[生物——选修1：生物技术实践]

下图是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，据图回答：

（1）细菌培养基的成分一般都含有碳源、水、________、________四类，该实验所用的选择培养基只能以________作为唯一氮源，其原因是________。鉴别培养基还需添加________作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成________色。

（2）统计样品中活菌数目常用的方法是________：在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为10⁵的土壤样品溶液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191，每毫升土壤样品溶液中的细菌数量为________×10⁸个；与血细胞计数板相比，此计数方法测得的细菌数目较________。

（3）纯化菌株时，通常使用的划线工具是________。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有________（需答两条）。

为了调查某城市自来水的水质状况，某研究小组测定了自来水水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：

(1) 该小组想检测水样中的活细菌含量。一般运用                培养基进行微生物的培养，在制备培养基从物理性质上属于       培养基；该培养基的制备过程是            

            。如果你想在涂布接种某种微生物前，随机取了若干灭菌后的空白固体培养基，在适宜的条件下培养了一段时间，若空白培养基出现了菌落。请分析出现菌落的原因(写出二个)①                           ， ②                          。

(2) 培养基灭菌后，将1mL水样稀释1000倍，在3个平板上用涂布法分别接入0．1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为51、50和49。据此可得出每升水样中的活菌数为            。

(3) 该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，每次划线之前都要灼烧接种环，目的是                              的菌种，使下次划线的菌种直接来源于           。

（1）微生物的分布：微生物主要分布在富含                 的土壤表层；不同微生物对pH值的要求不同，细菌常生活在                 性的环境中。

（2）微生物的消毒和灭菌：在菊花组织培养中，对外植体常用                        和氯化汞进行消毒；在微生物培养中，对培养基常用                   方法进行灭菌。

（3）微生物的接种：微生物接种的方法很多，最常用的是               和             。

（4）微生物的计数：运用活菌计数法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是                                                              。

（5）微生物的鉴定：为筛选出纤维素分解菌，应向培养基中加入                染料，将呈           反应，再依据培养基中是否产生                   来筛选纤维素分解菌；为检测尿素分解菌的存在与否，在以尿素为唯一氮源的              （选择、鉴别）培养基中加入              指示剂，如果存在尿素分解菌，则指示剂将变红色。

实验原理：农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较多。将用表土制成的稀泥浆，接种到某特定的选择培养基上进行培养。在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖。用这种方法，可以将自生固氮菌与其他细菌分离开来。

材料用具：农田的表层土壤、某特定选择的培养基、牛肉膏蛋白胨培养基，盛9 mL无菌水的试管、无菌吸管、无菌涂布器、无菌培养皿，盛90 mL无菌水的锥形瓶、恒温箱。

（1）方法步骤：
①倒平板
     分别将        培养基（填写题中特定选择培养基的具体名称）、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板，应在酒精灯火焰旁操作。
②制备土壤稀释液
    取土样 10 g加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。用无菌吸管吸取上清液1 mL，转至9 mL的无菌水的大试管中，依次稀释到10⁷稀释度。
③涂布
    按照由10⁷～10³稀释度的顺序分别吸取0.1 mL进行平板涂布，每个稀释度下，特定的选择培养基上应至少涂布        个平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布        个。
④培养
    放入恒温箱内，在28～30 ℃下培养3～4天。
⑤细菌的计数
    当菌落数目稳定时，选取菌落数在        的平板进行计数。如果测试的平均值为50，则每克样品中的菌落数是           。(稀释度是10⁵)

（2）预期结果：
相同稀释度下，牛肉膏蛋白胨平板上的菌落数        (填“多于”或“少于”)特定选择培养基上的数目。并说明原因。                                         （2分）

(1)此培养基能否用于植物组织培养？_______，理由是__________。
(2)培养基中加入尿素的目的是_______，这种培养基属于_______培养基。
(3)转为固体培养时，常采用_________法接种，获得单菌落后继续筛选。
(4)下列材料或用具中：①培养细菌用的培养基与培养皿；②玻璃棒、试管、锥形瓶和吸管；③实验操作者的双手。需要灭菌的是_________；需要消毒的是____________(填序号)。
 (5)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入_________，细菌体内的___________将尿素分解为氨，pH增高，使指示剂变红色。

下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方，请根据表格回答。

（1）从生态系统的成分上看，大肠杆菌属于_________。

（2）若根据用途划分，该培养基属于__________（填“选择”或“鉴别”）培养基。若要用上述培养基来筛选出土壤中的尿素分解菌，培养基的营养成分必需怎样更改？

_________________，并用__________作为指示剂。

（3）在微生物培养的过程中，为防止杂菌污染，需要对培养基和培养皿进行______；操作者的双手需要进行清洗和_______________。

（4）

图1和图2是培养某细菌的结果图，其对应的接种方法分别是：____________和____________，这两种方法接种后培养基上都可以得到由单个细胞繁殖所形成的________。图1所用的接种方法可用来对活菌进行计数。此外，测定微生物数目的另一种方法是_____________。

（5）以下微生物发酵生产特定产物时，所利用的主要微生物的细胞结构与大肠杆菌较相似的有__________。

A．制作果酒             B．由果酒制作果醋         C．制作泡菜              D．制作腐乳

（1）苯胺是致癌物质，土壤中有分解苯胺的异养型细菌，此培养基中的成分X除了为目的菌提供能源外，还能提供         （写全得分），该培养基从作用看属于        培养基。制备固体培养基时调节PH在           步骤后；对接种环进行灭菌的是方法                    。

（2）右上图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图。则获得图B效果的接种方法是              。运用A所示接种方法统计的菌落常常比活菌的实际数目        ，其原因是                               。在探究“酵母菌种群数量变化” 实验已知每个计数室由25×16＝400个小格组成，容纳液体的总体积为0.4mm³，观察到右上图中该计数室所示a、b、c、d、e  5个中格共有蓝藻80个，则1ml样液中约有蓝藻             个

（3）在以尿素为唯一氮源的培养基中加              可初步鉴定该种细菌能够分解尿素，原理用方程式表示为                                          .

图1
(1)分解尿素的细菌能分泌_______酶，能将尿素分解成________。

(2)培养基中为“目的菌”生长提供氮源和碳源的物质分别来自________和________。

(3)图中将细菌转到固体培养基上时，应采用___     _____法接种以获得单个菌落。初步筛选出来的菌种还需要用生化的方法作进一步的鉴定，鉴定方法是检测初步筛选目的菌种培养基的pH，若pH________(降低/不变/升高)，说明该菌种能够分解尿素。

(4)微生物的计数：运用活菌计数法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是__________________________。

(5)微生物的鉴定：要从土壤样液中筛选出能降解除草剂(一种难以降解的含氮有机物)的细菌。已知：该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明。设计培养基配方时，从用途来看，除加入必需的营养成分外，还应____________；从物理性质来看，还应加入____________。接种培养后，依据培养基中是否产生____________来筛选能降解该除草剂的细菌。