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            • 1. 酵母菌通过基因突变能产生营养缺陷型菌株,由于营养缺陷型菌株丧失了合成氨基酸、嘌呤、嘧啶、维生素等的能力,不能在基本培养基中生长,必须在基本培养基中补充某些物质才能生长。如图简要表明了科学研究者用紫外线处理野生型啤酒酵母菌单倍体获得其营养缺陷型菌株的方法。

              根据以上叙述,回答下列问题:
              (1)若用紫外线处理二倍体酵母菌,除通过基因突变产生营养缺陷型菌株外,涉及的变异类型还可能有______;选用单倍体酵母菌的好处是______。
              (2)酵母菌细胞中质粒上的基因______(遵循、不遵循)孟德尔遗传规律,其主要原因是______。
              (3)BrdU是一种嘧啶类似物,酵母菌在繁殖过程中摄取BrdU并替代胸腺嘧啶脱氧核苷酸的位置掺入到新合成的DNA链中。含BrdU的DNA的酵母菌因其比正常的DNA更容易被紫外线破坏而死亡,不繁殖的酵母菌由于不能利用BrdU,其DNA对紫外线不敏感而存活下来。若图中的营养缺陷型是甘氨酸营养缺陷突变型,请利用上述原理将突变型菌株从野生型菌株中筛选出来并大量繁殖(要求:写出完整的实验步骤)。______。
            • 2. 生物柴油是用动物植物油脂或脂肪酸与甲醇酯化合成的脂肪酸甲酯,是一种可再生的清洁能源。请回答下列相关问题:
              (1)生物柴油产业推广的难点之一在于动植物油脂原料成本较高,所以科研人员将寻找原材料的目光投向了富含脂肪酸的微藻,以下是从微藻中提取脂肪酸的简要流程:

              ①因脂肪酸具有______的性质,故选用有机溶剂萃取法进行提取。
              ②溶剂浸提之前需将材料混干的原因是______。
              (2)传统生产生物柴油是用酸或碱进行催化,会对环境造成污染。科研人员欲分离筛选能产生催化该反应的脂肪合成酶的微生物,用生物酶法生产生物柴油。
              ①自然界中产脂肪合成酶的微生物较少,应在______的环境取土样,在将样品稀释涂布到固体培养基上分离纯化前可先进行选择(富集)培养以达到______的目的。
              ②由于反应物甲醇可以使蛋白质变性而影响催化效率,要得到酶活性较高的菌种,可以在培养基中添加一定浓度的______,从培养基的用途看,这属于______培养基。
              ③分离纯化的菌种还要发酵培养检测______以确定其经济价值。
            • 3.
              据报道,某地空气样本中检测出A、B、C 3种抗生素的耐药性基因.只有存在于某种活菌中的耐药性基因才能感染人体.为研究此地空气中是否存在这些耐药性活菌,某研究小组做了以下实验,步骤如下.
              ①配置培养基并灭菌;
              ②制作无菌平板,并收集、培养空气中的活菌;
              ③对步骤②得到的活菌进行分离纯化;
              ④设置若干实验组和对照组,进行相关操作;
              ⑤将各组平板置于适宜温度的恒温箱中培养一段时间,观察菌落的生长情况.
              回答下列问题:
              (1)步骤①中的灭菌方法是 ______ .
              (2)步骤③中接种的方法是 ______ .
              (3)若步骤②中得到的菌落类型有5种,则步骤④中需要设计至少 ______ 个实验组,对实验组的操作是 ______ .
              (4)若将所得菌落接种到含有 ______ 培养基中,形成的菌落呈 ______ 色,则表明可能存在大肠杆菌.从功能角度分析此培养基属于 ______ 培养基.
            • 4.
              某实验小组对酸奶中乳酸菌的数量进行了测定,取6支灭菌的试管,分别加入9mL灭菌的生理盐水,标号为A1、A2、A3、A4、A5、A6,吸取1mL酸奶样液加入试管A1中并摇匀,然后另取一支吸管从A1中吸取1mL容液,加入A2中,依此类推,最后从试管A6中取0.1mL样液进行涂布计数,涂布三个平板,其菌落数分别为251、265、276个.请回答下列问题:
              (1)培养乳酸菌除了必要的营养物质外,还需在培养基中添加 ______ .对培养皿灭菌的常用方法是 ______ .
              (2)倒平板时培养基的温度不能太低,原因是 ______ ;待平板冷凝后,要将平板倒置,其目的是 ______ .
              (3)该实验小组对乳酸菌接种所采用的方法是 ______ .根据三个平板中菌落数,可推测原酸奶中乳酸菌的浓度为 ______ 个/mL.
              (4)为了使测量结果更加准确,该实验对照组的设置是 ______ .
            • 5.
              国家标准规定每毫升酸奶产品中乳酸菌菌数不得低于1×106.为了解某酸奶中的乳酸菌含量是否达到国家标准,某兴趣小组进行了如下实验,请回答下列问题:
              (1)制备培养基:培养基的碳源为 ______ (填“含碳无机物”或“含碳有机物”).检测培养基灭菌是否合格的方法是 ______ .
              (2)样品稀释:先将样品稀释10倍,可用无菌移液管吸取25mL酸奶样品加入盛有 ______ mL无菌水的三角瓶中,使样品与水充分混匀.然后进行系列稀释操作,得到稀释至106、107、108倍的样品.
              (3)培养与统计:吸取不同稀释度的样品各1mL,分别置于不同培养皿内,加入适宜温度的溶化状态的培养基,使之混合均匀,冷却成平板.每个稀释度做3个重复.在适宜条件下培养一段时间后,对平板的菌落数进行统计,结果如表:
              稀释度(倍) 106 107 108
              平板 1 2 3 1 2 3 1 2 3
              平板菌落数(个) 432 421 445 78 67 74 9 6 8
              为了保证结果准确,应选择上述稀释度为 ______ 倍的平板菌落数作为统计结果,计算出样品中每毫升乳酸菌数为 ______ .
              (4)测定微生物的数量常采用稀释涂布平板法,其统计的数值往往比实际数目 ______ ,原因是 ______ .
            • 6.
              有人尝试制备始旋链霉菌(能生产普那霉素的一种原核放线菌)的原生质体,并利用其孢子和原生质体进行选育普那霉素高产菌株的实验.采用酶解法制备始旋链霉菌原生质体时,先要明确酶解时间与原生质体制备效果间的关联.探究步骤如下:
              第1步:取生长旺盛的始旋链霉菌菌丝,酶解后用一定量的缓冲液稀释后涂布在平板上,30℃培养7天后,统计菌落数.
              第2步:计算时间对原生质体制备和再生的影响,绘制成下图1所示曲线.
              请据图回答:

              (1)本实验所用的酶,不适用于制备 ______ 的原生质体.
              A.大肠杆菌细胞  B.番茄叶肉细胞 C.酵母菌
              (2)鉴定原生质体制备效果的常见方法是将部分原生质体放在 ______ (“等渗”、“高渗”或“低渗”)溶液中,观察其形态变化.而原生质体的计数统计常借助光学显微镜、盖玻片和 ______ 等光学仪器.
              (3)上述实验的第1步中,酶解后的稀释必须用缓冲液的原因是 ______ ,若未经稀释,直接涂布可能造成的结果是 ______ .
              (4)根据上图1可见,随着酶解时间增加,原生质体的再生率变化趋势是 ______ .结合酶解时间对原生质体制备率和再生率的影响,应当选择的最佳酶解时间约为 ______ min.
              (5)用紫外线分别处理始旋链霉菌孢子、原生质体后,统计各组菌株的普那霉素产量,结果如上图2.诱变后效果最好的是丙组,可能的原因是 ______ .
            • 7.
              回答下列有关生物技术实践的问题.
              (1)PCR的反应过程包括 ______ 三步.整个PCR反应过程中需要适宜的温度和酸碱度,前者由PCR仪自动控制,后者需靠 ______ 来维持.
              (2)培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了 ______ 和 ______ .除此之外,培养基还必须含有基本成分是 ______ 和 ______ .对培养基进行灭菌,应该采用的方法是 ______ .
              (3)某同学尝试微生物接种的操作,其中一个平板经培养后的菌落分布如图所示.该同学的接种方法是 ______ ;推测该同学接种时可能的操作失误是 ______ .
            • 8.

              (每空3分,24分)根据课本所学回答下列问题。

              (1)在大肠杆菌培养过程中,要添加的营养成分主要是_________、___________和__________等条件。

              (2)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数,要想使所得估计值更接近实际值,除应严格操作、多次重复外,还应保证待测样品稀释的_________。 

              (3)通常,对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的____________。 

              (4)培养大肠杆菌时,在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是:将____________的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间,观察培养基____________。

              (5)若用大肠杆菌进行实验,使用过的培养基及其培养物必须经过_______处理后才能丢弃,以防止培养物的扩散。 

            • 9.
              水稻纹枯病是一种真菌性病害,在我国长江流域和南方的一些省区居水稻病害之首.土壤中某些拮抗微生物与水稻纹枯菌共培养时会形成抑菌圈,为水稻纹枯病生物防治提供了重要依据.科研人员进行了以下研究,请回答相关问题:
              (1)筛选菌株
              水稻纹枯菌的拮抗微生物可从水稻田采集水稻组织或 ______ 进行筛选,将所取样品每份称取5g放入液体培养基中培养24h后,取适量培养液涂布于琼脂平板上,培养5天后,挑选形态不同的 ______ ,对其进行编号.然后挑取少许菌株分别接种于长满水稻纹枯菌的琼脂平板上,培养3天后,观察纹枯菌的生长,根据 ______ 选出某理想菌株,编号为T4.
              (2)鉴定菌株T4所属的细菌类型
              提取菌株T4基因组DNA,扩增其16S rDNA(能体现不同菌属之间的差异,长度接近1000个碱基对).已知PCR扩增过程中,耐高温的DNA聚合酶合成子链的效率约为每分钟形成1000个磷酸二酯键,则对PCR扩增仪进行程序设定时,应将每轮循环的延伸时间定为 ______ ,对扩增产物 ______ 后确定该菌株所属细菌类型.
              (3)探究菌株T4的生长和抑菌活性物质产生的最适条件
              研究小组将菌株T4的单菌落接种至液体培养基中,振荡培养,分别于不同起始 pH、不同培养温度下测定细菌的生长量和抑菌效果,其中细菌生长量测定采用分光光度法,吸光度(OD值)和样本溶液浓度成正比.本实验于波长为640nm处记录菌液的吸光度(OD640),得到如下曲线:

              由图可知,菌株的最适生长条件为: ______ ,与其抑菌活性物质产生的最适条件 ______ .(一致/不一致)
              (4)菌种保存
              为了长期保存菌株T4,可在3mL的甘油瓶中,装入1mL甘油后 ______ 处理,再将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中,放在冷冻箱中长期保存.
            • 10.
              下表是某种培养基的成分,据表回答:
              葡萄糖  NH4NO3  K2HPO4  KH2PO4  NaCl  MgSO4  Fe2SO4  CaCl2  H2O
               10g  5g  30g  10g  0.01g 0.5g   03g  5g  1000ml
              (1)该培养基用于培养微生物,营养物质可分 ______ 类.培养的微生物.其同化作用类型是 ______ .
              (2)如果用于培养乳酸杆菌,还需要添加 ______ .
              (3)如果用于培养霉菌,需将培养基的PH调至 ______ 性,培养细菌需将pH调至 ______ 性.
              (4)对培养基进行灭菌,应该采用的方法是 ______ .如果要观察菌落,需要添加 ______ .
              (5)若培养基中加人伊红美蓝,可以用于检测 ______ 细菌,这种培养基被称为 ______ 培养基.
              (6)植物组织培养基时,常用的培养基是 ______ 培养基.这时,需要将上述培养基中的葡萄糖换成 ______ ,另外添加其他有机物等,还常常需要添加 ______ .
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