨的棉籽油炒芹菜后，出现鼻塞流涕，皮肤骚痒难忍症状。停用一段时间后这些症状会自然消失，该现象很可能是                。

(4)基因表达载体的构建目的是使目的基因在受体细胞中 ，并且可以__________________，使目的基因能够__________________。

下图所示为用农作物①和②两个品种分别培养出④⑤⑥⑦四个品种的过程。

（1）用①和②通过Ⅰ和Ⅱ过程培育出⑤的过程所依据的遗传学原理是______________。

（2）通过Ⅲ和Ⅴ培育出⑤的育种方法的优点是_______________________。

（3）由①和②通过Ⅰ、Ⅲ和Ⅴ过程培育出⑤的过程叫__________________，③培育出④过程叫________________，Ⅴ过程需要用___________________处理。

将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表。

请根据以上图表回答下列问题。

（1）在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是____________________ 。通过PCR技术扩增目的基因前，需要根据这两个基因的一段已知核苷酸序列来合成__________ 。

（2）PCR过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表1为根据模板设计的两对引物序列，图2为引物对与模板结合示意图。请判断哪一引物对需采用较高的退火温度？____________________。

（3）图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求？__________  。

（4）为将外源基因转入马铃薯，图1步骤⑥转基因所用的细菌B通常为____________________。

（6）对符合设计要求的重组质粒T进行酶切。假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列，对以下酶切结果作出判断。

①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到__________种DNA片断。

②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切，得到__________种DNA片断。

番茄的抗病（R）对感病（r）为显性，高秆（D）对矮秆（d）为显性，控制上述两对相对性状的基因分别位于两对同源染色体上．为获得纯合高秆抗病番茄植株，研究人员采用了如图所示的方法．

（1）在①处育种工作者常采用    的方法

（2）培养A生物方法叫做          ，③过程常用        处理A幼苗，该育种方法称      ，依据的原理是        ，最后培育出符合要求的植株所占比例为   。

（3）利用转基因技术培育的抗病植株，利用的是         原理，（能?否?）  定向改变生物的性状。④过程应用的技术为       。

（4）过程⑤“航天育种”方法获得变异类型的原理是       。

某植物花瓣中存在着三种色素，红色、黄色和蓝色，红色与蓝色混合呈现紫色，蓝色与黄色混合呈现绿色，缺乏上述色素的花瓣呈白色。两种色素的生化合成途径如下图所示。图中A、B、E代表酶；它们相应的基因可以用同一字母来表示，这些基因是独立遗传的。野生型的基因是显性，并且有编码酶的功能，隐性等位基因表示缺乏这种功能。

（1）该植物花色的遗传遵循_____________定律，相关基因对花色的控制是通过___________________________途径实现的。

（2 )若同时考虑三对等位基因，则能产生含红色色素的植株基因型有________种。

（3）如果用纯种紫花品系(甲)与另一纯种蓝花品系（乙）杂交，F1表现全为紫花，F2的表现型及比例为9紫色∶3绿色∶4蓝色。亲本基因型分别是____________________。F2紫花植株中能稳定遗传的比例占________。

（4）某花农只有下列三种纯合亲本AAbbee（黄花）、aaBBee（白花）、AAbbEE（绿花），想得到蓝花植株，可采用的育种方法是_______  _，该育种方法依据的主要原理是               。

（5）该植物的花易受害虫啃食，从而影响花的品质，为了改良该植物的抗虫性，通常从其他物种获得__________基因，将其与运载体结合，构建___________，然后导入该植物的体细胞中，经植物组织培养技术获得大量的转基因抗虫植株。