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            • 1. 回答下列与细菌培养相关的问题。
              (1)在细菌培养时,培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是______(填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”)。通常,制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH,其原因是______。硝化细菌在没有碳源的培养基上______(填“能够”或“不能”)生长,原因是______。
              (2)用平板培养细菌时一般需要将平板______(填“倒置”或“正置”)。
              (3)单个细菌在平板上会形成菌落,研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物,原因是______。
              (4)有些使用后的培养基在丢弃前需要经过______处理,这种处理可以杀死丢弃物中所有的微生物。
            • 2.
              将马铃薯去皮切块,加水煮沸一定时间,过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂,用水定容后灭菌,得到M培养基。
              回答下列问题:
              (1)M培养基着用于真菌的筛选,则培养基中应加入链霉素以抑制 ______ 的生长,加入了链霉素的培养基属于 ______ 培养基。
              (2)M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质,营养物质类型除氮源外还有 ______ (答出两点即可)。氮源进入细胞后,可参与台成的生物大分子有 ______ (答出两点即可)。
              (3)若在M培养基中用淀粉取代蔗糖,接种土壤滤液并培养,平板上长出菌落后可通过加入显色剂选出能产淀粉酶的微生物。加入的显色剂是该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是 ______ 。
              (4)甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量,在同一稀释倍数下得到以下结果:
              甲同学涂布了3个平板,统计的菌落数分别是110、140和149,取平均值133;
              乙同学涂布了3个平板,统计的菌落数分别是27、169和176,取平均值124。
              有人认为这两位同学的结果中,乙同学的结果可信度低,其原因是 ______ 。
            • 3.
              回答下列与酵母菌有关的问题:
              (1)分离培养酵母菌通常使用 ______ (填“牛肉膏蛋白胨”“MS”或“麦芽汁琼脂”)培养基,该培养基应采用 ______ 灭菌法灭菌。若将酵母菌划线接种在平板上,培养一段时间后可观察菌落,菌落的含义是 ______ 。
              (2)酵母菌液体培养时,若通入氧气,可促进 ______ (填“菌体快速增殖”“乙醇产生”或“乳酸产生”);若进行厌氧培养,可促进 ______ (填“菌体快速增殖”“乙醇产生”或“乳酸产生”)。
              (3)制作面包时,为使面包松软通常要在面粉中添加一定量的酵母菌,酵母菌引起面包松软的原因是 ______ 。
            • 4.
              酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半,可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养,这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母,并进行大量培养。如图所示为操作流程,请回答下列问题:

              (1)配制培养基时,按照培养基配方准确称量各组分,将其溶解、定容后,调节培养基的 ______ ,及时对培养基进行分装,并进行 ______ 灭菌。
              (2)取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中,在步骤③中将温度约 ______ (在25℃、50℃或80℃中选择)的培养基倒入培养皿混匀,冷凝后倒置培养。
              (3)挑取分离平板中长出的单菌落,按步骤④所示进行划线。下列叙述合理的有 ______ 。
              a.为保证无菌操作,接种针、接种环使用前都必须灭菌
              b.划线时应避免划破培养基表面,以免不能形成正常菌落
              c.挑取菌落时,应挑取多个菌落,分别测定酵母细胞中甲醇的含量
              d.可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度,获得甲醇高耐受株
              (4)步骤⑤中,为使酵母数量迅速增加,培养过程中需保证充足的营养和 ______ 供应。为监测酵母的活细胞密度,将发酵液稀释1000倍后,经等体积台盼蓝染液染色,用25×16型血细胞计数板计数5个中格中的细胞数,理论上 ______ 色细胞的个数应不少于 ______ ,才能达到每毫升3×109个活细胞的预期密度。
            • 5.
              在生产、生活和科研实践中,经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。
              回答下列问题:
              (1)在实验室中,玻璃和金属材质的实验器具 ______ (填“可以”或“不可以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。
              (2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法,与煮沸消毒法相比,这两种方法的优点是 ______ 。
              (3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒,其原因是紫外线能 ______ 。在照射前,适量喷洒 ______ ,可强化消毒效果。
              (4)水厂供应的自来水通常是经过 ______ (填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。
              (5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时,若压力达到设定要求,而锅内并没有达到相应温度,最可能的原因是 ______ 。
            • 6.
              某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3,供植物吸收和利用.回答下列问题:
              (1)有些细菌能分解尿素,有些细菌则不能,原因是前者能产生 ______ .能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源,原因是 ______ .但可用葡萄糖作为碳源,进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是 ______ (打出两点即可).
              (2)为了筛选可分解尿素的细菌,在配制培养基时,应选择 ______ (填“尿素”“NH4NO3”或“尿素+NH4NO3”)作为氮源,不选择其他两组的原因是 ______
              (3)用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4,其作用有 ______ (答出两点即可).
            • 7.
              苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中,对环境有严重危害.小明同学准备依据图1操作步骤,从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株.请回答下列问题:

              (1)酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水,其中可作为碳源的有 ______ .
              (2)将采集到的样品接种培养,苯酚用量应随转接次数增加而逐渐 ______ .以达到富集酚降解菌的目的.若图1平板中菌落过于密集,应进一步 ______ ,以便于菌落计数与分离.制备平板培养基时除了需要水、营养物质外,还必须添加 ______ .
              (3)图2为连续划线法示意图,在图中 ______  (填图中序号)区域更易获得单菌落.

              (4)采用比色测定法(使用苯酚显色剂)检测降解后的废水中苯酚残留量.先制作系列浓度梯度并进行显色反应,下表中1~5号比色管的苯酚浓度应分别为 ______ .
              管号 1 2 3 4 5 6
              苯酚浓度(mg/L) 1
              如果废水为50mg/L 苯酚溶液,降解后约有21%的苯酚残留,则需将残留液稀释 ______  (填序号:①5   ②10   ③20)倍后,再进行比色.
            • 8. (12分)[生物――生物技术实践]


              乳糖酶能够催化乳糖水解为葡萄糖和半乳糖,具有重要应用价值。乳糖酶的制备及固定化步骤如下:

              产乳糖酶微生物L的筛选 产乳糖酶微生物L的培养 乳糖酶的提取纯化 乳糖酶的固定化

              (1)筛选产乳糖酶的微生物L时,宜用          作为培养基中的唯一碳源。培养基中琼脂的作用是            。从功能上讲,这种培养基属于              。 

              (2)培养微生物L前,宜采用            方法对接种环进行灭菌。 

              (3)纯化后的乳糖酶可用电泳法检测其分子量大小。在相同条件下,带电荷相同的蛋白质电泳速度越快,说明其分子量越              。 

              (4)乳糖酶宜采用化学结合法(共价键结合法)进行固定化,可通过检测固定化乳糖酶的            确定其应用价值。除化学结合法外,酶的固定化方法还包括                             、离子吸附法及交联法等。

            • 9. 人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物的胃,可用来发酵处理秸秆,提高秸秆的营养价值。为了增强发酵效果,研究人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株,并对其降解纤维素能力进行了研究。请回答下列问题:


              (1)在样品稀释和涂布平板步骤中,下列选项不需要的是    (填序号)。

              ①酒精灯 ②培养皿 ③显微镜 ④无菌水

              (2)在涂布平板时,滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是                        

              (3)向试管内分装含琼脂的培养基时,若试管口粘附有培养基,需要用酒精棉球擦净的原因是          。 

              (4)刚果红可以与纤维素形成红色复合物,但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。研究人员在刚果红培养基平板上,筛到了几株有透明降解圈的菌落(见图)。图中降解圈大小与纤维素酶的      有关。图中降解纤维素能力最强的菌株是    (填图中序号)。 

              (5)研究人员用筛选到的纤维素酶高产菌株J1和J4,在不同温度和pH条件下进行发酵,测得发酵液中酶活性的结果见下图,推测菌株    更适合用于人工瘤胃发酵,理由是                   。 

            • 10. 有机农药苯磺隆是一种除草剂,长期使用会污染环境,研究发现,苯磺隆能被土壤中某些微生物降解、分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如图甲、乙所示.

              (1)微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、______四类,该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源,其原因是______.
              (2)与微生物培养基相比,植物组织培养的培养基常需添加生长素和______,这些植物激素一般需要事先单独配制成______保存备用.
              (3)纯化菌株时,通常使用的划线工具是______,划线的某个平板培养后,第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌,第二划线区域所划的第一条线上无菌落,其它划线上有菌落,造成划线无菌落可能的操作失误有______.
              (4)为探究苯磺隆的降解机制,将该菌种的培养液过滤离心,取上清液作图乙所示实验,该实验的假设是______,该实验设计是否合理?为什么?______.
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